高含量IgG牛初乳膠囊的安全性研究

文/金洪偉 陳映新

（深圳市光明新區(qū)疾病預(yù)防控制中心）

牛初乳中富含多種免疫因子和生長(zhǎng)因子等生理功能性成分，具有常乳無(wú)法比擬的特點(diǎn)[1]。在各種免疫因子中，免疫球蛋白是最引人注目的[2]。IgG是免疫球蛋白的一種，是人和動(dòng)物血液中含量最高的免疫球蛋白[3]。關(guān)于牛初乳及IgG保健功能性的研究和報(bào)道很多，但安全性毒理學(xué)方面的研究鮮有文獻(xiàn)報(bào)道，本文依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）的要求，開(kāi)展高含量IgG的牛初乳膠囊產(chǎn)品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，包括急性毒性試驗(yàn)，遺傳毒性試驗(yàn)［鼠傷寒沙門(mén)氏菌/哺乳動(dòng)物肝微粒體酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)）］和30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)，通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證其安全性。

1 材料與方法

1.1 樣品

牛初乳膠囊為市售產(chǎn)品，其IgG含量為30%，樣品為乳黃色粉末狀，感官檢查未見(jiàn)異常。該樣品推薦用量為每日2 次、每次5 粒，每粒0.2 g，因此每人每日2 g（含IgG 0.6 g），如成人體重以60 kg計(jì)，則相當(dāng)于0.033 g/kg·bw。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)ICR小白鼠和SPF級(jí)Wistar品系大白鼠，均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。在SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（屏障環(huán)境）飼養(yǎng)，溫度為21～23 ℃，濕度為55%～58%RH。試驗(yàn)動(dòng)物所用的清潔級(jí)飼料購(gòu)自北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)和30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)，遺傳毒性試驗(yàn)包括鼠傷寒沙門(mén)氏菌/哺乳動(dòng)物肝微粒體酶試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)3 項(xiàng)。

1.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

采用SPSS軟件對(duì)所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

牛初乳膠囊大鼠和小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。在14 d的觀察期間內(nèi)，兩性別大、小鼠一般狀態(tài)良好，未出現(xiàn)任何中毒癥狀，無(wú)動(dòng)物死亡。根據(jù)試驗(yàn)所設(shè)計(jì)的劑量，觀察到的結(jié)果及大、小鼠急性毒性判定標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)為牛初乳膠囊經(jīng)口最大耐受量＞20.0 g/kg·bw（相對(duì)于人體推薦量的606 倍），屬實(shí)際無(wú)毒物質(zhì)。

2.2 Ames試驗(yàn)

牛初乳膠囊2 次Ames 試驗(yàn)結(jié)果分別見(jiàn)表2和表3。結(jié)果表明，在加與不加活化系統(tǒng)條件下，受檢樣品各試驗(yàn)菌株的回變菌落數(shù)均未超過(guò)陰性對(duì)照組的2 倍以上，故認(rèn)為牛初乳膠囊對(duì)Ames試驗(yàn)菌株無(wú)致突變性。

表1 牛初乳膠囊大、小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

表2 牛初乳膠囊第一次Ames試驗(yàn)結(jié)果

表3 牛初乳膠囊第二次Ames試驗(yàn)結(jié)果

表4 牛初乳膠囊對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率的影響

表5 牛初乳膠囊對(duì)雄性小鼠精子畸形的影響

表6 牛初乳膠囊對(duì)大鼠體重的影響

2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

牛初乳膠囊小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)表4。經(jīng)卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，各試驗(yàn)組與陰性對(duì)照比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），陽(yáng)性對(duì)照組（給予0.04 g/kg·bw的環(huán)磷酰胺）的微核率高于陰性對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。本試驗(yàn)表明，牛初乳膠囊對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率無(wú)影響。

2.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果

牛初乳膠囊小鼠精子畸形試驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果顯示，各組動(dòng)物均可見(jiàn)到一定數(shù)量的畸形精子，經(jīng)秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法，給予環(huán)磷酰胺（0.04 g/kg·bw）的陽(yáng)性對(duì)照組精子畸形率與陰性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）；而各試驗(yàn)組動(dòng)物的精子畸形率與陰性對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），表明牛初乳膠囊對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率無(wú)影響。

2.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.5.1 一般狀態(tài)觀察

主要試驗(yàn)如下：①膨脹試驗(yàn)，包括自由膨脹和限制膨脹試驗(yàn)；②壓汞試驗(yàn)，通過(guò)計(jì)算汞壓入量間接確定孔隙的孔徑大小，適合干燥試樣；③核磁共振試驗(yàn)，通過(guò)核磁共振技術(shù)測(cè)定含水狀態(tài)下的孔隙分布，測(cè)試原理見(jiàn)參考文獻(xiàn)[13]；④XRD試驗(yàn)，通過(guò)XRD方法確定晶體礦物；⑤SEM試驗(yàn)，觀察試樣的微觀形貌。

