分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用

李萍

摘要：目的：探究分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選擇我院自2016年3月至2017年9月收集80例微生物標(biāo)本（包含21例流感病毒、17例幽門(mén)螺桿菌病毒、20例支原體病毒、22例金黃色葡萄桿菌毒素基因）作為研究對(duì)象，將所有標(biāo)本分成均等的兩份，一份采用傳統(tǒng)檢測(cè)方法進(jìn)行檢驗(yàn)（設(shè)為對(duì)照組），另一份采用分子生物學(xué)技術(shù)方法進(jìn)行檢驗(yàn)（設(shè)為研究組），比較兩組檢測(cè)方式的檢出率。結(jié)果：研究組對(duì)流感病毒的檢出率（95.2%）明顯高于對(duì)照組（71.4%），研究組對(duì)幽門(mén)螺桿菌病毒的檢出率（100.0%）明顯高于對(duì)照組（82.3%），研究組對(duì)支原體病毒的檢出率（100.0%）明顯高于對(duì)照組（70.0%），研究組對(duì)金黃色葡萄桿菌毒素基因的檢出率（95.5%）明顯高于對(duì)照組（77.3%），兩組對(duì)比差異顯著（P<0.05）。結(jié)論：分子生物學(xué)技術(shù)能有效提升微生物檢驗(yàn)檢疫的準(zhǔn)確率，因此其具有良好的檢驗(yàn)檢疫價(jià)值。

關(guān)鍵詞：分子生物學(xué)技術(shù)；檢驗(yàn)檢疫；應(yīng)用

分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)是建立在核酸生化基礎(chǔ)上的現(xiàn)代化檢測(cè)技術(shù)和研究手段，通過(guò)對(duì)

生物大分子核酸及核酸表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)功能、結(jié)構(gòu)、相互之間的作用和關(guān)系進(jìn)行研究，其能有效為臨床疾病的診斷和評(píng)估、病原微生物檢驗(yàn)、食品安全檢測(cè)以及寄生蟲(chóng)病防治提供重要的檢驗(yàn)依據(jù)，因此被廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、遺傳學(xué)、醫(yī)學(xué)以及食品檢驗(yàn)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域的檢驗(yàn)檢疫中。除此之外，其還具有操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)以及靈敏度高等多種優(yōu)勢(shì)，因此其已成為現(xiàn)代臨床和免疫檢驗(yàn)最重要的檢測(cè)手段[1]。本文主要探究了分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

一、資料與方法

（一）一般資料

選擇我院自2016年3月至2017年9月收集80例微生物標(biāo)本作為研究對(duì)象，其中21例為流感病毒、17例幽門(mén)螺桿菌病毒、20例支原體病毒、22例金黃色葡萄桿菌毒素基因，分別對(duì)其采用傳統(tǒng)檢測(cè)方法和分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

（二）方法

將所有標(biāo)本分成均等的兩份，一份采用細(xì)菌培養(yǎng)鑒定、免疫測(cè)定及血清學(xué)檢驗(yàn)等傳統(tǒng)的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，另一份采用以聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)為基礎(chǔ)的分子免培養(yǎng)方法和核酸檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，通過(guò)在病原體中加入特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增檢驗(yàn)。

（三）觀察指標(biāo)

觀察和統(tǒng)計(jì)兩種檢測(cè)方式對(duì)微生物標(biāo)本病原體的檢出率。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

研究組對(duì)流感病毒的檢出率（95.2%）明顯高于對(duì)照組（71.4%），研究組對(duì)幽門(mén)螺桿菌病毒的檢出率（100.0%）明顯高于對(duì)照組（82.3%），研究組對(duì)支原體病毒的檢出率（100.0%）明顯高于對(duì)照組（70.0%），研究組對(duì)金黃色葡萄桿菌毒素基因的檢出率（95.5%）明顯高于對(duì)照組（77.3%），兩組對(duì)比差異顯著（P<0.05），見(jiàn)表1。

三、討論

在人們生存的各個(gè)領(lǐng)域均具有生物技術(shù)的存在，例如水質(zhì)、空氣、食品、疾病檢測(cè)等，而了解和評(píng)估水質(zhì)、空氣、食品的構(gòu)成成份或質(zhì)量好壞以及明確疾病的類(lèi)型和分型均需依賴(lài)于微生物檢測(cè)技術(shù)的支持。以往對(duì)微生物檢驗(yàn)和鑒定都是采用大量的特征試驗(yàn)進(jìn)行分離純化，這樣的檢驗(yàn)方式不僅操作繁雜和需耗費(fèi)較多的人力、時(shí)間，同時(shí)其還難以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果易出現(xiàn)誤差，從而難以保證被檢測(cè)食品的安全以及可能造成疾病延誤診斷與治療。而隨著檢驗(yàn)檢疫技術(shù)的不斷改革與發(fā)展，現(xiàn)代臨床與檢驗(yàn)免疫中心已引進(jìn)了分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，分子生物學(xué)技術(shù)包含了聚合酶鏈反應(yīng)、基因克隆和重組、核酸雜交法、變性凝膠電泳及生物芯片等多種現(xiàn)代化的檢驗(yàn)技術(shù)，其不僅能有效縮短微生物分離鑒定的速度，同時(shí)還能使微生物檢驗(yàn)檢疫達(dá)到全面、快速、微量、準(zhǔn)確等檢驗(yàn)要求，因此該項(xiàng)檢驗(yàn)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于各種微生物的檢驗(yàn)檢疫中。

