昌莉麗　李華坤　孫朋

摘要：為了掌握徐州地區(qū)豬場大腸桿菌耐藥菌株的產(chǎn)生情況和耐藥程度，在2016-2018兩年間對徐州地區(qū)豬源大腸桿菌進(jìn)行耐藥監(jiān)測。從豬場分離鑒定致病性大腸桿菌，采用紙片擴(kuò)散法測定46株分離菌株對15種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果表明，豬源大腸桿菌分離株多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，至少耐藥10種以上，其中10耐和11耐的菌株所占比例最大，分別為28.3%和23.9%；分離菌株對阿莫西林、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素耐藥率最高，達(dá)到80%以上，對頭孢噻呋耐藥率最低，為17.4%。兩年間痢菌凈耐藥率下降幅度最大，丁胺卡那霉素耐藥率增長幅度最大。

關(guān)鍵詞：豬源大腸桿菌；藥敏試驗(yàn)；耐藥監(jiān)測

中圖分類號：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2018）10-0011-02

作為豬肉消費(fèi)大國，養(yǎng)豬在我國畜牧業(yè)中一直占有重要地位，而由致病性大腸桿菌引起的仔豬腹瀉一直是危害養(yǎng)豬業(yè)的重大疾病。致病性大腸桿菌主要危害1月齡以內(nèi)的仔豬和斷奶仔豬，常發(fā)生嚴(yán)重的腹瀉和敗血癥。常見的疾病有仔豬黃痢、仔豬白痢、仔豬水腫病，具有流行面廣、發(fā)病率和死亡率高等特點(diǎn)。養(yǎng)豬生產(chǎn)中，尤其是一些飼養(yǎng)管理?xiàng)l件較差的中小型豬場，一旦環(huán)境改變，氣溫驟變，大腸桿菌就易趁虛而入，還常常和流行性腹瀉、偽狂犬等病毒性疾病混合感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，對該病的防治主要是應(yīng)用疫苗預(yù)防和藥物防治。然而由于大腸桿菌菌株血清型眾多且每個(gè)地方流行血清型不同，應(yīng)用疫苗對大腸桿菌病無法進(jìn)行有效預(yù)防，臨床上大多使用抗菌藥物來防治。但是由于抗菌藥的過量和濫用，大腸桿菌耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重，應(yīng)用新的抗生素就有新的耐藥菌株出現(xiàn)，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的變異速度遠(yuǎn)高于新藥的研發(fā)速度，抗生素的選擇壓力愈來愈大。因此，對大腸桿菌耐藥性進(jìn)行監(jiān)測研究已成為國內(nèi)外重要的研究方向之一。

為了解江蘇省徐州地區(qū)豬源大腸桿菌的耐藥現(xiàn)狀，本研究從徐州地區(qū)多個(gè)豬場采集患病仔豬腹瀉糞便和病死豬腸道內(nèi)容物，分離鑒定46株致病性大腸桿菌，開展徐州地區(qū)豬源大腸桿菌的耐藥監(jiān)測，旨在掌握該地區(qū)豬源致病性大腸桿菌耐藥性的變遷情況，為該地豬場大腸桿菌病的防治提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

藥敏質(zhì)控菌株ATCC25922，購于中國獸藥監(jiān)察所，本實(shí)驗(yàn)室保存。

46株致病性大腸桿菌臨床分離株來源于徐州銅山、邳州、豐縣、沛縣等養(yǎng)豬場，根據(jù)腹瀉癥狀初步診斷為仔豬黃白痢，無菌棉拭子采取患病仔豬肛門糞便、病死豬腸道內(nèi)容物涂在即用型麥康凱培養(yǎng)基平板上進(jìn)行培養(yǎng)分離，挑取粉紅單個(gè)菌落接種到即用型伊紅美蘭培養(yǎng)基平板上，挑取黑色金屬光澤單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色形態(tài)學(xué)觀察，生化反應(yīng)檢查，鑒定為大腸桿菌，在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行純培養(yǎng)，膠塞密封保存，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