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，各組動(dòng)物一般狀況良好，行為正常，未見(jiàn)任何中毒表現(xiàn)，亦無(wú)動(dòng)物死亡。

2.5.2 對(duì)大鼠體重的影響

在30 d喂養(yǎng)過(guò)程中，牛初乳膠囊對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)的影響見(jiàn)表6。對(duì)大鼠每周體重進(jìn)行方差分析處理，結(jié)果均無(wú)顯著性差異（p＞0.05），說(shuō)明牛初乳膠囊對(duì)大鼠體重的增長(zhǎng)無(wú)顯著影響。

表7 牛初乳膠囊對(duì)大鼠總食物利用率的影響

表8 牛初乳膠囊對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響

表9 牛初乳膠囊對(duì)大鼠白細(xì)胞分類(lèi)的影響

2.5.3 對(duì)大鼠總食物利用率的影響

在30 d喂養(yǎng)過(guò)程中，牛初乳膠囊對(duì)大鼠體重增重、進(jìn)食量、食物利用率的影響見(jiàn)表7。結(jié)果顯示，對(duì)各劑量組動(dòng)物的體重增重、進(jìn)食量和食物利用率進(jìn)行方差分析，各組間均無(wú)顯著性差異（p＞0.05），表明牛初乳膠囊對(duì)大鼠的總食物利用率無(wú)顯著影響。

2.5.4 對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

大鼠紅細(xì)胞、血紅蛋白和白細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表8。結(jié)果顯示，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量和白細(xì)胞計(jì)數(shù)均在正常值范圍內(nèi)，各試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異（p＞0.05），說(shuō)明牛初乳膠囊對(duì)紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白含量和白細(xì)胞總數(shù)無(wú)顯著影響。

牛初乳膠囊對(duì)大鼠白細(xì)胞分類(lèi)的影響檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表9。結(jié)果表明，雄性、雌性大鼠的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞均在正常值范圍之內(nèi)，且各試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（p＞0.05），說(shuō)明牛初乳膠囊對(duì)各型白細(xì)胞均無(wú)顯著影響。

2.5.6 對(duì)末期血液生化指標(biāo)的影響

試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，分離大鼠血清，檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血糖（GLu）、白蛋白（ALb）、總蛋白（TP）、總膽固醇（TCH）、甘油三酯（TG）等指標(biāo)（表10）。結(jié)果表明，劑量受試物組的各項(xiàng)指標(biāo)與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異，說(shuō)明牛初乳膠囊對(duì)大鼠血生化指標(biāo)無(wú)顯著影響。

2.5.7 病理檢查結(jié)果

（1）大體解剖

用牛初乳膠囊對(duì)大鼠經(jīng)口灌胃30 d后，對(duì)大體進(jìn)行解剖檢查，各組動(dòng)物重要臟器未見(jiàn)明顯病理改變和異常。

表10 牛初乳膠囊對(duì)末期血液生化指標(biāo)的影響

表11 牛初乳膠囊對(duì)大鼠臟器重量及臟器/體重值的影響

（2）臟器重量及臟器/體重值

牛初乳膠囊對(duì)大鼠臟器重量及臟器/體重值的影響見(jiàn)表11。經(jīng)方差分析，各試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組主要臟器重量和臟器／體重值均無(wú)明顯的差異（p＞0.05）。

2.5.8 病理組織學(xué)檢查結(jié)果

（1）組織檢查

對(duì)牛初乳膠囊30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)中的對(duì)照組和高劑量組大鼠進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，剖檢后肉眼觀察，心、肺、肝、脾、腎、胃、腸、睪丸（卵巢）等主要臟器的顏色、形狀、大小等均未見(jiàn)明顯異常。

（2）鏡下檢查

病理檢查結(jié)果表明，高劑量組與對(duì)照組大鼠的肝、脾、腎、胃、腸、睪丸（卵巢）均未見(jiàn)與試驗(yàn)因素有關(guān)的病理組織學(xué)變化。

3 小結(jié)

經(jīng)試驗(yàn)分析，牛初乳膠囊的大、小鼠經(jīng)口急性毒性最大耐受劑量均＞20 g/kg·bw（相對(duì)于人體推薦量的606 倍），屬實(shí)際無(wú)毒級(jí)；鼠傷寒沙門(mén)氏菌/哺乳動(dòng)物肝微粒體酶試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)3 項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性；30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)亦未見(jiàn)其對(duì)受試動(dòng)物有明顯毒性損害作用。C