吳梓政，馮凱，劉銀鳳，任佳，韋麗光，韓猛

(秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島066000)

近年來(lái)，各國(guó)學(xué)者越來(lái)越關(guān)注肥胖與乳腺癌的關(guān)系。目前，研究顯示肥胖能提高乳腺癌的發(fā)病率[1]。在肥胖與乳腺癌的相關(guān)研究中，脂肪因子是聯(lián)系二者的橋梁。研究顯示，健康成年人血清中脂聯(lián)素水平一般在3～30 μg/mL[2]。不同于大多數(shù)脂肪細(xì)胞因子，脂聯(lián)素被認(rèn)為對(duì)機(jī)體具有保護(hù)性作用。Brakenhielm等[3]發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素可以抑制新生血管的形成，并且可負(fù)性調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，在原位直腸癌裸鼠模型中脂聯(lián)素可以抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)。本研究通過(guò)免疫組化法檢測(cè)脂聯(lián)素、VEGF在乳腺癌組織中表達(dá)變化，并進(jìn)一步分析二者表達(dá)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集秦皇島市第一醫(yī)院2015年12月～2016年6月行乳腺癌改良根治術(shù)或保乳術(shù)的原發(fā)性乳腺癌患者80例，術(shù)中留取乳腺癌及癌旁正常乳腺組織，術(shù)后均制作石蠟標(biāo)本?；颊咝g(shù)后均經(jīng)病理學(xué)確診，術(shù)前均未行任何抗癌治療，且臨床資料及病理資料完整?；颊呔鶠榕?，年齡 27～65 歲，中位年齡47歲；病程0.5～12個(gè)月,平均2個(gè)月；腫瘤直徑<3 cm 40例，≥3 cm 40例；臨床分期0～Ⅱ期52例，Ⅲ期28例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)32例，Ⅲ級(jí)48例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無(wú)轉(zhuǎn)移48例；ER陽(yáng)性50例，PR陽(yáng)性40例，C-erbB-2陽(yáng)性36例。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 脂聯(lián)素、VEGF檢測(cè)方法 采用免疫組化法，嚴(yán)格試劑盒說(shuō)明書(shū)操作；脂聯(lián)素一抗為小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體 (英國(guó)Abcam公司)，VEGF一抗為兔抗人VEGF單克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。光學(xué)顯微鏡下觀察，胞質(zhì)或胞膜中呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每例切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。按腫瘤細(xì)胞著色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率分別評(píng)分，≤10%為0分、11～25%為1分、26～50%為2分、>50%為3分，無(wú)色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分，兩項(xiàng)相乘≥1判為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；脂聯(lián)素與VEGF的關(guān)系采用Spearman相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中脂聯(lián)素、VEGF表達(dá)比較 乳腺癌組織中脂聯(lián)素陽(yáng)性表達(dá)率為57.5%，低于癌旁正常乳腺組織中的92.5%(χ2=26.113，P<0.01)；乳腺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為52.5%，高于癌旁正常乳腺組織中的15.0%(χ2=31.529，P<0.01)。

2.2 不同臨床病理特征乳腺癌組織中脂聯(lián)素、VEGF表達(dá)比較 腫瘤直徑≥3 cm、組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)、發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中脂聯(lián)素陽(yáng)性表達(dá)低于腫瘤直徑<3 cm、組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)、未發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)，不同年齡、病程、臨床分期及ER、PR、C-erbB-2表達(dá)情況的乳腺癌組織中脂聯(lián)素表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)、發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)高于組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)、未發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)，不同年齡、病程、腫瘤直徑、臨床分期及ER、PR、C-erbB-2表達(dá)情況的乳腺癌組織中VEGF表達(dá)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同臨床病理特征乳腺癌組織中脂聯(lián)素、VEGF表達(dá)比較

2.3 乳腺癌組織中脂聯(lián)素與VEGF表達(dá)的相關(guān)性 在34例脂聯(lián)素表達(dá)陰性的乳腺癌組織中，VEGF陽(yáng)性32例、陰性2例；在46例脂聯(lián)素表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌組織中，VEGF表達(dá)陽(yáng)性12例、陰性36例。Spearman 相關(guān)性分析顯示，乳腺癌組織中脂聯(lián)素與VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.716 ，P<0.05) 。

