超薄液基細(xì)胞技術(shù)在胸腹水癌細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值

閆敢，李明，周蓓蓓

盱眙縣人民醫(yī)院病理科，江蘇盱眙 211700

正常情況下，人體胸腹腔臟器間存在少量液體發(fā)揮潤(rùn)滑作用，但受疾病因素影響，胸腹腔液體增多或臟層膜吸收液體速率下降，即可導(dǎo)致胸腹腔液體積存，形成胸腹水[1]。依據(jù)病因不同，胸腹水可分為良性和惡性兩種，不同病理類型的胸腹水臨床治療及預(yù)后存在差異，因此，準(zhǔn)確鑒別胸腹水性質(zhì)，對(duì)臨床制定治療方案、評(píng)價(jià)療效具有重要指導(dǎo)意義[2]。薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（TCT）是近年婦科臨床廣泛應(yīng)用的細(xì)胞學(xué)診斷技術(shù)，標(biāo)本滿意度高，但在非婦科領(lǐng)域的應(yīng)用尚存在爭(zhēng)議。胸腹水脫落細(xì)胞具有確診意義，為薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的應(yīng)用提供了可能[3]。文章現(xiàn)以2017年1月—2018年1月該院605份胸腹水標(biāo)本為例，對(duì)薄層液基細(xì)胞技術(shù)診斷胸腹水癌細(xì)胞的臨床效果進(jìn)行分析探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該院臨床科室送檢的605份可疑惡性胸腹水標(biāo)本為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①同時(shí)以液基細(xì)胞涂片和傳統(tǒng)涂片進(jìn)行細(xì)胞組織學(xué)檢查的胸腹水標(biāo)本；②陽(yáng)性病例有內(nèi)窺鏡、穿刺活檢或手術(shù)病理對(duì)照；③患者知情同意；④倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本對(duì)應(yīng)臨床及病理資料不全。胸腹水標(biāo)本類型：胸水標(biāo)本377例，腹水標(biāo)本228例。標(biāo)本來(lái)源：主要來(lái)自腫瘤科、呼吸科、消化科、胸外科、婦科具有胸腹水癥狀的患者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集與處理 全部患者均基于超聲引導(dǎo)技術(shù)行腹腔或胸腔穿刺，負(fù)壓吸引抽取胸腹水標(biāo)本。標(biāo)本保存于專用清潔容器內(nèi)，一般標(biāo)本量在200 mL以上。為防止細(xì)胞變性凝結(jié)或細(xì)菌破壞溶解，樣本獲取后加入EDTA抗凝，即刻送檢實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后，立即采集細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。

1.2.2 液基薄層涂片細(xì)胞學(xué)檢查 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，將新鮮的胸腹水充分振蕩，取15 mL標(biāo)本置于試管中，上機(jī)離心5 min，離心速率2 000 r/min。去上清液，加入約細(xì)胞團(tuán)體積3倍的液基細(xì)胞保存液（備案號(hào):鄂孝械備 20140008 號(hào)/執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):YZB/鄂孝 0231-2010），充分振蕩混勻。從試管中吸取適量細(xì)胞懸液，于載玻片偏右側(cè)端垂直滴1～2滴，以推片用30°夾角將玻片上檢液向左推，完成涂片制備，涂片直徑約為1.5 cm。待涂片自然干燥后，95%乙醇固定30 min，以保持細(xì)胞自然形態(tài)，隨后常規(guī)HE染色，中性樹(shù)膠封固，顯微鏡下觀察。

1.2.3 傳涂片細(xì)胞學(xué)檢查 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，將新鮮的胸腹水充分振蕩，取20 mL標(biāo)本置于離心管內(nèi)，上機(jī)離心10 min，離心速率2 000 r/min。去上清液，取沉淀物直接涂抹于干凈載玻片上，95%乙醇固定后HE染色，常規(guī)光鏡診斷。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

由同一組細(xì)胞學(xué)專家對(duì)兩種涂片進(jìn)行鏡下觀察，對(duì)比觀察兩種涂片胸腹水癌細(xì)胞的檢出情況。結(jié)果判定采用三級(jí)診斷法，具體如下：①陽(yáng)性表達(dá)（確診惡性）：10%以上靶細(xì)胞可見(jiàn)棕褐色或黃褐色顆粒，定位清晰；②陰性表達(dá)（確診良性）：細(xì)胞完全不著色；③可疑陽(yáng)性（可疑惡性）：細(xì)胞著色，但效果未至陽(yáng)性表達(dá)，介于兩者之間。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

以SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，行 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，605份胸腹水標(biāo)本液基薄層涂片細(xì)胞學(xué)檢查檢出癌細(xì)胞96份，檢出率15.86%，傳統(tǒng)涂片細(xì)胞學(xué)檢查檢出癌細(xì)胞77份，檢出率12.73%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。胸腹水液基薄層涂片與傳統(tǒng)涂片陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖1、圖2。

表1 兩種標(biāo)本涂片胸腹水癌細(xì)胞檢出情況比較[n（%）]

圖1 胸腹水液基薄層涂片鏡下陽(yáng)性表達(dá)

圖2 胸腹水傳統(tǒng)涂片鏡下陽(yáng)性表達(dá)

3 討論

超薄液基細(xì)胞技術(shù)是一種改良細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)，能通過(guò)技術(shù)處理去除涂片上的雜質(zhì)，直接制成清晰可觀的薄層涂片，使觀察更容易，既往廣泛用于宮頸病變臨床篩查中，普遍獲得比傳統(tǒng)涂片理想的診斷效果[4]。

近年來(lái)，薄層液基細(xì)胞技術(shù)開(kāi)始用于尿液、痰液、胸腹水等非婦科領(lǐng)域脫落細(xì)胞的臨床診斷中，在疾病定性診斷中發(fā)揮了重要作用[5]。既往，臨床診斷胸腹水采用傳統(tǒng)涂片，其應(yīng)用雖具有排列方式及背景的優(yōu)勢(shì)，但樣本內(nèi)常混以大量炎性滲出物、紅細(xì)胞及粘液等，且標(biāo)本薄厚不一，鏡下觀察細(xì)胞多層重疊嚴(yán)重，陽(yáng)性細(xì)胞常被覆蓋，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)不清，在很大程度增加了閱片的困難度，影響診斷準(zhǔn)確性[6-7]。液基薄層涂片操作簡(jiǎn)單、快捷，細(xì)胞收集率高，一次標(biāo)本收集可制成多張涂片，重復(fù)性高[8]，而且試劑盒中固定液能去除標(biāo)本中紅細(xì)胞碎片及其他雜質(zhì)成分，經(jīng)HE染色后，無(wú)紅細(xì)胞干擾，背景清晰，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，染色鮮艷，能有效克服傳統(tǒng)涂片細(xì)胞不均、偶然性強(qiáng)的不足，有助于單個(gè)細(xì)胞鏡下觀察，提高診斷準(zhǔn)確率[9]。該次臨床研究結(jié)果顯示，液基薄層涂片細(xì)胞學(xué)檢查癌細(xì)胞檢出率（15.86%）高于傳統(tǒng)涂片（12.73%），與文獻(xiàn)報(bào)道的液基薄層涂片惡性胸腹水檢出率（14.76%）高于普通涂片（10.82%）的研究結(jié)論一致[10]，肯定了薄層涂片用于胸腹水定性診斷中的作用優(yōu)勢(shì)。

但值得注意的是，液基薄層涂片對(duì)腫瘤細(xì)胞較少或存在反應(yīng)性間皮細(xì)胞等疑難病例較難確診，雖然可行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，但非特異性著色較多，陽(yáng)性區(qū)域不易確定[11]。另外，液基薄層涂片制作過(guò)程中振蕩、離心、混勻等步驟會(huì)破壞原有癌細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞排列方式，故在肝腹水癌細(xì)胞原發(fā)部位推斷方面存在一定局限性[12]。由此可見(jiàn)，兩種涂片各有優(yōu)勢(shì)及不足，建議臨床檢測(cè)胸腹水癌細(xì)胞時(shí)，兩種同時(shí)制片，對(duì)于液基薄層涂片陽(yáng)性表達(dá)而傳統(tǒng)涂片未見(jiàn)典型癌細(xì)胞者，則重留標(biāo)本，復(fù)查傳統(tǒng)涂片，以進(jìn)一步明確診斷。

綜上所述，超薄液基細(xì)胞技術(shù)是檢測(cè)胸腹水癌細(xì)胞的有效手段，薄層涂片能獲得優(yōu)于傳統(tǒng)涂片的診斷效果，但仍有不足，建議聯(lián)合應(yīng)用以提高癌細(xì)胞檢出率，更好的為臨床提供指導(dǎo)。