藥敏紙片：除氟苯尼考、多粘菌素、恩諾沙星等藥敏片為實(shí)驗(yàn)室保存自制藥敏片外，其他藥敏片為BIO-KONT 溫州市康泰生物科技有限公司生產(chǎn)。

培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板（即用型）、伊紅美蘭培養(yǎng)基平板（即用型）、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板（即用型）、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

在2016-2018兩年間，從江蘇省徐州市周邊養(yǎng)殖場仔豬腹瀉病例中分離所得大腸桿菌中隨機(jī)挑選46株作為試驗(yàn)菌株，采用WHO推薦的Kirby—Bauer法對臨床常用15種藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。依據(jù)NCCLS有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每次測定均以質(zhì)控菌株為對照，只有當(dāng)質(zhì)控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內(nèi)測試菌株的結(jié)果才有效。按抗菌藥物敏感性試驗(yàn)擴(kuò)散法標(biāo)準(zhǔn)判定各菌株的敏感度，對所分離的細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。以敏感、中介、耐藥3種形式對抑菌圈大小作出判定，監(jiān)測細(xì)菌對臨床常用藥物的耐藥性。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬源大腸桿菌耐藥性監(jiān)測結(jié)果

2016-2018兩年間從豬腸道分離的46株大腸桿菌對15種藥物均產(chǎn)生了耐藥性，其中有12種藥物耐藥率在50%以上。耐藥情況比較嚴(yán)重的阿莫西林、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素均達(dá)到了80%以上，其余依次是氨芐西林鈉、復(fù)方SMZ、痢菌凈、恩諾沙星、乳酸環(huán)丙沙星、頭孢曲松、新霉素、慶大霉素、丁胺卡那霉素，頭孢噻呋、多粘菌素、氧氟沙星耐藥率則比較低。兩年內(nèi)，除氟苯尼考、多粘菌素、乳酸環(huán)丙沙星、痢菌凈4種藥物的耐藥率有所下降之外，其他藥物對大腸桿菌的耐藥率均保持或出現(xiàn)不同程度地增長，其中痢菌凈耐藥率下降幅度最大，丁胺卡那霉素耐藥率增長幅度最大。

2.2 大腸桿菌多重耐藥性

臨床分離的46株豬源大腸桿菌對15種抗菌藥物均表現(xiàn)出多重耐藥性，多重耐藥率達(dá)到100%，至少耐藥10種以上，其中10耐和11耐的菌株所占比例最大，分別為28.3%和23.9%，其次是13耐（17.4%）、12耐（15.2%）、14耐（13.0%）、15耐（2.2%），共有6種耐藥譜型，最多的耐藥譜為氨芐西林鈉-阿莫西林-頭孢曲松-恩諾沙星-乳酸環(huán)丙沙星-復(fù)方SMZ-新霉素-慶大霉素-氟苯尼考-強(qiáng)力霉素。

