抗菌脂肽surfactin對(duì)雛雞生長性能及血液生化的影響

胡美忠， 陳 敏，郁建生

（銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州銅仁 554300）

獸用抗生素在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中起到了重大作用，但是抗生素的濫用帶來了耐藥菌、藥物殘留等危害，嚴(yán)重威脅人們身體健康及生態(tài)環(huán)境安全。尋找安全、無耐藥性無殘留的抗生素替代品成為急需解決的問題。由芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌脂肽有廣譜抗菌作用，不易產(chǎn)生耐藥性，且來源安全，近年成為研究的熱點(diǎn)，有望替代抗生素在畜牧業(yè)中的使用（莊國宏，2014）。

surfactin是枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌等芽孢桿菌屬產(chǎn)生的環(huán)狀抗菌脂肽（莊國宏，2014），具有廣譜抗菌、抗病毒等活性（翟少偉等，2015；任鵬舉等，2014），有在畜牧業(yè)中替代抗生素使用的潛力，研究表明surfactin具有促進(jìn)動(dòng)物生長，增強(qiáng)抗病能力等作用 （都海明等，2010）。為進(jìn)一步研究surfactin在畜牧養(yǎng)殖業(yè)使用潛力，本試驗(yàn)研究了surfactin對(duì)雛雞生長性能及血液生化的影響，為進(jìn)一步開發(fā)surfactin在畜牧養(yǎng)殖業(yè)使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 抗菌脂肽surfactin半固體發(fā)酵制備 枯草芽孢桿菌S21（民族中獸藥分離純化技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心中獸藥微生物發(fā)酵技術(shù)研究室分離篩選保藏）使用LB培養(yǎng)基活化得種子液，待用。市售黃豆粉碎成粗顆粒，蒸餾水浸泡過夜后蒸熟，趁熱把黃豆顆粒轉(zhuǎn)入用開水淋洗的帶蓋托盤（黃豆顆粒厚度約2～3 cm），冷卻，接入黃豆5%（V/g）的枯草芽孢桿菌S21種子液，同時(shí)加入黃豆20%（V/g）無機(jī)鹽體系（硫酸鎂0.5 g/L，氯化鉀 0.5 g/L，硫酸錳 0.005 g/L，硫酸銅 0.0016 g/L，硫酸亞鐵0.0015 g/L及占黃豆重量5%的葡萄糖），攪拌均勻，37℃發(fā)酵48 h。甲醇萃取發(fā)酵黃豆2～3次，合并萃取液，濃縮至干，加少量蒸餾水溶解，使用高效液相色譜法檢測(cè)甲醇萃取液中surfactin的峰面積，根據(jù)surfactin標(biāo)準(zhǔn)品峰面積計(jì)算其含量，制備得到surfactin樣品。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)動(dòng)物為貴州地方品種青腳土雞苗，購自貴州黔靈山雞苗孵化廠，銅仁職院農(nóng)學(xué)院生態(tài)養(yǎng)殖園常規(guī)飼養(yǎng)至20日齡后進(jìn)行試驗(yàn)，土雞苗接種疫苗情況：1日齡馬立克疫苗，7日齡新城疫IV疫苗，14日齡法氏囊多價(jià)苗，20日齡H120疫苗。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 隨機(jī)選取100只健康的20日齡青腳雛雞，分成基礎(chǔ)日糧添加3、6、9 mg/kg surfactin三個(gè)surfactin劑量組（參照恩拉霉素劑量）、金霉素陽性組（基礎(chǔ)日糧添加金霉素30 mg/kg）和空白組5個(gè)組。每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只，早晚定時(shí)喂食一次，自由采食，定期清理糞便，保持雞舍衛(wèi)生。

1.4 基礎(chǔ)日糧配方 基礎(chǔ)日糧配方依據(jù)當(dāng)?shù)赝岭u飼養(yǎng)的配方配制，配方為60%玉米，10%麩皮，29%豆粕和1%骨粉魚粉混合物。

1.5 測(cè)定指標(biāo)

1.5.1 生長性能 于21、35、50日齡早上喂食前對(duì)各組稱重，每日記錄各組喂食量及死亡情況，根據(jù)數(shù)據(jù)計(jì)算各組的平均日增重，死亡率及料重比，數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0分析統(tǒng)計(jì)。

