馬合勤，岑嘉茵

（佛山市順德區(qū)農(nóng)業(yè)綜合技術(shù)中心，廣東佛山 528333）

氨基甲酸酯類殺蟲劑的作用機(jī)理和有機(jī)磷類殺蟲劑相似，主要通過(guò)抑制膽堿酯酶活性而致效。由于多數(shù)氨基甲酸酯類殺蟲劑與膽堿酯酶的結(jié)合可逆，且在機(jī)體內(nèi)快速水解，因此，膽堿酯酶的活性較易恢復(fù)，其毒性較有機(jī)磷類殺蟲劑毒性低[1-2]。

由于氨基甲酸酯類殺蟲劑極性強(qiáng)，熱穩(wěn)定性較差，因此，其殘留檢測(cè)方法目前廣泛使用的有液相色譜-熒光（HPLC-FLD）法[3-4]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）法[5-7]、氣相色譜法[8]和氣相色譜-質(zhì)譜法[9-10]等。此外，液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜（LC-TOF-MS）[11]被用于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥多殘留分析，成為目前殘留分析研究的熱點(diǎn)。HPLC-FLD法靈敏度高，選擇性強(qiáng)，但易受基質(zhì)干擾；HPLC-MS法測(cè)定氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留具有定量準(zhǔn)確，靈敏度高，抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是目前痕量檢測(cè)的首選方法。NY/T 761—2008[4]中介紹的前處理方法試劑用量大，耗時(shí)長(zhǎng)，步驟相對(duì)較多；改進(jìn)的QuEChERS方法相對(duì)簡(jiǎn)單快捷，但成本較高[7]。本試驗(yàn)探討蔬菜中滅多威、涕滅威、克百威和甲萘威4種農(nóng)藥及其代謝物涕滅威砜（aldicarb sulfone）、涕滅威亞砜（aldicarb sulfoxide）、3-羥基克百威（3-hydroxy-carbofuran）的殘留分析方法。樣品使用乙腈提取，Agilent Bond Elut QuEChERS小柱凈化，融合了文獻(xiàn)[4]和文獻(xiàn)[7]前處理優(yōu)點(diǎn)，試劑使用量少，成本相對(duì)較低，操作步驟少，能快速檢測(cè)蔬菜中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥，為分析確證工作提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇、乙腈均為色譜純；試驗(yàn)用水為Milli-Q高純水；氯化鈉為分析純；醋酸銨為優(yōu)級(jí)純；15 mL分散固相萃取凈化管（安捷倫公司，5982-5656CH），內(nèi)含PSA（N-丙基乙二胺）0.15 g、硫酸鎂0.9 g；氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/mL），購(gòu)于農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心。

1.2 儀器與設(shè)備

U3000 DGLC＋TSQ Endura超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析系統(tǒng)，配有電噴霧離子源（ESI）；德國(guó)Retsch公司GM200型研磨機(jī)；美國(guó)Organomation公司N-EVAP 112型氮吹儀。

1.3 樣品前處理

取切碎勻漿后的蔬菜樣品20 g（±0.1 g），放入100 mL離心管中，加入40 mL乙腈、9 g烘干的氯化鈉。渦旋30 s，蓋緊離心管，用力振搖1 min，然后以4 000 r/min離心10 min。

取上層乙腈液10 mL轉(zhuǎn)入分散固相萃取凈化管，加入陶瓷均質(zhì)子（5982-9313），4 000 r/min離心5 min。取4 mL萃取液轉(zhuǎn)移至離心管中，氮?dú)獯蹈伞Ｓ? mL流動(dòng)相復(fù)溶，0.2 μm過(guò)濾器過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶待測(cè)。

1.4 標(biāo)樣溶液配制

分別移取100 μL上述100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，配制成質(zhì)量濃度為1 μg/mL的氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物標(biāo)樣儲(chǔ)備液，避光低溫保存。

移取適量體積的上述標(biāo)樣儲(chǔ)備液于同一容量瓶中，用乙腈稀釋成所需濃度的混合標(biāo)樣工作溶液，避光低溫保存。

1.5 儀器條件

1.5.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil GOLD Dim柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱溫：40℃；樣品室溫度：10℃；進(jìn)樣體積：10.0 μL；流速：0.30 mL/min；流動(dòng)相：醋酸銨水溶液（5 mmoL/L NH4OAc＋0.1%甲酸）、乙腈，梯度洗脫程序見(jiàn)表1。整個(gè)分析時(shí)長(zhǎng)12 min。