3 討論

2016-2018兩年內(nèi)，通過對徐州周邊豬場所分離的大腸桿菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)豬場大腸桿菌耐藥情況不容樂觀，大腸桿菌幾乎對臨床常用的抗菌藥物都產(chǎn)生了耐藥性，個(gè)別菌株的多重耐藥性甚至達(dá)到了15耐（全部）。15種臨床常用藥物中，阿莫西林、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素耐藥比較嚴(yán)重，這和該地養(yǎng)殖場用藥習(xí)慣有很大關(guān)系，既要考慮臨床療效，還要考慮成本、經(jīng)口給藥的適口性等因素導(dǎo)致這些藥物在臨床大量使用產(chǎn)生耐藥性。β-內(nèi)酰胺類抗生素中頭孢曲松和頭孢噻呋作為三代和四代頭孢的耐藥率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于阿莫西林和氨芐西林鈉，但是兩年內(nèi)此類抗生素耐藥率尤其是頭孢類卻在快速增長，充分反映出一個(gè)嚴(yán)峻現(xiàn)實(shí)，產(chǎn)ESBLS大腸桿菌耐菌株普遍存在并能水平傳播[1]耐藥性，耐藥性的發(fā)展速度高于新藥的研發(fā)速度。因此，在臨床治療中使用此類藥物應(yīng)考慮配合ESBLS抑制劑如棒酸、舒巴坦鈉、他唑巴坦等來聯(lián)合用藥消除ESBLS大腸桿菌的耐藥性，提高治療效果[2]。氨基糖苷類藥物臨床多口服用于腸道感染，雖然耐藥率較頭孢類低，但增長速度也很快，尤其是丁胺卡那霉素和新霉素，需要警惕。氟苯尼考和強(qiáng)力霉素作為藥效強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合的抗生素多年來配伍應(yīng)用，同樣造成耐藥性居高不下的局面，值得注意的是氟苯尼考耐藥率雖然較高，但已開始下降，說明已有豬場認(rèn)識到氟苯尼考的耐藥性，開始選擇性的合理使用藥物。對于三種喹諾酮類藥物的檢測，恩諾沙星和乳酸環(huán)丙沙星耐藥率普遍都在60%以上，氧氟沙星耐藥率則相對較低，這說明在徐州地區(qū)恩諾沙星、乳酸環(huán)丙在臨床使用較多，另外喹諾酮類藥物之間存在交叉耐藥性，對一種藥物產(chǎn)生耐藥性后，將會對其他同類藥物產(chǎn)生耐藥性[3]，提示在臨床治療上，當(dāng)大腸桿菌對喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥性后，要考慮更換其他種類的藥物。復(fù)方SMZ和痢菌凈兩種藥物療效明顯，成本低，常年大量用于臨床，高耐藥率應(yīng)該引起重視。

在大腸桿菌的耐藥率監(jiān)測中，大腸桿菌對氟苯尼考、多粘菌素、乳酸環(huán)丙沙星、痢菌凈的耐藥率有所下降，說明這些藥物臨床應(yīng)用有所減少，豬場在選擇藥物時(shí)對細(xì)菌的耐藥性越來越重視，用藥水平有所提高。痢菌凈耐藥率下降最快，這和痢菌凈有一定毒性、容易有藥殘、綠色養(yǎng)殖得到重視、已被國家限制使用有關(guān)。分析結(jié)果中，耐藥率最低的是頭孢噻呋，這可能是頭孢噻呋開發(fā)應(yīng)用時(shí)間較短，較高的價(jià)格影響了其臨床使用率?？蓮亩嗾尘?、氧氟沙星、氨基糖甙類等藥物這幾種藥物中選擇敏感藥物進(jìn)行防治豬大腸桿菌病。另外，本試驗(yàn)所選菌株最少都達(dá)到10耐以上，這和黃健強(qiáng)[4]等報(bào)道所反映的細(xì)菌多重耐藥現(xiàn)狀一致，說明耐藥性的發(fā)展速度逐步加快并十分普遍，因此為了減少多重耐藥性，臨床用藥時(shí)應(yīng)掌握適應(yīng)癥，避免長期使用同一種藥物，注意交替用藥和聯(lián)合用藥，同時(shí)還需要加強(qiáng)大腸桿菌耐藥機(jī)制的研究，尋找消除大腸桿菌耐藥質(zhì)粒和耐藥酶的方法，開發(fā)出新的藥物和耐藥抑制劑[5]。

參考文獻(xiàn)：

[1] 沈永恕，張春輝，荊新蕊，等.大腸埃希氏細(xì)菌中ELBLS耐藥質(zhì)粒的傳播與消除研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，2，38（2）：41-46.

[2]陳志華.β-內(nèi)酰胺酶抑制劑與β-內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)用在獸醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2003，28（6）：17-19.

[3] 張繼瑜，鄧旭明，趙榮材，等.喹諾酮類藥物耐藥性的分子機(jī)制[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2001，21（3）：312-316.

[4] 黃健強(qiáng)，南文金，胡鴻惠，等.粵北地區(qū)仔豬腹瀉大腸桿菌分離鑒定及耐藥性分析[J].微生物學(xué)雜志，2017，37（3）：59-64.

[5] 賀丹丹，黃良忠，陳孝潔，等.不同動物源大腸桿菌的耐藥性調(diào)查[J].中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（10）：211-215.