GC-MS法測定鹽酸金霉素眼膏中的15種鄰苯二甲酸酯

陳希 段和祥 劉緒平

(江西省藥品檢驗檢測研究院，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，南昌 330029)

鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)(phthalate acid esters, PAEs)作為增塑劑被普遍應(yīng)用于食品包裝材料、塑料玩具和塑料醫(yī)療器械中[1-3]。對PAEs的安全性評估表明，其對動物明確的有致畸和致突變作用，且具有類環(huán)境激素功效，對機體顯示出較強的內(nèi)分泌干擾性[4-8]。衛(wèi)生部公告(2011年第16號)已明確將鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)等17種PAEs規(guī)定為違法添加的非食品物質(zhì)，禁止在食品中使用。但由于食品包裝材料中的PAEs在使用中會遷移到食品中，衛(wèi)辦監(jiān)督函(2011年第551號)又進一步規(guī)定食品包裝材料中的PAEs應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格執(zhí)行《食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB9685)中規(guī)定的種類、范圍和特定遷移量或殘留量的要求，且不得用于油脂類食品和嬰幼兒食品；同時規(guī)定食品、食品添加劑中的DEHP、DINP和DBP最大殘留量分別為1.5、9.0和0.3mg/kg[9-11]。

鹽酸金霉素眼膏中凡士林和液體石蠟占處方量的95%以上，上述輔料收載于中國藥典2015年版，但均未對PAEs進行控制[12-13]。凡士林和液體石蠟均為弱極性化合物，易富集PAEs，如采用了不恰當(dāng)?shù)陌b材料等，可能導(dǎo)致PAEs污染藥品。本文采用氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)對鹽酸金霉素眼膏中的PAEs進行檢測，以評價產(chǎn)品是否有被PAEs污染的風(fēng)險。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B-7000C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Aglient公司)，MS205DU電子天平(Mettler Toledo公司)，N-EVAP24氮吹儀(Organomation公司)，DL-6000B離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)，GENIUS 3渦旋振蕩器(IKA公司)。10mL具塞刻度試管，所用玻璃儀器清凈后，用超純水清洗3次，丙酮浸泡1h后再在200℃下烘烤2h，冷卻后備用。

1.2 材料和試劑

正己烷、乙腈為色譜純，鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(15種組分名稱詳見表1，來源：上海安譜試驗科技股份有限公司，批號：312542，各組分濃度均為1000μg/mL)?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲備溶液：移取鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL置于50mL量瓶中，用乙腈稀釋并定容至刻度，作為混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(10μg/mL)。樣品為210批次鹽酸金霉素眼膏(2018年國家藥品計劃抽驗樣品)。

2 方法與結(jié)果

表1 鄰苯二甲酸酯定量和定性選擇離子表Tab.1 Quantitative and qualitative selection of PAEs ion meter

2.1 儀器條件

色譜條件：DB-5MS毛細管柱(30m×0.25mm，0.25μm)，載氣：高純氦氣。進樣口溫度：260℃；進樣方式：直接進樣(不分流)；進樣體積：1μL；流速：1.0mL/min。升溫程序：初始柱溫60℃，保持1min；以20℃/min升溫至220℃，保持1min；再以5℃/min升溫至250℃，保持1min；再以20℃/min升溫至290℃，保持7.5min。

質(zhì)譜條件：離子源溫度：230℃；電離能量：70eV，GC/MC傳輸線溫度：280℃；溶劑延遲：7min；電離方式：電子轟擊源；監(jiān)測方式：選擇離子監(jiān)測，監(jiān)測離子詳見表1。

2.2 樣品提取

稱取混合均勻的眼膏1.0g，置于10mL具塞刻度試管中，加乙腈飽和的正己烷6mL，渦旋振蕩使基質(zhì)溶解，2000r/min離心5min，取上清液3mL至另一具塞刻度試管中，加正己烷飽和的乙腈3mL，振蕩提取1min，收集乙腈層。再用正己烷飽和的乙腈按上述步驟提取2次，合并乙腈層，渦旋混勻，氮吹盡干，再補加乙腈至1mL，渦旋混勻作為待測溶液(必要時離心)。

2.3 線性

移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，加乙腈稀釋成濃度為50、100、250、500、750、1000、2000和4000ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。

分別精密量取上述系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各lμL，分別注入GC-MS儀，記錄質(zhì)譜圖。以系列各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，各組分峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。各組分分離效果較好，且能在30min內(nèi)完成分析，各組分的總離子流圖詳見圖1。繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表明，各組分在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.997，詳見表2。

2.4 檢出濃度和定量濃度

圖1 鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)混合溶液總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of PAEs standard mixed solution

表2 鄰苯二甲酸酯線性方程及其相關(guān)系數(shù)Tab.2 The linear equations of PAEs and their correlation coef fi cients

