王龍　郝長敏　武延生

[摘要][目的]對青葉膽乙醇提取物化學(xué)成分進行研究。[方法]利用溶劑萃取、柱層析、薄層層析、重結(jié)晶等手段，對青葉膽乙醇提取物進行化學(xué)成分分離，并通過波譜解析、顏色反應(yīng)等方法對化合物進行鑒定。[結(jié)果]從青葉膽提取物中分里得到獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、1-羥基-2，3，5-三甲氧基（口山）酮、1，5，8-三羥基-3-甲氧基（口山）酮、齊墩果酸6個化合物。

[關(guān)鍵詞]青葉膽 化學(xué)成分 乙醇 提取物

近年來病毒性肝炎、肝纖維化、脂肪肝、酒精肝、藥物性肝損害及肝癌等肝類疾病已成為當(dāng)今威脅人類健康的主要病因之一。分布在云南、青海、湖南等地的青葉膽可用于此類疾病的治療，青葉膽用藥以傳統(tǒng)中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，用藥機理區(qū)別于目前臨床常用的西藥品種，并且具有我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥毒副作用小的優(yōu)勢。

現(xiàn)已有以齊墩果酸和環(huán)烯醚萜等類成分為主要活性成分的藥物投放市場，例如齊墩果酸片、獐芽菜苦苷片、肝復(fù)康片（青葉膽總苷）等。而近年來，有研究認為（口山）酮類成分具有重要的抗肝炎活性作用，因此，此類成分的研究工作為擴大青葉膽的臨床應(yīng)用，以及從傳統(tǒng)中藥中發(fā)現(xiàn)作用機制新穎的保肝利膽藥物提供了重要的化學(xué)和藥理學(xué)基礎(chǔ)。青葉膽（口山）酮類成分的提取多以不同濃度的乙醇為溶劑，所以本文以青葉膽乙醇提取物作為研究對象，進行了一些研究工作。

一、試劑及儀器

（一）試劑

青葉膽的干燥全草購于河北安國中藥材市場，經(jīng)邢臺學(xué)院化學(xué)工程與生物技術(shù)學(xué)院副教授張雪輝、武延生鑒定為龍膽科植物青葉膽（s.mileensisT.N.HoetW.I.Shi）。

100-200目層析用硅膠柱（青島海洋化工廠分廠），200-300目層析用硅膠柱（青島海洋化工廠分廠），200-300目C18反向硅膠（上海和杰科技有限公司），60-90目柱層析用聚酰胺（江蘇臨江試劑化工廠），聚酰胺薄膜（青島海洋化工廠分廠），硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠），三氯化鐵（天津化學(xué)試劑三廠），鐵氰化鉀（天津化學(xué)試劑三廠），α-萘酚（天津化學(xué)試劑二廠），實驗所用甲醇、氯仿等試劑均為分析純，水為蒸餾水。

（二）儀器

UV 1601型紫外分光光度計（日本島津公司），JOEL 300型超導(dǎo)核磁共振儀（日本電子公司），BruckAC 300P型超導(dǎo)核磁共振儀（瑞士Bruck公司），710型紅外波譜儀（美國尼高力公司），WRR型熔點儀（上海物理光學(xué)儀器）

二、實驗方法與結(jié)果

（一）提取物的制備

取青葉膽干燥全草5.0kg，粉碎成小段，分別加80%7.醇10倍、8倍、6倍回流提取3次，每次1小時，合并濾液，減壓回收乙醇，得乙醇提取物浸膏，備用。

（二）溶劑萃取

取青葉膽乙醇提取物浸膏，加水調(diào)整體積至5L，用石油醚萃取3次，每次石油醚用量為2.5L，取石油醚層，減壓濃縮，得石油醚萃取物浸膏，備用；水層繼續(xù)用氯仿萃取5次，每次氯仿用量為2.5L，取氯仿層，減壓濃縮，得到氯仿萃取物浸膏，備用；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取5次，每次乙酸乙酯用量為2.5L，取乙酸乙酯層，減壓濃縮，得乙酸乙酯萃取物浸膏，備用；水層繼續(xù)用水飽和正丁醇萃取3次，每次用量2.5L，取正丁醇層，減壓濃縮，得正丁醇萃取物浸膏，備用。取各部分萃取物浸膏真空干燥，粉碎，得石油醚萃取物干粉82g、氯仿萃取物干粉115g、乙酸乙酯萃取物干粉156g、正丁醇萃取物干粉128g。

