車成來 王欣宇 林花 王霞 王宇輝 崔長根 金龍哲

摘 要：研究靈芝功能性食品的遺傳毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)。通過Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核及小鼠精子畸形試驗(yàn)來進(jìn)行靈芝功能性食品的遺傳毒性試驗(yàn)研究。結(jié)果表明，3項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)均為陰性。

關(guān)鍵詞：靈芝；功能性食品；小鼠；免疫功能

中圖分類號：S567.3+1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20180732001

醫(yī)典記載靈芝可“益心氣，益肝氣，益脾氣，益肺氣，益腎氣”[1]，靈芝具有大補(bǔ)五臟虛損、平衡陰陽、調(diào)和氣血的功效[2]，享有“諸藥為各病之藥，靈芝為百病之藥”之美譽(yù)。近年來亦有研究表明，靈芝有抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤作用，還具備降血糖、降血脂、抗氧化等作用[3]。在靈芝有益于人體各機(jī)能作用的基礎(chǔ)上，靈芝功能性食品以靈芝提取物、破壁靈芝孢子粉為原料，經(jīng)現(xiàn)代工藝制成了具有增強(qiáng)免疫力作用的功能性食品，本研究依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法》[4]，以靈芝功能性食品為實(shí)驗(yàn)材料對小鼠進(jìn)行了遺傳毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料和方法

1.1 材料

靈芝功能性食品，棕褐色粉末；選用體重25g～30g的Balb/c雄性小鼠（SPF級），實(shí)驗(yàn)期間，動物自由攝食飲水，溫度控制在20～26℃，相對濕度控制為40%～70%。

1.2 Ames實(shí)驗(yàn)

采用TA97、TA98、TA100和TA102菌株，進(jìn)行加與不加小鼠肝S9的標(biāo)準(zhǔn)平皿滲入法實(shí)驗(yàn)。設(shè)5個樣品劑量：8、40、200、1000和5000?g/皿，同時設(shè)自發(fā)對照、溶劑對照（滅菌蒸餾水100?g/皿）和陽性對照。不加S9實(shí)驗(yàn)的陽性對照為1.5?g/皿的疊氮化鈉（TA100），0.5?g/皿的絲裂霉素C（TA102），0.2?g/皿的2，4，7-三硝基-9-芴酮（TA97、TA98）；加S9實(shí)驗(yàn)的陽性對照為50?g/皿的1，8-二羥基蒽醌（TA102）和10?g/皿的2-氨基芴（TA97、TA98、TA100）。每個實(shí)驗(yàn)劑量做3個平行皿，重復(fù)實(shí)驗(yàn)1次。

1.3 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，設(shè)10、5.0和2.5g/kg·bw受試物組，另設(shè)陰性對照（蒸餾水）、陽性對照（環(huán)磷酰胺40mg/kg·bw）組。動物分別于第0小時和第24小時按2mL/100g·bw經(jīng)口灌胃，末次染毒后6h處死動物，每只計(jì)數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞（PCE），觀察含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核率，同時觀察200個紅細(xì)胞中PCE和成熟紅細(xì)胞（NCE）所占數(shù)目，并計(jì)算PCE/NCE比值。

1.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)

將小鼠分為5組，每組5只。設(shè)陰性對照組（蒸餾水），40mg/kg·bw環(huán)磷酰胺（陽性對照組）和10、5.0和

2.5g/kg·bw 3個樣品劑量組（各組分別稱取10、5.0和2.5g受試物，各加蒸餾水至20mL混懸），按2mL/100g·bw經(jīng)口灌胃動物，連續(xù)5d。于首次灌胃后第35天處死動物，取雙側(cè)附睪，制片，每只動物觀察1000個完整精子，記錄各類畸形精子數(shù)。

1.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

各劑量組均數(shù)比較使用方差分析，精子畸形率比較使用秩和檢驗(yàn)，微核率比較使用泊松分布法。

2 結(jié)果

2.1 Ames試驗(yàn)結(jié)果

自發(fā)對照組的每皿平均回變菌落數(shù)均處于正常值范圍內(nèi)，而陽性對照組均為自發(fā)對照組2倍以上，呈明顯陽性反應(yīng)。受試物組與溶劑對照組的平均回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)對照組的1倍，呈陰性反應(yīng)。見表1、表2。

2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果

各實(shí)驗(yàn)組PCE/NCE比值與陰性對照組比較無顯著性差異（P>0.05），說明樣品對小鼠骨髓細(xì)胞增殖無不良影響。陽性對照組動物的微核率均顯著高于對照組（P<0.05），樣品各劑量組的微核率與陰性對照組比較均無顯著性差異（P>0.05），說明靈芝功能性食品在小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)中為陰性結(jié)果。見表3。

2.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果

陽性對照組的精子畸形率顯著高于陰性對照組（P<0.05），樣品各劑量組的精子畸形率與陰性對照組比較均無顯著性差異（P>0.05），說明靈芝功能性食品在小鼠精子畸形試驗(yàn)中為陰性結(jié)果。見表4。

3 結(jié)論

在對靈芝功能性食品進(jìn)行遺傳毒性試驗(yàn)研究中，Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性，說明樣品無誘導(dǎo)試驗(yàn)菌株回復(fù)突變的作用，小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核以及小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，各動物未見細(xì)胞毒性作用。

參考文獻(xiàn)

[1]魏新雨.古代對靈芝藥用功效的認(rèn)識[N].中國中醫(yī)藥報(bào)，

2002-12-04.

[2]張靜，雅曹煌，龔蘇曉，等.中藥甘味的藥性表達(dá)及在臨證配伍中的應(yīng)用[J].中草藥，2016（4）： 533-539.

[3]盧振，陳金和，王雨來，等.靈芝的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J].時珍國醫(yī)國藥，2003（9）：577-581.

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB15193.1-2003食品安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法[S].

2003.

作者簡介：車成來（1971-），男，助理研究員，研究方向：農(nóng)特產(chǎn)品加工；金龍哲（1965-），男，副研究員，研究方向：農(nóng)特產(chǎn)品加工。