南敏倫 王 雪 趙昱瑋 司學(xué)玲 宿艷霞 赫玉芳*

（1 吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130012；2 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林 長春 130118；3 修正藥業(yè)集團(tuán)長春高新制藥有限公司，吉林 長春 130012）

側(cè)柏葉為柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis（L.）Frcnco的干燥枝梢和葉[1]。收載于《中國藥典》、《吉林省中藥材炮制標(biāo)準(zhǔn)》，具有止血、化痰止咳，生發(fā)烏發(fā)的功效，側(cè)柏葉苦寒，多服、久服后出現(xiàn)頭暈、惡心、胃部不適、食欲減退等反應(yīng)，并且少數(shù)人出現(xiàn)浮腫、皮疹等過敏性反應(yīng)，適用人群有限[2]。為解決此問題，取側(cè)柏葉之清降，折其上逆之勢，用干姜的溫守中陽，使脾能統(tǒng)血，氣能攝血。炮制后清降溫中并行，寒熱同用，相行而不悖，屬溫陽攝血。所以，側(cè)柏葉（姜炙）較生側(cè)柏葉具有更廣泛的適用范圍。為了保證炮制工藝的穩(wěn)定性、可行性，本研究以蕓香苷、槲皮苷及楊梅素含量為指標(biāo)，以飲片的外觀、蕓香苷、槲皮苷及楊梅素含量為依據(jù)進(jìn)行姜側(cè)柏葉的炮制工藝研究。

1 材 料

1.1 儀器：Agilent 1220高效液相色譜儀（紫外檢測器）；KQ-250B超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Sartorius BS 124S（賽多利斯）；ST60紅外測溫儀（美國雷泰RAYTEK）。

1.2 試藥：側(cè)柏葉購于吉林宏檢大藥房，產(chǎn)地吉林；生姜購于長春，產(chǎn)地山東；經(jīng)吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院趙全成研究員鑒定側(cè)柏為柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis（L.）Frcnco的干燥枝梢及葉；生姜為姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鮮根莖；對照品槲皮苷（111538-201606）、蕓香苷（100080-201610），為含量測定用，購自中國食品藥品檢定研究院。楊梅素為自制對照品，含量為99.5%。甲醇、乙腈為色譜純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 姜側(cè)柏葉的制備

2.1.1 姜汁的制備：取生姜，清洗干凈，切碎，加適量水，壓榨取汁，重復(fù)2次，合并汁液，得每1 mL含生姜藥材1 g的生姜汁。

2.1.2 姜側(cè)柏葉的制備：取側(cè)柏葉9份，每份100 g，按照正交試驗設(shè)計加姜汁拌勻，炒制。選擇炮制溫度（A）、炮制時間（B）、和生姜用量（C）3個因素[3]，每個因素取3個水平，采用L9（34）正交表安排試驗（因素水平見表1）。

2.2 姜側(cè)柏葉中蕓香苷、槲皮苷、楊梅素的含量測定

2.2.1 色譜條件。色譜柱：ACE C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.2% 磷酸水（B）不同梯度洗脫，0～8 min，90%～85% B，8～45 min，85%～60% B，45～50 min，60%～80%B，50～55 min，80%～90% B；檢測波長265nm；流速1.0 mL/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量10 μL[4-6]。在此條件下側(cè)柏葉樣品中蕓香苷、槲皮苷及楊梅素3個對照品與其他成分均達(dá)到基線分離。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取蕓香苷、槲皮苷、楊梅素對照品各適量，置于同一100 mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，分別制成0.048、0.075、0.015 g/L的對照品溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：取正交試驗提取的9份姜側(cè)柏葉炮制品，研細(xì)，各取約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 樣品測定：精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀分析測定。

2.3 姜側(cè)柏葉炮制工藝考察：本試驗選擇蕓香苷、槲皮苷、楊梅素的含量作為評價指標(biāo)，采用綜合評定法，將3個指標(biāo)最高含量定為100，其他各組數(shù)據(jù)與100相比，得到3個指標(biāo)的評分，再將3個指標(biāo)評分加權(quán)（按照等比例），得到綜合評分。由綜合評分優(yōu)選姜側(cè)柏葉最佳炮制工藝，試驗分析結(jié)果見表2，方差分析見表3。

根據(jù)正交試驗直觀分析及方差分析結(jié)果，確定姜側(cè)柏葉最佳炮制工藝為A2B2C2，即側(cè)柏葉與姜汁的比例為10∶1，拌勻，置120 ℃炒制15 min，取出，自然放涼。影響因素大小依次為烘制溫度（A）＞烘制時間（B）＞生姜用量（C）。方差分析結(jié)果顯示，炮制溫度對試驗結(jié)果有顯著性影響。

表 2 正交試驗分析結(jié)果

表 3 正交實驗方差分析結(jié)果

2.4 姜側(cè)柏葉最佳炮制工藝驗證試驗：按最佳炮制工藝A2B2C2制備3批姜側(cè)柏葉樣品，每批100 g，測定其中的槲皮苷、蕓香苷和楊梅素的含量。實驗結(jié)果表明，按照本實驗條件進(jìn)行炮制，可以較好的炮制側(cè)柏葉藥材，工藝穩(wěn)定、可行。

3 討 論

現(xiàn)代研究表明，側(cè)柏葉中的有效成分主要有三類：一類是黃酮類，主要包括槲皮苷、蕓香苷、楊梅素等，為主要的活性成分，具有降尿酸、抗氧化、保肝、利膽、降血糖等作用[7]；一類是揮發(fā)油類，具有抗菌的作用，另一類是鞣質(zhì)，具有抗氧化及抗腫瘤的作用[8]。因此，本試驗建立了以槲皮苷、蕓香苷及楊梅素的HPLC含量測定方法，并以這3個成分含量為指標(biāo)進(jìn)行姜側(cè)柏葉炮制工藝研究，并結(jié)合了飲片的外觀性狀，優(yōu)選出最佳的姜側(cè)柏葉的炮制工藝，可以全面的反應(yīng)姜側(cè)柏葉的質(zhì)量。

按照《全國中藥炮制規(guī)范》和各地方的炮制規(guī)范對藥材炮制影響因素，選擇烘制溫度、生姜用量和烘制時間3個因素，采用L9（34）正交試驗法對姜側(cè)柏葉的炮制工藝優(yōu)選，結(jié)果表明炮制溫度對姜側(cè)柏葉炮制有顯著性影響。實驗結(jié)果表明，炮制溫度為120 ℃時效果最好，當(dāng)溫度達(dá)到140 ℃時，蕓香苷、槲皮苷、楊梅素的含量均有降低的趨勢。但炮制過程對姜側(cè)柏葉中主要化學(xué)成分的影響不完全一致，需要結(jié)合藥效實驗深入探討。本研究曾以槲皮苷、槲皮素的含量作為評價炮制效果的考察指標(biāo)，但是經(jīng)過實驗證明，側(cè)柏葉中沒有槲皮素，經(jīng)過不同條件炮制后的姜側(cè)柏葉含有槲皮素的量也很少，說明在炮制過程中槲皮素的產(chǎn)生量很小。故此沒有以槲皮素的量作為評價指標(biāo)。