陳 芳，顧玉娣 ，余家樹(shù) ，常彩琴，嚴(yán)品華，徐恩萍

（1.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州 310000；2.浙江大學(xué)司法鑒定中心，浙江 杭州 310000）

1 案 例

1.1 簡(jiǎn)要案情

當(dāng)事人王某懷疑孩子為其妻子與父親所生，攜帶本人、孩子生母及孩子血樣來(lái)本中心，要求鑒定自己與孩子之間是否存在親生血緣關(guān)系。經(jīng)常染色體STR分型檢測(cè)和Y-STR分型檢測(cè)之后無(wú)法排除王某與孩子之間的親生血緣關(guān)系，因此補(bǔ)送王某父親樣本進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 檢驗(yàn)方法

1.2.1 DNA提取

采用常規(guī)Chelex-100法[1]分別提取王某、王某父親、孩子母親與孩子血樣DNA，采用人類(lèi)STRtyper-21G擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒、STRtyper-10G試劑盒（寧波海爾施基因科技有限公司）進(jìn)行27個(gè)常染色體STR基因座和Amelogenin性別基因座分型檢測(cè)，采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20Y［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］進(jìn)行20個(gè)Y-STR基因座的分型，采用Investigator DIPplex試劑盒（德國(guó)QIAGEN公司）進(jìn)行30個(gè)常染色體InDel位點(diǎn)檢測(cè)，擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序按相關(guān)操作手冊(cè)進(jìn)行。

1.2.2 STR分型

采用9700型PCR儀（美國(guó)AB公司）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，使用3130xl基因分析儀（美國(guó)AB公司）進(jìn)行電泳分離，使用GeneMapper?ID v3.2.1軟件（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）處理電泳數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程參照操作手冊(cè)。

1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

1.3.1 常染色體STR基因分型及Y-STR基因分型結(jié)果

對(duì)27個(gè)常染色體STR基因座（D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、vWA、D8S1179、TPOX、Penta E、TH01、D12S391、D2S1338、FGA、D1S1656、D18S1364、D13S325、D2A1772、D11S2368、D22-GATA198B05、D8S1132、D7S3048）和 Amelogenin 性別基因座進(jìn)行STR分型檢驗(yàn)，其中王某與孩子在D19S433、D3S1358基因座不符合遺傳規(guī)律：王某D19S433基因座分型為13/13，孩子D19S433基因座分型為14/16.2；王某D3S1358基因座分型為15/17，孩子D3S1358基因座分型為14/16，且不符合等位基因之間均只存在增加或者減少一個(gè)重復(fù)單位差異的遺傳定律。王某父親與孩子在27個(gè)常染色體STR基因座均符合遺傳定律。在20個(gè)Y-STR基因座的分型檢測(cè)中，王某、王某父親及孩子Y-STR分型結(jié)果均一致。

1.3.2 30個(gè)常染色體InDel位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果

對(duì)王某及孩子樣本進(jìn)行30個(gè)常染色體InDel位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1～2。王某與孩子在D40、D125、D64三個(gè)InDel位點(diǎn)不符合遺傳規(guī)律。王某父親與孩子在30個(gè)常染色體InDel位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果均符合遺傳規(guī)律。

圖1 王某（上）與孩子（下）D40 InDel位點(diǎn)不符合遺傳規(guī)律

圖2 王某（上）與孩子（下）D125、D64位點(diǎn)不符合遺傳規(guī)律

2 討 論

本案例經(jīng)常染色體STR分型檢測(cè)，王某與孩子在D19S433、D3S1358基因座不符合遺傳規(guī)律，且不符合等位基因之間均為增加或者減少一個(gè)重復(fù)單位差異的遺傳定律，無(wú)法給出明確鑒定結(jié)論。運(yùn)用Investigator DIPplex試劑盒進(jìn)行30個(gè)常染色體InDel位點(diǎn)補(bǔ)充鑒定，在30個(gè)常染色體InDel位點(diǎn)基因座中，有三個(gè)InDel位點(diǎn)不符合遺傳規(guī)律。結(jié)合常染色體STR分型結(jié)果及InDel分型結(jié)果，可以排除當(dāng)事人王某與孩子之間存在親生血緣關(guān)系。

日常檢驗(yàn)鑒定中，受理案件時(shí)，一定要充分理解被鑒定人的委托要求，特別是對(duì)一些爭(zhēng)議父與生父存在近親血緣關(guān)系的案例[2]。此類(lèi)案件，孩子生母一定要參與，涉案的被鑒定父親和懷疑父親盡可能都參與鑒定。本案中，如果事先沒(méi)有了解被鑒定人的委托要求，僅僅當(dāng)成普通的三聯(lián)體親子鑒定，在進(jìn)行27個(gè)常染色體STR檢測(cè)之后，出現(xiàn)2個(gè)基因座位點(diǎn)不符合遺傳規(guī)律，均為增加或者減少一個(gè)重復(fù)單位的差異，且累積親權(quán)指數(shù)（cumulative paternity index，CPI）大于10000，這種情形很容易給出錯(cuò)誤的鑒定意見(jiàn)。在亂倫親子鑒定中，增加檢測(cè)常染色體STR比增加檢測(cè)性染色體STR更有效，在常染色體STR不能滿足鑒定要求時(shí)，也可以補(bǔ)充InDel位點(diǎn)和SNP位點(diǎn)進(jìn)行補(bǔ)充鑒定。

InDel是基因組等位基因中插入或者缺失長(zhǎng)度不等的小DNA片段[3]，在個(gè)體分布上呈現(xiàn)長(zhǎng)度多態(tài)性，因而可以作為DNA的分子標(biāo)記用于祖先遺傳信息、群體遺傳結(jié)構(gòu)等分析及法醫(yī)物證學(xué)鑒定。作為新一代遺傳標(biāo)記，InDel兼具STR和SNP的優(yōu)點(diǎn)。InDel標(biāo)記位點(diǎn)遍布基因組[4]，數(shù)量多、突變率低、片段短，適用于高度降解樣本的檢測(cè)，并可通過(guò)DNA毛細(xì)管電泳分型技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行分析，易于普及，在群體中有較好的遺傳多態(tài)性，可作為特殊檢案有效的補(bǔ)充鑒定工具。