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源（ESI），正離子模式；毛細(xì)管電壓：3.2 kV；離子源溫度：110℃；錐孔氣流量：75 L/h；光電倍增器電壓：650 V。定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞電壓和錐孔電壓等條件參數(shù)詳見(jiàn)表2。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

表2 質(zhì)譜條件及參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性回歸

使用空白樣品基質(zhì)溶液將標(biāo)樣溶液配制成質(zhì)量濃度分別為0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 μg/mL混合標(biāo)樣工作溶液，在上述儀器條件下進(jìn)行測(cè)定。4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物能有效分離，保留時(shí)間在6.0 min內(nèi)，響應(yīng)良好。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.025～0.80 μg/mL時(shí)，4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.997 4～0.999 8。方法的最低檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.003 mg/kg。線性回歸試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 方法的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.2 前處理?xiàng)l件的選擇

文獻(xiàn)[4]中樣品經(jīng)乙腈提取后，提取液蒸干，用甲醇＋二氯甲烷重新定容后，使用氨基小柱分離凈化，再對(duì)洗脫液吹干定容。試驗(yàn)過(guò)程除了經(jīng)氨基小柱凈化，還需要經(jīng)過(guò)2次吹干定容，處理時(shí)間較長(zhǎng)，且2次吹干易造成試驗(yàn)回收率偏低。本試驗(yàn)中試樣采用乙腈提取后，經(jīng)Agilent Bond Elut QuEChERS分散固相萃取管凈化，簡(jiǎn)化了處理過(guò)程。試驗(yàn)步驟相對(duì)較少，處理時(shí)間短，使用耗材少，回收率高，凈化效果好，定量、定性更準(zhǔn)確，縮短了試驗(yàn)人員接觸化學(xué)試劑的時(shí)間。

2.3 流動(dòng)相的選擇

當(dāng)目標(biāo)農(nóng)藥的加合離子峰含有[M＋H]＋、[M＋Na]＋或[M＋NH4]＋時(shí)，向由水＋乙腈組成的流動(dòng)相水相中加入5 mmol/L醋酸銨，各種農(nóng)藥加合離子峰速率迅速提高。在電噴霧離子源ESI＋方式下，比較各種農(nóng)藥加合離子豐度。結(jié)果顯示：涕滅威亞砜[M＋Na]＋＞[M＋NH4]＋；涕滅威砜[M＋H]＋＞[M＋Na]＋、滅多威[M＋H]＋＞[M＋Na]＋、3-羥基克百威[M＋H]＋＞[M＋NH4]＋＞[M＋Na]＋、涕滅威[M＋Na]＋＞[M＋NH4]＋＞[M＋H]＋、克百威[M＋H]＋＞[M＋Na]＋＞[M＋NH4]＋、甲萘威[M＋NH4]＋＞[M＋H]＋＞[M＋Na]＋。故選擇乙腈＋5 mmol/L醋酸銨水溶液體系為流動(dòng)相，選取加合離子峰豐度較高且穩(wěn)定的準(zhǔn)分子離子峰為母離子。

與甲醇相比，以乙腈為流動(dòng)相的有機(jī)相目標(biāo)分析物的分離度和峰形更好，因此，流動(dòng)相中的有機(jī)相選擇乙腈。在上述條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 氨基甲酸酯類農(nóng)藥液相色譜圖

2.4 方法回收率及精密度試驗(yàn)

采用空白加標(biāo)的方法進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)。分別添加混合標(biāo)樣溶液使樣品中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02、0.04、0.20 mg/kg，每個(gè)添加水平設(shè)3個(gè)平行樣品。4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物的回收率為84.0%～109.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.2%～12.4%，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 方法回收率和精密度結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中克百威、滅多威等4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物的殘留，以乙腈＋5 mmol/L醋酸銨水溶液梯度洗脫，在正離子模式下監(jiān)測(cè)，最低檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.003 mg/kg。方法準(zhǔn)確，選擇性高，可以滿足蔬菜中4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定和確證。

本方法滿足農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，分析過(guò)程耗時(shí)短，誤差小，且溶劑使用量少。