分別移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，加乙腈稀釋成濃度為15和50ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸取上述兩種標(biāo)準(zhǔn)混合溶液各1μL，注入GC-MS儀，記錄質(zhì)譜圖。15和50ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各組分在定量離子圖譜中信噪比分別滿足1:3和1:10，可以分別作為15種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)檢測儀器的檢出限和定量限。按“2.2”項步驟制備樣品時，15種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)檢測檢出濃度可定為0.03mg/kg，定量濃度可定為0.1mg/kg。

2.5 精密度

精密量取濃度約為500ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1μL，連續(xù)進針6次，記錄質(zhì)譜圖，計算各組分峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果15種鄰苯二甲酸酯的RSD均小于5%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 準(zhǔn)確度和重復(fù)性

取混合均勻的空白試樣1.0g，置于10mL具塞刻度試管中，加乙腈飽和的正己烷6mL，渦旋振蕩使基質(zhì)溶解，2000r/min離心5min，取上清液3mL至另一具塞刻度試管中，加濃度為1000ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL后再加正己烷飽和的乙腈2mL，振蕩提取1min，收集乙腈層。再用正己烷飽和的乙腈按上述步驟提取2次，合并乙腈層，渦旋混勻，氮吹盡干，再補加乙腈至1mL，渦旋混勻作為待測溶液平行制備6份。15種鄰苯二甲酸酯類化合物的平均回收率為71%～117%，回收率的RSD為0.8%～5.2%，表明本方法準(zhǔn)確度和重復(fù)性結(jié)果良好，結(jié)果詳見表3。

2.7 樣品測定

對210批鹽酸金霉素眼膏進行檢測，僅27批次未檢出鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，其余183批次樣品均檢測出一定濃度的的DIBP、DBP和DEHP。樣品中DBP含量大于10mg/kg的共有9批次(最高為48mg/kg)，均為C企業(yè)樣品，涉及6個批號；樣品中DEHP含量大于50mg/kg的共有5批次(最高為80mg/kg)，均為F企業(yè)樣品，涉及2個批號。統(tǒng)計數(shù)據(jù)詳見表4～5。

3 討論

3.1 測定方法的優(yōu)化

本文采用GC-MS測定了鹽酸金霉素眼膏中DIBP、DBP、DEHP等15種PAEs，具有前處理簡單、分析時間快、檢出濃度低、回收率高、重復(fù)性好等特點。基于樣品中鹽酸金霉素不能溶于正己烷的特點，樣液制備時先用乙腈飽和正己烷溶解眼膏基質(zhì)，再通過離心沉淀去除鹽酸金霉素。由于正己烷在乙腈中具有一定的溶解性，如果樣液制備時采用乙腈萃取，可導(dǎo)致正己烷層體積逐漸減少，乙腈層最終提取體積超過9mL，經(jīng)氮吹液體更加渾濁，基質(zhì)干擾更強烈；本研究采用正己烷和乙腈相互飽和的溶液溶解基質(zhì)并萃取，能一定程度解決上述問題。

表3 鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)測定準(zhǔn)確度和重復(fù)性結(jié)果表Tab.3 Determination of accuracy and repeatability of PAEs

表4 鹽酸金霉素眼膏測定數(shù)據(jù)(1)Tab.4 Chlortetracycline hydrochloride eye ointment measurement data (1)

表5 鹽酸金霉素眼膏測定數(shù)據(jù)(2)Tab.5 Chlortetracycline hydrochloride eye ointment measurement data (2)

3.2 DBP、DEHP、DIBP安全性問題

經(jīng)調(diào)研，鹽酸金霉素眼膏的生產(chǎn)工藝中均未涉及到PAEs。此次210批鹽酸金霉素眼膏中，DEHP和DBP含量最高值分別為80和48mg/kg，DEHP和DBP檢出平均值為7.8和2.5mg/kg，遠高于上述成分在我國食品批準(zhǔn)中的限值和包裝材料所允許的遷移值。C企業(yè)個別批次的DBP和F企業(yè)個別批次的DEHP含量異常高，且這兩家企業(yè)DBP和DEHP檢出平均濃度也為7家企業(yè)中最大。此外，產(chǎn)品中DIBP的檢出率高達55%，檢出濃度平均為0.12mg/kg。鑒于GB 9685-2016已將DIBP從鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的使用范圍中刪除，提示其可能存在一定的安全風(fēng)險。上述結(jié)果提示，鹽酸金霉素眼膏生產(chǎn)企業(yè)尚未意識到產(chǎn)品已被PAEs污染及可能帶來的安全風(fēng)險。鑒于PAEs存在的致突變、致癌作用和生殖毒性等危害，企業(yè)有必要對上述現(xiàn)象進行自查，確定鹽酸金霉素眼膏中DIBP、DBP、DEHP的來源，進而控制產(chǎn)品被PAEs污染的風(fēng)險。