隋思博 鄭佩新

【摘要】水楊酸甲酯系由水楊酸與甲醇在硫酸催化下酯化反應(yīng)合成制得。主要雜質(zhì)有：水楊酸、甲醇、苯酚、4-羥基間苯二甲酸二甲酯、4-羥基苯甲酸甲酯。水楊酸的來源：酯化反應(yīng)的主要原料，反應(yīng)不完全或堿洗不徹底導(dǎo)致；甲醇的來源：酯化反應(yīng)的主要原料，堿洗、水洗難全洗去；苯酚的來源：引入途經(jīng)有2個分別為原料水楊酸帶入或酯化反應(yīng)時溫度偏高時產(chǎn)生；4-羥基間苯二甲酸二甲酯、4-羥基苯甲酸甲酯的來源：原料水楊酸雜質(zhì)4-羥基間苯二甲酸和4-羥基間苯甲酸酯化反應(yīng)而得。

【關(guān)鍵詞】水楊酸甲酯；藥品檢驗；有關(guān)物質(zhì)

【中圖分類號】R917 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095.6681.2018.29..02

衛(wèi)生部頒標準化學(xué)藥品及制劑第一冊WS1-07-（B）-89為1989年制定，標準比較陳舊，未對有關(guān)物質(zhì)進行檢測，YBH03002004是2004年批復(fù)的試行標準，其中有關(guān)物質(zhì)只是針對水楊酸，而未考慮到合成工藝中其他雜質(zhì)，鑒于苯酚和4-羥基間苯二甲酸二甲酯、4-羥基苯甲酸甲酯是合成中實際存在的雜質(zhì)需要檢測?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥

島津LC-2010CHT高效液相色譜儀，Agilent1200高效液相色譜儀，Sartorius BT25S電子天平，苯酚對照品批號：1000509-200401，甲醇，超純水等。

1.2 試驗條件

以博納艾杰爾色譜柱（Agela ASB-C18 4.6×250 mm，

5 ?m），以甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）為流動相；檢測波長為270 nm。流速：1.0 mL/min，柱溫：35℃，進樣量：20 ?L，理論板數(shù)按水楊酸甲酯峰計算應(yīng)不低于5000，苯酚峰與水楊酸甲酯峰的分離度應(yīng)大于2.0。

1.2 溶液

精密稱取0.5 g供試品，用甲醇溶解于100 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

精密稱取苯酚對照品20 mg，用甲醇溶解于200 mL量瓶中，制成每1 mL中約含0.1 mg溶液，精密量取1 mL，置

100 mL量瓶中，再精密加入供試品溶液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。注入液相色譜儀。記錄色譜圖，即得。

1.3 測定波長的選擇

取苯酚對照品溶液，在200 nm～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在270 nm波長處有最大吸收，供試品經(jīng)DAD掃描確定270 nm下檢測到的雜質(zhì)峰最多，同時參考《中國藥典》2010版二部水楊酸的有關(guān)物質(zhì)檢查項下雜質(zhì)檢測波長為

270 nm，故將有關(guān)物質(zhì)檢測波長定為270 nm。

2 專屬性試驗

取甲醇按上述色譜條件進行測定，結(jié)果溶劑峰對主成分峰的測定無干擾。

2.1 破壞性試驗

2.1.1 氧化破壞

取水楊酸甲酯（批號：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入30%過氧化氫溶液1 mL，混勻，室溫放置12小時后，放冷，加甲醇并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.1.2 酸破壞

取水楊酸甲酯（批號：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入1 mol/L鹽酸溶液1 mL，混勻，室溫放置12小時后，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL中和，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.1.3 堿破壞

取水楊酸甲酯（批號：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，混勻，室溫放置12小時后，加入1 mol/L鹽酸溶液1 mL中和，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.1.4 加熱破壞

取水楊酸甲酯（批號：120303）約0.5 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，置水浴中加熱1小時后，放冷，室溫放置12小時后，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2.2 小結(jié)

經(jīng)過破壞試驗，新增雜質(zhì)較少，表明選定方法的專屬性較好，可用于水楊酸甲酯的有關(guān)物質(zhì)檢查。

3 線性關(guān)系考察

分別精密量取上述苯酚對照品溶液，按相同色譜條件，分別精密量取5，10，20，30，40 ?L注入液相色譜儀進行測定，記錄色譜圖，以峰面積（Y）對進樣濃度（X）進行線性回歸，得到苯酚含量測定的回歸方程，見表1。

回歸方程y = 884.99x +1716.4 ，r = 0.9956，苯酚量在5.365～42.92ng 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4 精密度試驗

精密量取標準曲線項下配制的對照品溶液，進樣量為21.46 ng，按上述色譜條件進行測定，連續(xù)進樣6次，以峰面積計算RSD%，見表2。

5 最小定量限和最小檢出限

苯酚及水楊酸甲酯的最小檢出限和最小定量限見表3。

6 穩(wěn)定性試驗

去上述供試品溶液，每間隔一定的時間，精密量取20 ?L注入液相色譜儀，結(jié)果見表4。主峰及雜質(zhì)總量均未發(fā)生顯著變化，表明24小時內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性較好。

7 限度確定

苯酚對皮膚、粘膜有強烈的腐蝕作用，可抑制中樞神經(jīng)或損害肝、腎功能，應(yīng)嚴格控制其雜質(zhì)量，經(jīng)檢測，佛山市南海中南藥化廠6批樣品（近效期3批和最近生產(chǎn)樣品3批）的苯酚含量在0.02%以內(nèi)；華陰市錦前程藥業(yè)過效期3批樣品苯酚含量為0.02%，其他3批最近生產(chǎn)樣品的苯酚含量超過0.02%；國內(nèi)某化工廠樣品的苯酚含量也超過0.02%；綜合上述結(jié)果，參考中國藥典2010版二部水楊酸中有關(guān)物質(zhì)，將苯酚的限度定為0.02%。4-羥基間苯二甲酸二甲酯廠家提供了自己提純得到的對照品（含量99.0%以上），12批樣品經(jīng)測定含量均低于0.02%，鑒于中檢所無對照品不利于雜質(zhì)的具體定量，故擬定標準中將其列入其他雜質(zhì)中，限度規(guī)定為其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照品溶液中水楊酸甲酯峰峰面積的0.5倍（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照品溶液中水楊酸甲酯峰峰面積（1.0%），12批樣品的單個雜質(zhì)峰面積及總雜質(zhì)峰面積和均符合規(guī)定。

本文編輯：趙小龍