廖柳清,唐艷青,鐘榮德,翁藝
(1 廣州市增城區(qū)婦幼保健院,廣州511300;2 廣州市增城區(qū)荔城街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心)
研究表明,基礎(chǔ)領(lǐng)域的相關(guān)分子改變,能夠在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。腫瘤相關(guān)分子的波動,能夠通過激活癌基因,提高下游信號通路的激活等途徑,進(jìn)而導(dǎo)致乳腺癌病情的進(jìn)展[1]。神經(jīng)生長因子(NGF)表達(dá)上升,能夠通過促進(jìn)生長因子受體的激活,提高癌細(xì)胞內(nèi)生長因子相關(guān)信號通路的激活,提高乳腺上皮細(xì)胞核DNA的分裂速度,促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖效應(yīng)[2];金屬硫蛋白1E(MT-1E)是金屬蛋白酶家族成員,其能夠通過乳腺上皮細(xì)胞膜表面巰基酶的激活,進(jìn)而促進(jìn)金屬蛋白酶的磷酸化和巰基化,促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲能力和其他生物學(xué)特征的改變[3]。部分研究者探討了NGF表達(dá)與惡性腫瘤的關(guān)系,認(rèn)為NGF表達(dá)上升能夠顯著促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生和臨床病情的進(jìn)展[4],但對于NGF、MT-1E與乳腺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究不足。2016年7月~2017年12月,我分析了乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平變化及其與病理學(xué)特征的關(guān)系,旨在為乳腺癌患者的診療及預(yù)后評估提供參考。
1.1 臨床資料 收集同期增城區(qū)婦保院確診的乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合2015年《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范》中乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];②年齡19~65歲;③經(jīng)乳腺鉬靶、超聲、穿刺活檢或術(shù)后病理檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn):①已經(jīng)實施放化療;②免疫功能缺陷;③伴有其他部位惡性腫瘤;④伴有全身感染性疾病。共選取乳腺癌患者90例(乳腺癌組),另選取同期確診的乳腺良性疾病患者90例(良性組)作為對照。乳腺癌組均為女性,年齡(50.2±7.6)歲,腫瘤位于左側(cè)乳房42例、右側(cè)乳房48例,腫瘤直徑(3.5±5.2)cm,組織學(xué)分級:G1級18例、G2級36例、G3級36例,TNM分期:Ⅰ期10例、Ⅱ期38例、Ⅲ期32例,發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。良性組均為女性,年齡(49.4±7.2)歲,其中乳腺纖維瘤44例、乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤13例、乳腺脂肪瘤15例、乳腺平滑肌瘤12例、其他6例。兩組性別、年齡具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),受試者均簽署知情同意書。
1.2 血清NGF、MT-1E檢測方法 采用ELISA法。采集患者入院后24 h內(nèi)的肘部靜脈血4 mL,以1 500 r/min離心15 min,收集上清液;在每個聚苯乙烯板中加入上述液體0.1 mL,4 ℃過夜孵育;加入磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次,每次3 min。在每個聚苯乙烯板孔中加入NGF、MT-1E抗體(1∶800,南京伯斯金生物公司),37 ℃孵育30 min;加入PBS洗滌3次,每次3 min;每孔中加入TMB溶液底物0.1 mL,37 ℃反應(yīng)20 min;加入2 mol/L硫酸0.05 mL終止反應(yīng),采用DG5033A酶標(biāo)儀(南京華東電子科技公司)檢測OD值,計算相應(yīng)濃度。
2.1 兩組血清NGF、MT-1E水平比較 見表1。
表1 兩組血清NGF、MT-1E水平比較
2.2 乳腺癌組不同病理學(xué)特征患者血清NGF、MT-1E水平比較 見表2。
不同病理性因素或者遺傳高危因素的攜帶,均能夠促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生。在部分合并有雌激素受體敏感性改變的人群中,乳腺癌的發(fā)病率和病死率均可進(jìn)一步上升。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌患者的無進(jìn)展生存期不足34個月,治療后乳腺癌患者的病情緩解率不足30%[6]。
表2 乳腺癌組不同病理學(xué)特征患者血清NGF、MT-1E水平比較
