何洪武，穆?tīng)栐帷び扰?，賈海軍，賽普丁·馬合木提，蘇 剛，劉震江， 周 程，牛志宏*

（1.新疆烏恰縣畜牧獸醫(yī)局，新疆 烏恰縣 845450；2.新疆豪子畜牧業(yè)有限公司，新疆 奇臺(tái)縣 831800）

胚胎移植技術(shù)是一項(xiàng)非常成熟的繁育技術(shù)，在畜牧業(yè)生產(chǎn)和科研中得到廣泛的應(yīng)用[1，2]，已經(jīng)商品化的性控精液，能提高母犢的比例，可以達(dá)到90%以上的母犢率[3]，我們將性控凍精和超數(shù)排卵技術(shù)結(jié)合起來(lái)，生產(chǎn)體外性控胚胎進(jìn)行胚胎移植，可快速的進(jìn)行純繁，擴(kuò)大乳肉兼用型西門(mén)塔爾牛的種群，培育優(yōu)良的西門(mén)塔爾種母牛和種公牛，創(chuàng)造更高的經(jīng)濟(jì)效益[4，5]。

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)對(duì)象

2019 年3-6 月，選擇新疆奇臺(tái)縣新疆豪子畜牧業(yè)有限公司良繁場(chǎng)飼養(yǎng)的健康、無(wú)繁殖障礙的大育成

西門(mén)塔爾母牛162 頭為供體牛，年齡在14～16 月之間，體重達(dá)到350 kg 以上。 試驗(yàn)分為2 組，性控冷凍精液組102 頭，為實(shí)驗(yàn)組；常規(guī)冷凍精液組為60 頭，為對(duì)照組。

1.2 試驗(yàn)藥品

促卵泡素（FSH）400 mg/20 mL 加拿大（Animal Health Canada Information Center） 生產(chǎn)，氯前列烯醇（PG）由寧波第二激素廠生產(chǎn)，陰道栓（CIDR）由新西蘭DEC 公司生產(chǎn)， 沖卵液，胚胎保存液，胚胎冷凍液為美國(guó)生產(chǎn)。

1.3 精液的選擇

西門(mén)塔爾牛性控凍精由新疆天山畜牧生物工程有限公司生產(chǎn)， 常規(guī)冷凍精液為德國(guó)諾丁林公司生產(chǎn)。 冷凍精液解凍后每支細(xì)管為0.25 mL，約含200 萬(wàn)個(gè)精子，精子活力0.4 以上。

1.4 超數(shù)排卵方案

選擇除發(fā)情當(dāng)日的任意一天埋入陰道栓， 從埋栓第5 d 開(kāi)始（埋栓當(dāng)日為0 d， 連續(xù)4 d 肌肉注射FSH，采用遞減法，早晚等劑量注射，最好早晚對(duì)時(shí)注射，第3 d 早晚各肌注前列腺素（PG）0.4 mg，超排注射結(jié)束的當(dāng)天早上撤出陰道栓，并用含青霉素的生理鹽水清洗陰道。

1.5 人工授精

撤栓后開(kāi)始觀察發(fā)情表現(xiàn)，大部分在第2 d 早上就開(kāi)始發(fā)情，看到母牛接受爬跨后14～16 h 輸精，10 h 后重復(fù)輸精一次，每次輸精使用一支凍精。 凍精從液氮罐取出直接放入37.5 ℃的溫水中進(jìn)行解凍，10 s 后進(jìn)行輸精工作，精液必須輸至子宮角小彎處。

1.6 沖卵和胚胎采集

沖胚采用非手術(shù)法，在發(fā)情后第7 d（發(fā)情日為0 d），進(jìn)行沖胚，將回收的沖胚液帶回實(shí)驗(yàn)室檢出胚胎，根據(jù)胚胎的形態(tài)，細(xì)胞的數(shù)量和大小以及胚胎的發(fā)育情況，將胚胎分為可用胚胎和退化，未受精等級(jí)別，可用胚胎用于冷凍及鮮胚移植，退化胚胎及未受精卵母細(xì)胞則棄用。

1.7 沖胚后子宮處理

沖胚結(jié)束后， 用沖卵管向供體牛子宮內(nèi)注射長(zhǎng)效抗生素藥物50～100 mL， 同時(shí)肌肉注射前列腺素（PG）0.4 mL。

