俞章平，余晗俏，李俊，李超

冠心病是血管病變，其形成機(jī)制中，內(nèi)皮損傷與功能障礙是主要的環(huán)節(jié)之一。內(nèi)皮祖細(xì)胞主要是一種骨髓衍生或來(lái)源于其他組織，在循環(huán)中逐漸遷移和增殖及分化，并最終形成成熟的內(nèi)皮細(xì)胞類型[1]。研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮祖細(xì)胞不但參與人類胚胎血管的形成，同時(shí)還參與人類出生后成長(zhǎng)過(guò)程中血管新生與內(nèi)皮受損后的修復(fù)過(guò)程[2]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子是促進(jìn)人類血管生成的重要因素，其不但可促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖，同時(shí)還具有趨化作用，對(duì)人體血管內(nèi)膜修復(fù)等具有一定作用。本研究探討循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在冠心病中的作用，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取浙江省金華市人民醫(yī)院2016年1月至2018年1月收治的冠心病患者70例作為觀察組，均符合《缺血性心臟病病名及診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3]，且自愿參與研究且簽署知情同意書(shū)；排除感染、惡性腫瘤、高血壓控制不理想、肺心病、急性心肌炎、風(fēng)濕性心臟病等其他心臟疾病，急性肺感染，中度以上貧血或白血病，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，嚴(yán)重肝腎功能障礙，糖尿病，自身免疫性疾病及心肌病等。其中男40例，女30例；年齡45～72歲，平均（62.3±3.5）歲；急性心肌梗死20例，不穩(wěn)定型心絞痛24例，穩(wěn)定型心絞痛26例。另選21例正常健康人群作為對(duì)照組，其中男12例，女9例；年齡44～70歲，平均（61.9±3.4）歲。兩組性別和年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 于清晨空腹下采集肘靜脈血液4 ml，然后貯存于4℃冰箱中待測(cè)，于4 h內(nèi)完成檢測(cè)。內(nèi)皮祖細(xì)胞：分別在試驗(yàn)管和對(duì)照管中加入全血100l，并加入抗體和同型對(duì)照，然后輕輕搖勻，放置于冰上避光孵育30 min。溶血素LysingSolution采用去離子水以1∶10進(jìn)行稀釋，分別在試驗(yàn)管和對(duì)照管中加入稀釋好的溶液2 ml，于常溫下避光孵育10 min。將溶血后的試管1 500 r/min離心5 min，去除上清液，并加入2 ml PBS緩沖液，然后再離心處理，去除上清液，洗滌后加入500lPBS，輕輕震蕩，等待流式檢測(cè)。循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞檢測(cè)：分別在試驗(yàn)管和對(duì)照管中加入100ml全血，然后加入抗體和同型對(duì)照，輕輕搖勻，放置于冰上避光孵育30 min，溶血素Lysing Solution采用去離子水以1∶10稀釋，分別在試驗(yàn)管和對(duì)照管中加入稀釋好的溶液2 ml，于常溫下避光孵育10 min。溶血后離心處理，棄除上清液，加入2 ml PBS，離心，洗滌，棄除上清液，洗滌后加入500l PBS，輕輕震蕩以使細(xì)胞重懸，等待流式檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平。

1.3 觀察指標(biāo) 鑒定血管內(nèi)皮祖細(xì)胞，并觀察不同患者外周血血管內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量變化和黏附能力、遷移能力、生長(zhǎng)因子水平變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)±準(zhǔn)差表示，多組比較采用方差檢驗(yàn)；相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血管內(nèi)皮祖細(xì)胞鑒定情況 血管內(nèi)皮祖細(xì)胞存在內(nèi)皮祖細(xì)胞特性，培養(yǎng)7d后形成梭形內(nèi)皮細(xì)胞。

2.2 各組血管內(nèi)皮祖細(xì)胞情況 各組血管內(nèi)皮祖細(xì)胞克隆形成數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者血管內(nèi)皮祖細(xì)胞克隆形成數(shù)高于不穩(wěn)定型心絞痛患者、穩(wěn)定型心絞痛、對(duì)照組，且不穩(wěn)定型心絞痛患者高于對(duì)照組，穩(wěn)定型心絞痛患者低于對(duì)照組。見(jiàn)表1。