臨床上對于乳腺癌患者病情評估缺乏血清學(xué)方面的指標(biāo),而通過對乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平的分析研究,能夠在揭示乳腺癌病情進(jìn)展機(jī)制的同時,還能夠為臨床上乳腺癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后評估或者早期血清學(xué)篩查提供參考。
NGF是生長因子家族成員,其能夠通過提高下游生長因子受體的活性,促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)多種信號通路的上調(diào),提高AKT、MAPK的激活程度,進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄和增殖過程的異常。NGF能夠通過激活癌細(xì)胞DNA的上游轉(zhuǎn)錄啟動子,提高癌細(xì)胞DNA的輔助和擴(kuò)增速度,進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展?;A(chǔ)方面的研究還認(rèn)為,NGF能夠提高癌細(xì)胞的浸潤和黏附能力,進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)[7];MT-1E是金屬巰基蛋白酶家族成員,其蛋白結(jié)構(gòu)上包括了多個巰基化的結(jié)構(gòu),能夠通過激活含巰基蛋白酶,進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解,為上皮耐藥性惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供前提[8]。相關(guān)的研究還表明,MT-1E能夠促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換過程,利于癌細(xì)胞對于基底膜組織的突破,進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展[9]。部分研究探討了NGF的表達(dá)與乳腺癌的關(guān)系,認(rèn)為NGF表達(dá)上升與乳腺癌的早期發(fā)生密切相關(guān)[10],但對于MT-1E的研究較少。
本研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌組血清NGF、MT-1E水平均上升,均高于良性組,提示NGF、MT-1E高水平均能夠參與乳腺癌的病情進(jìn)展。通過分析其基礎(chǔ)方面的原因,考慮可能與NGF、MT-1E的下列幾個方面的病理特性作用有關(guān)[11, 12]:①NGF水平上升,不僅能夠提高癌細(xì)胞的增殖效應(yīng),同時還能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡抑制,導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡比例明顯減少,促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展;②MT-1E能夠通過提高其對于巰基蛋白酶的調(diào)控,進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞膜表面跨膜受體蛋白的激活,促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)第二信使的上調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞的異常分化過程。劉宇等[13]研究得出與本研究相似的結(jié)論,其發(fā)現(xiàn)在乳腺癌患者中NGF表達(dá)水平和陽性率均可平均上升約40%,同時在合并有明顯的腫瘤惡病質(zhì)或高腫瘤負(fù)荷患者中NGF表達(dá)水平可進(jìn)一步上升。本研究在探討血清NGF、MT-1E水平與乳腺癌患者病理學(xué)特征關(guān)系的過程中,發(fā)現(xiàn)血清NGF水平與乳腺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型等并無明顯的關(guān)系,推測NGF可能在促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展方面并無顯著作用;但也考慮可能與本研究納入的樣本較為局限,或由于NGF蛋白的檢測靈敏度較低有關(guān)。在組織學(xué)分級G3級、TNM分期Ⅲ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中,血清MT-1E水平可明顯上升,提示MT-1E水平與乳腺癌患者的病理學(xué)特征有關(guān)。這主要由于MT-1E水平上升能夠促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞對于淋巴結(jié)組織的黏附能力,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的分化成熟障礙等,進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌臨床病理特征的進(jìn)展[14, 15]。
綜上所述,乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平明顯升高,其中MT-1E水平上升與乳腺癌患者的病理學(xué)特征密切相關(guān)。本研究并未探討NGF、MT-1E的內(nèi)在關(guān)系,同時缺乏對于血清NGF、MT-1E水平與乳腺癌患者臨床轉(zhuǎn)歸關(guān)系的研究,今后將完善上述不足之處。