1.5.2 血液生化 使用一次性真空采血管于雛雞50日齡進(jìn)行翅靜脈采血，每組隨機(jī)采集三只，采集的血液靜置30 min，4000 g離心15 min得血清，置于-20℃冰箱保藏。采用南京建成生物工程研究所的總膽固醇（TC）試劑盒，甘油三酯（TG）試劑盒，尿素氮 （BUN）試劑盒，白蛋白（ALB）試劑盒，谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒，谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒分別檢測(cè)血清中總膽固醇、甘油三酯、尿素氮、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 surfactin對(duì)雛雞生長性能的影響 由表1可知，21～35 d內(nèi)，添加了3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin日糧喂養(yǎng)的雛雞，3 mg/kg surfactin組其日平均增重比空白對(duì)照組提高23.9%（P＜0.05），比金霉素組提高 13.5%（P＜0.05），6 mg/kg surfactin組其日平均增重比空白對(duì)照組提高24.7%（P ＜ 0.05）， 比金霉素組提高 14.2%（P ＜ 0.05），可見3 mg/kg surfactin組和6 mg/kg surfactin組日增重效果比金霉素組好（P＜0.05）。35～50 d平均日增重結(jié)果與21～35 d類似，添加了3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin日糧喂養(yǎng)的雛雞，其日平均增重相對(duì)于空白對(duì)照組分別提升26.5%（P＜0.05）、31.4%（P ＜ 0.05），與陽性對(duì)照金霉素組相比無顯著性差異。整個(gè)試驗(yàn)期間，對(duì)照組20只雛雞死亡4只，死亡率為20%，但是3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin組，每組死亡雛雞1只，死亡率為5%，陽性對(duì)照金霉素組死亡率為10%，可見添加surfactin能增強(qiáng)雛雞抗病能力，降低死亡率。料肉比上，3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin組的料肉比與對(duì)照組相比分別降低4.5%（P＜0.05）、5.1%（P＜0.05），與金霉素組相當(dāng)。

表1 surfactin對(duì)雛雞生長性能的影響

表2 surfactin對(duì)雛雞血液生化的影響

2.2 surfactin對(duì)雛雞血液生化的影響 由表2可知，surfactin對(duì)雛雞血清中總膽固醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯影響，對(duì)血清中甘油三酯、尿素氮和白蛋白的含量有影響，3、6 mg/kg surfactin組和9 mg/kg surfactin組血清中甘油三酯和尿素氮的含量降低，甘油三酯含量分別降低 19.2%（P＜ 0.05）、12%（P＜ 0.05） 和 68.6%（P＜0.05）， 尿素氮含量分別降低36%（P＞0.05）、69.7%（P ＜ 0.01）和 67.4%（P ＜ 0.05），血清中白蛋白的含量提高，血清中白蛋白含量分別提高66.4%（P ＜ 0.05）、61.7%（P ＜ 0.05）、67.3%（P ＜ 0.05）。

3 討論

研究表明芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌脂肽surfactin具有廣譜高效抗菌、抗病毒活性，對(duì)支原體和原蟲有顯著的抑制效果，對(duì)畜禽具有很好的抗氧化、促生長、抗菌、增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力及改善動(dòng)物的肉質(zhì)品質(zhì)等作用，且具有相當(dāng)好的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性，是一種潛在的新型綠色抑菌促生長飼料添加劑（翟少偉等，2015；龔谷迪等，2013）。都海明（2010）研究了抗菌脂肽對(duì)肉雞生長性能和免疫機(jī)能的影響，得出抗菌脂肽對(duì)肉雞的生長發(fā)育和免疫機(jī)能具有較好的調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用。翟少偉等（2016）的研究指出，飼料中添加surfactin可以提高中華鱉稚鱉的生長性能和腸道消化酶活性。陳旭波（2016）研究了surfactin對(duì)斷奶仔豬生長性能及血液生化指標(biāo)的影響，得出飼料中添加適量抗菌脂肽surfactin能夠提高斷奶仔豬生長性能、降低腹瀉率、改善血脂水平和改善血液生化指標(biāo)。surfactin促生長可能與其抑菌活性有關(guān)，surfactin通過抑制動(dòng)物腸道致病菌的繁殖從而改善腸道微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)了腸道健康，動(dòng)物采食量提高，促進(jìn)動(dòng)物生長。血液生化指標(biāo)可反映機(jī)體新陳代謝情況，尿素氮是衡量機(jī)體蛋白分解代謝速率的一個(gè)指標(biāo)，白蛋白則是衡量機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成代謝的指標(biāo)，比較尿素氮和白蛋白在機(jī)體內(nèi)的濃度變化可以得出機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用效率（劉觀忠等，2011;張凱等，2011），血脂可反映機(jī)體脂質(zhì)代謝情況，較低的甘油三酯和膽固醇有利于機(jī)體健康，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶則反映機(jī)體肝臟健康，較高水平說明機(jī)體肝臟功能受損。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，surfactin能促進(jìn)雛雞生長，降低料肉比、死亡率、血清中甘油三酯和尿素氮含量，提升血清中白蛋白的含量，促進(jìn)飼料中蛋白質(zhì)的消化吸收，在日增重和死亡率及血液生化指標(biāo)方面優(yōu)于金霉素。