2.3 各組內(nèi)皮祖細(xì)胞黏附能力比較 冠心病各組間貼壁細(xì)胞數(shù)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者貼壁細(xì)胞數(shù)量與不穩(wěn)定型心絞痛患者相近，穩(wěn)定型心絞痛患者低于不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死患者。見(jiàn)表2。

2.4 各組血管內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移情況比較 各組血管內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移數(shù)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者血管內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移數(shù)量高于不穩(wěn)定型心絞痛、穩(wěn)定型心絞痛、對(duì)照組，不穩(wěn)定型心絞痛患者高于對(duì)照組，而穩(wěn)定型心絞痛患者低于對(duì)照組。見(jiàn)表3。

2.5 各組血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較 各組血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。穩(wěn)定型心絞痛患者血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與對(duì)照組相近；而急性心肌梗死患者、不穩(wěn)定型心絞痛患者高于對(duì)照組，且急性心肌梗死患者高于不穩(wěn)定型心絞痛。見(jiàn)表4。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與循環(huán)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞黏附能力無(wú)相關(guān)性（=0.28，＞ 0.05），而與循環(huán)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量、遷移能力呈正相關(guān)性（=0.84、0.72，均＜ 0.05）。

表1 4組血管內(nèi)皮祖細(xì)胞情況 CFU/106

表2 3組內(nèi)皮祖細(xì)胞黏附能力比較 個(gè)/視野

表3 4組血管內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移情況比較 個(gè)/視野

3 討論

早期內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分化能力較差，其通過(guò)旁分泌方式來(lái)促進(jìn)血管與微血管形成；而晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖和遷移及分化能力，可直接進(jìn)入受損組織以修復(fù)小管內(nèi)皮，并形成新的毛細(xì)血管[4]。正常健康人群外周血液中內(nèi)皮祖細(xì)胞成為穩(wěn)定狀態(tài)，當(dāng)出現(xiàn)急性心力衰竭等事件時(shí)，內(nèi)皮祖細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)短暫升高。有文獻(xiàn)報(bào)道，內(nèi)皮功能不良是成人發(fā)生心血管疾病的基礎(chǔ)[5]。單層內(nèi)皮細(xì)胞可分泌重要調(diào)節(jié)因子，為血小板與粒細(xì)胞提供光滑管壁結(jié)構(gòu)，當(dāng)患者發(fā)生高血壓等疾病時(shí)，其可削弱患者血管內(nèi)皮功能，增加縮血管誤診等產(chǎn)生，從而增加患者細(xì)胞黏附力，促進(jìn)中層平滑肌細(xì)胞增殖而形成血栓[6]。部分生理變化也會(huì)致人體內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量發(fā)生變化，如雌激素等可增加人體內(nèi)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量，而慢性心力衰竭患者，其內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量在心功能I～I(xiàn)I級(jí)時(shí)增加，在心功能III～I(xiàn)V時(shí)下降[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)高于對(duì)照組，且遷移能力明顯高于其他患者，但黏附能力與不穩(wěn)定型心絞痛患者無(wú)明顯差異；不穩(wěn)定型心絞痛患者內(nèi)皮祖細(xì)胞和遷移能力明顯高于穩(wěn)定型心絞痛與對(duì)照組；穩(wěn)定型心絞痛患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和遷移能力明顯低于對(duì)照組，與文獻(xiàn)[8]報(bào)道結(jié)果相似。

表4 4組血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較 ng/L

目前尚不完全清楚內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的來(lái)源，但缺血心肌組織可分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，這主要是因缺氧狀態(tài)是內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的始動(dòng)因子。正常人群血清中存在極低的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，當(dāng)心肌細(xì)胞處于缺氧、缺血狀態(tài)下，其內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子將會(huì)明顯增加。內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子可促進(jìn)人體內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員和增殖，促進(jìn)人體血管內(nèi)膜修復(fù)與新生。

綜上所述，臨床可通過(guò)檢測(cè)患者血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量來(lái)判斷冠心病患者的預(yù)后，為臨床治療提供依據(jù)。