2 結(jié) 果

2.1 同期發(fā)情結(jié)果比較

觀察經(jīng)過(guò)激素處理后西門(mén)塔爾牛的發(fā)情表現(xiàn)，并以接受爬跨為觀察重點(diǎn)。 撤出陰道栓后只有試驗(yàn)組一頭西門(mén)塔爾牛未發(fā)情，發(fā)情率達(dá)99.38%。 經(jīng)數(shù)據(jù)分析，將該未發(fā)情牛剔除試驗(yàn)組，不影響后續(xù)結(jié)果分析。

2.2 兩種凍精對(duì)西門(mén)塔爾牛超排結(jié)果比較

實(shí)驗(yàn)組超排供體西門(mén)塔爾牛102 頭， 用性控凍精輸精后回收胚胎數(shù)1 122 枚， 平均回收胚胎數(shù)11.00±3.11 枚/頭，其中可用胚數(shù)575 枚，平均可用胚5.64±1.72 枚/頭，退化胚胎186 枚，未受精361 枚。對(duì)照組超數(shù)排卵西門(mén)塔爾供體牛60 頭，用常規(guī)凍精輸精后回收胚胎數(shù)731 枚，頭均回收胚胎數(shù)12.18±3.93 枚，其中可用胚數(shù)347 枚，頭均可用胚5.78±1.88 枚，退化胚胎數(shù)為175 枚，未受精數(shù)為209 枚。 兩組之間頭均胚胎數(shù)、頭均可用胚胎數(shù)和頭均未受精胚卵母細(xì)胞數(shù)均無(wú)顯著差異（P ＞0.05），頭均退化胚胎數(shù)差異顯著（P ＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種不同凍精對(duì)西門(mén)塔爾牛超排結(jié)果比較

3 討 論

同期發(fā)情是進(jìn)行胚胎移植的前提和基礎(chǔ)，高發(fā)情率和高發(fā)情同期化程度將影響供體牛的利用效率和有效胚胎數(shù)[6]。 本試驗(yàn)用CIDR 陰道栓和依次遞減的促卵泡素FSH 劑量處理的西門(mén)塔爾牛同期發(fā)情率達(dá)到99.38%，高于已報(bào)道的試驗(yàn)結(jié)果。 由于供體牛經(jīng)超數(shù)排卵后有大量的卵泡生成，排卵的數(shù)量也比較多[7，8，9]，所以適當(dāng)?shù)耐坪筝斁珪r(shí)間，在看到接受爬跨后14～16 h 輸精是可行的，而且超排藥物FSH 劑量應(yīng)當(dāng)在控制在合適的計(jì)量，過(guò)高則會(huì)使卵巢超排反應(yīng)過(guò)度，過(guò)低則達(dá)不到超排效果，我們經(jīng)過(guò)摸索，總結(jié)認(rèn)為加拿大的促卵泡素FSH 劑量應(yīng)當(dāng)控制在500 mg/頭較為合適。

由于性控凍精有效精子在生產(chǎn)過(guò)程中要經(jīng)過(guò)精子染色，分選過(guò)程，對(duì)精子產(chǎn)生一定的傷害，其精子活力和受精能力可能會(huì)受到影響。 本研究的試驗(yàn)組和對(duì)照組供體牛的超排后進(jìn)行人工授精，兩組頭均可用胚胎差異不顯著，說(shuō)明該性控凍精的受精能力與常規(guī)凍精無(wú)差別。 性控凍精和常規(guī)凍精生理狀態(tài)的不同，性控精液分選過(guò)程會(huì)改變精子質(zhì)膜狀態(tài)的生理狀態(tài)，縮短完成獲能反應(yīng)時(shí)間而具有受精能力，并與卵母細(xì)胞結(jié)合，雖然也會(huì)縮短精子的壽命，但通過(guò)改變受精時(shí)間，可顯著提高性控凍精受精能力[10，11，12]。性控胚胎的經(jīng)濟(jì)價(jià)值要比常規(guī)胚胎胚胎高很多，應(yīng)用性控凍精生產(chǎn)體內(nèi)胚胎可以快速提高具有頂級(jí)遺傳資源品質(zhì)的種公牛后代母牛的數(shù)量，提高種群的數(shù)量，快速的提高種群的生產(chǎn)品質(zhì)，加快品種改良進(jìn)程，同時(shí)為企業(yè)帶來(lái)新的利潤(rùn)增長(zhǎng)點(diǎn)，更為性控胚胎生產(chǎn)的產(chǎn)業(yè)化奠定了基礎(chǔ)[13，14]。