在微生物檢驗(yàn)中，屬聚合酶鏈反應(yīng)、生物芯片及核酸雜交法等分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用最為廣泛，其中聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)又包含了普通聚合酶鏈反應(yīng)、巢式聚合酶鏈反應(yīng)、多重聚合酶鏈反應(yīng)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、聚合酶鏈反應(yīng)單鏈構(gòu)象多態(tài)性、RAPD技術(shù)、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性、重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、隨機(jī)擴(kuò)增的多態(tài)性DNA技術(shù)等多個(gè)類(lèi)別，這種類(lèi)型的檢測(cè)技術(shù)主要是通過(guò)將多種特異性引物加入到病原體中，從而避免了分離純化的操作，其不僅能對(duì)多種病原體進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，同時(shí)還能準(zhǔn)確鑒定出病原體的感染類(lèi)型[2]。例如，本次研究中所檢測(cè)的流感病毒，通過(guò)在病原體標(biāo)本中加入特異性引物擴(kuò)增，可依據(jù)擴(kuò)增片段的大小判定流感屬于什么類(lèi)型。另外，對(duì)于病毒重疊感染的病原體，其能通過(guò)對(duì)病原體的霍亂、痢疾和傷寒指征進(jìn)行快速檢測(cè)，從而明確疾病的感染分型。而對(duì)于傳統(tǒng)檢測(cè)方式難于培養(yǎng)的微生物或生長(zhǎng)緩慢的病毒進(jìn)行鑒定，可以應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)聯(lián)合分子熒光檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于包括死菌在內(nèi)的菌體進(jìn)行檢驗(yàn)，采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)鑒定只需挑取菌體，無(wú)需提取核酸，因此能有效加快檢測(cè)的速率。

食品檢測(cè)安全也是人們重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容之一，食品中的微生物主要包含了金黃色葡萄桿菌毒素基因、頑固性梭狀芽孢桿菌、腸毒素大腸桿菌及單核細(xì)胞增多性李斯特氏菌等，在以往的檢測(cè)過(guò)程中，多采用血清學(xué)檢驗(yàn)方法和細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法，如凝集反應(yīng)、細(xì)菌分離培養(yǎng)等方式進(jìn)行檢測(cè)，這兩種檢測(cè)方式操作均較為繁瑣和檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，從本次的檢驗(yàn)結(jié)果也可以看出其檢測(cè)的準(zhǔn)確率并不高，而采用分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，將能有效避免上述缺陷和問(wèn)題發(fā)生，采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)通過(guò)設(shè)計(jì)金黃色葡萄桿菌毒素基因引物，不僅具有較高的敏感性和特異性，同時(shí)還能在較短時(shí)間內(nèi)檢出葡萄球菌毒株。另外對(duì)于食品中一些

常見(jiàn)的病原菌，如發(fā)酵食品中的益生菌、奶酪表面的微生物、酒中的乳酸菌等，可采用核酸探針技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于食品的營(yíng)養(yǎng)成分、微生物種群以及對(duì)食品安全、質(zhì)量、衛(wèi)生進(jìn)行監(jiān)測(cè)，還可采用基因芯片技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，其是一種基于基因功能和表達(dá)的最新分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)。

本次研究結(jié)果顯示，分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在對(duì)多種微生物病毒和食品檢測(cè)指標(biāo)中的檢出率均明顯高于傳統(tǒng)檢測(cè)方法，說(shuō)明了分子生物學(xué)技術(shù)不僅可以應(yīng)用于多種領(lǐng)域的檢驗(yàn)檢驗(yàn)，并且與傳統(tǒng)的檢測(cè)方式相比，分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)對(duì)微生物的檢測(cè)敏感度和特異性更強(qiáng)。

綜上所述，分子生物學(xué)技術(shù)能有效提升微生物檢驗(yàn)檢疫的準(zhǔn)確率，因此其具有良好的檢驗(yàn)檢疫價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]章志建，潘虹.分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42（03）：526-527+536

[2]王金鳳，王建昌，付琦，等.分子生物學(xué)技術(shù)在出入境動(dòng)物檢疫中的應(yīng)用[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014，（17）：216-218