（三）化學(xué)成分的分離

取石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物干粉小量，分別甲醇溶解，點于聚酰胺薄膜，以乙醇水（5：3）為展開劑，展開，噴以三氯化鐵1%：鐵氰化鉀1%（1：1）的顯色劑，檢視。結(jié)果顯示，乙酸乙酯萃取物中集中了更多種類的成分，同時其基本包含了石油醚萃取物、氯仿萃取物及正丁醇萃取物的成分，本實驗選用乙酸乙酯部分的萃取物為研究對象進行進一步分離。

取乙酸乙酯萃取物30g，加乙酸乙酯溶解拌入聚酰胺30g，真空干燥，備用。稱取聚酰胺（60-90目）500g，用95%7.醇浸泡24小時后濕法裝柱，進行柱層析，以95%7，醇洗至無色。以4%NaOH溶液2000ml洗脫，用水洗至中性后，再以3.8%HCl溶液2000ml洗脫，水洗至中性。加入拌有乙酸乙酯部分萃取物的聚酰胺，以乙醇水系統(tǒng)梯度洗脫，收集洗脫液，每瓶100ml。用30%7.醇2500ml洗脫，得流份120，經(jīng)薄層檢視，合并相同流份得Fr1；繼續(xù)用40%7.醇5000ml洗脫，得流份21-74，經(jīng)薄層檢視，合并相同流份61-70得Fr2；繼續(xù)用50%7.醇5000ml洗脫，得流份75-126，經(jīng)薄層檢視，合并相同流份100-110得Fr3，繼續(xù)用60%7.醇8000ml洗脫，得流份127-220，經(jīng)薄層檢視，合并流份145-158得Fr4。繼續(xù)用70%7.醇8000ml洗脫，得流份221-302，經(jīng)薄層檢視，合并相同流份220-239得Fr5，合并流份250-280得Fr6。

取Fr2部分樣品，濃縮后加甲醇溶解，拌入5g硅膠，真空干燥，稱取硅膠50g，乙酸乙酯濕法裝柱，以乙酸乙酯-甲醇水（20：2：1）洗脫。收集洗脫液，經(jīng)薄層檢視，得流份10-25合并為Fr2-a，流份30-40合并為Fr-b。

取Fr2-a部分樣品，減壓濃縮，殘渣以無水乙醇加熱溶解，放置，析出白色無定形粉末，得化合物1；取Fr2-b部分樣品，減壓濃縮，殘渣以無水乙醇加熱溶解，放置，析出淡黃色針狀結(jié)晶，得化合物2。

取Fr3部分樣品，濃縮后加甲醇溶解，拌入5g反向硅膠，真空干燥，稱取反向硅膠（200-300目）50g，用水濕法裝柱，分別以水、lO%7.醇、20%7.醇的順序洗脫。收集洗脫液，經(jīng)薄層檢視，合并相同流份得Fr3-a，濃縮后殘渣加甲醇加熱溶解，放置，析出淡黃色柱狀結(jié)晶，濾過，重結(jié)晶，得化合物3。

取Fr4部分樣品，減壓濃縮，殘渣以無水乙醇加熱溶解，放置，得到少量黃色針狀結(jié)晶，重結(jié)晶，得化合物4。

取Fr5部分樣品，濃縮，放置，得大量黃色沉淀，濾過，用60%乙醇沖洗，得沖洗后的沉淀，經(jīng)干燥后，將沉淀溶于熱甲醇，放置，析出大量黃色結(jié)晶，重結(jié)晶，得黃色片狀結(jié)晶，得到化合物5；取Fr6部分樣品，濃縮，放置，得大量白色沉淀，濾過，用60%7.醇沖洗，得沖洗后的沉淀，經(jīng)干燥后，將沉淀溶于（MEOH：CHCl₂=10：3）的溶劑中，放置，析出大量白色結(jié)晶，重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶，得化合物6。

（四）結(jié)構(gòu)鑒定