3 討論

近年來(lái)，大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素不僅具有調(diào)節(jié)糖脂代謝的作用，而且與多系統(tǒng)的惡性腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。有研究表明，脂聯(lián)素為血管生成的抑制劑，與惡性婦產(chǎn)科疾病中血漿VEGF水平呈負(fù)相關(guān)[4]；并且，可抑制直腸癌裸鼠模型中START-VEGF信號(hào)通路，減少VEGF mRNA的表達(dá)及癌組織內(nèi)微血管密度[5]。

大多數(shù)流行病學(xué)研究得到相似的研究結(jié)果，與對(duì)照組(健康女性)比較，女性乳腺癌患者血清脂聯(lián)素水平降低，這種現(xiàn)象在絕經(jīng)后女性中更加明顯。本研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌組織中脂聯(lián)素的陽(yáng)性表達(dá)低于癌旁正常乳腺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與國(guó)外研究[6]相似。進(jìn)一步分析乳腺癌中脂聯(lián)素表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑≥3 cm、組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)、發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中脂聯(lián)素陽(yáng)性表達(dá)低于腫瘤直徑<3 cm、組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)、未發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，不同年齡、病程、臨床分期及ER、PR、C-erbB-2表達(dá)情況的乳腺癌組織中脂聯(lián)素表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。另有文獻(xiàn)[7]報(bào)道，脂聯(lián)素水平降低可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，增加復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移概率，提示不良預(yù)后。因此，我們認(rèn)為脂聯(lián)素可作為評(píng)估乳腺癌患者病情及預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。我們?nèi)孕钄U(kuò)大樣本、延長(zhǎng)隨訪時(shí)間，以明確脂聯(lián)素在乳腺癌預(yù)后方面的意義。

癌組織高表達(dá)VEGF是惡性腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移出現(xiàn)病情進(jìn)展的一個(gè)重要因素[8, 9]，VEGF在腫瘤增殖、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、新生血管生成等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[10, 11]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織，與相關(guān)報(bào)道相似[12]。進(jìn)一步分析VEGF與乳腺癌患者臨床病理特征關(guān)系發(fā)現(xiàn)，組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)、發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)高于組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)、未發(fā)生巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，與相關(guān)研究結(jié)果類(lèi)似[13]。有研究表明，VEGF可加速淋巴系統(tǒng)中腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散速度而促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[14]，推測(cè)VEGF可顯著影響乳腺癌的發(fā)展階段和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究顯示，不同年齡、病程、腫瘤直徑、臨床分期及ER、PR、C-erbB-2表達(dá)情況的乳腺癌組織中VEGF表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。乳腺癌組織高表達(dá)VEGF可促進(jìn)腫瘤新生血管及淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖、遷移，導(dǎo)致微小血管的滲透性增加，促進(jìn)新生血管及淋巴管形成，為惡性腫瘤的血行轉(zhuǎn)移及淋巴轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。

脂聯(lián)素和VEGF表達(dá)均與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤組織學(xué)分級(jí)相關(guān)，且相關(guān)性分析得出脂聯(lián)素與 VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。我們推測(cè)乳腺癌組織中脂聯(lián)素和VEGF相互協(xié)同促進(jìn)腫瘤血管生成，導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展；脂聯(lián)素低表達(dá)可能通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)加速腫瘤的進(jìn)展，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。

綜上所述，脂聯(lián)素不但參與了糖和脂肪的代謝過(guò)程，而且在肥胖相關(guān)腫瘤的發(fā)病和發(fā)展中扮演著重要角色。我們認(rèn)為，脂聯(lián)素未來(lái)有可能會(huì)作為一種新的腫瘤抑制因子，有重要的臨床應(yīng)用前景。研發(fā)脂聯(lián)素受體激動(dòng)劑或制備重組脂聯(lián)素，提高血脂聯(lián)素水平和脂聯(lián)素受體水平有可能為惡性腫瘤的治療提供新的方向。