常曉萌 陳芳園 王俊華 王玉霞

社會(huì)不斷推進(jìn)發(fā)展的進(jìn)程中，使人們對(duì)于生活質(zhì)量的要求逐漸增加。尤其是在食品安全領(lǐng)域，為食品檢測(cè)技術(shù)提出了更加復(fù)雜的要求。由此，也使食品檢測(cè)方法成為了相關(guān)科研人員研究的重點(diǎn)方向。為了高效完成食品中的沙門氏菌檢測(cè)任務(wù)，應(yīng)對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行拓展研究，并對(duì)沙門氏菌快速檢測(cè)板的技術(shù)原理，進(jìn)行系統(tǒng)性的分析，以便為技術(shù)條件的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。本文以食品檢測(cè)為研究對(duì)象，對(duì)沙門氏菌的快速檢測(cè)板應(yīng)用方法進(jìn)行分析。在介紹其檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)上，通過(guò)材料備制、儀器準(zhǔn)備、菌株培養(yǎng)、標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法、3M沙門氏菌快速檢測(cè)板法的內(nèi)容討論，介紹具體的操作方法，為相關(guān)研究與實(shí)踐工作提供參閱材料。

沙門氏菌快速檢測(cè)板技術(shù)

沙門氏菌是典型的腸桿菌，帶有較強(qiáng)的致病性，可誘發(fā)人類的傷寒、腹瀉等病狀，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)l(fā)食物中毒。在病菌傳播的過(guò)程中，沙門氏菌主要將家禽、蛋類、肉類等日常生活中常見的食物作為媒介，完成傳播。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)每年產(chǎn)生的食物中毒事件，有70%都是由沙門氏菌引起的。因此，必須通過(guò)研究，找到快速甄別沙門氏菌的檢測(cè)辦法，提高食品檢測(cè)效率與質(zhì)量。

當(dāng)前的科研技術(shù)條件下，沙門氏菌的檢測(cè)可以通過(guò)沙門氏菌快速測(cè)試片的方法完成，這其中又以3M沙門氏菌快速測(cè)試最為典型。在試驗(yàn)原理上，將溫度與時(shí)間作為執(zhí)行檢驗(yàn)的單位，針對(duì)不同類型的食品，完成沙門氏菌檢驗(yàn)工作。這種檢測(cè)方法較為簡(jiǎn)便，并能夠高效率的完成檢驗(yàn)任務(wù)，精確判定食品中是否帶有沙門氏菌。

沙門氏菌快速檢測(cè)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用方法

材料、儀器準(zhǔn)備。沙門氏菌快速檢測(cè)的食品檢測(cè)應(yīng)用試驗(yàn)中，要準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料與基本儀器設(shè)備。在滅菌設(shè)備的準(zhǔn)備上，可以根據(jù)實(shí)際情況，選擇干熱或是濕熱設(shè)備。備至恒溫培養(yǎng)箱3個(gè)，溫度參數(shù)分別設(shè)定在 36℃、42℃、41.5℃，培養(yǎng)箱的允許溫度誤差保持在±1℃。移液管的規(guī)格型號(hào)，應(yīng)選用0.1mL或1mL，并保證精準(zhǔn)度參數(shù)為±5%，培養(yǎng)皿的直徑為90mm，天平的感量級(jí)別為0.01g。

備至材料的過(guò)程中，需準(zhǔn)備適量的BPW緩沖蛋白胨水、SC增菌液、TTB增菌液、BS亞硫酸鉍瓊脂平板以及A至F的多價(jià)血清。同時(shí)，從美國(guó)3M公司處購(gòu)得專業(yè)的測(cè)試片與確認(rèn)片，并獲得用于試驗(yàn)的3M沙門氏菌。準(zhǔn)備試驗(yàn)的過(guò)程中，還需培植3株標(biāo)準(zhǔn)株，并對(duì)成品菌株進(jìn)行貯藏，在使用前，將其制成104CFU/mL的肉湯。

標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)過(guò)程。在無(wú)菌化的操作條件下，獲取25mL的試驗(yàn)樣品，將其放置在220mL的緩沖蛋白胨水中培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程中，需將配制好的培養(yǎng)對(duì)象放置在36℃的恒溫培養(yǎng)箱中，放置8- 18小時(shí)。在完成培養(yǎng)后，將培養(yǎng)對(duì)象取出恒溫箱，輕輕的對(duì)經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的混合物樣品進(jìn)行搖晃，并提取其中的1mL。然后，將提取的1mL混合物轉(zhuǎn)放到10mL的TTB樣本中，再使用42℃的恒溫箱培養(yǎng)18- 24小時(shí)。當(dāng)完成培養(yǎng)時(shí)，再次按照之前的工序提取1mL二次混合物，轉(zhuǎn)放到10mL的SC樣本中，并將這經(jīng)過(guò)兩次提取與混合的溶液，再次放置在36℃的恒溫箱中，完成18- 24小時(shí)的培養(yǎng)。

完成這一階段的三次培養(yǎng)與混合后，應(yīng)分別從接種環(huán)中提取增菌液1環(huán)，并以劃線接種的方法，分別放置在BS瓊脂板與XLD瓊脂上，以此完成快速檢測(cè)板的制作。將兩個(gè)檢測(cè)板放入36℃的恒溫箱中進(jìn)行分別培養(yǎng)，維持18小時(shí)后，就基本可以觀察出檢測(cè)板中的菌落生成情況。而為了進(jìn)一步擴(kuò)大沙門氏菌的顯示效果，也可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)檢測(cè)板在恒溫箱中的培養(yǎng)時(shí)間，使其保持40- 48小時(shí)的培養(yǎng)狀態(tài)。這種快速檢測(cè)方法，是我國(guó)制定的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，可以作為執(zhí)行沙門氏菌快速測(cè)試板食品檢測(cè)的規(guī)范化方法，也能作為新型檢測(cè)方法的具體參照。

3M沙門氏菌的快速測(cè)試板法。3M沙門氏菌快速測(cè)試板方法下，也需在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作，將3M沙門氏菌與增菌補(bǔ)充物質(zhì)放置在無(wú)菌培養(yǎng)基中，然后，將待檢測(cè)食物按照一定比例稀釋，并放置在無(wú)菌的容器中。在進(jìn)行測(cè)試培養(yǎng)之前，應(yīng)對(duì)食物的帶菌量進(jìn)行預(yù)估，如果其帶菌量較低，可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間（最低18小時(shí)）。反之如果預(yù)估帶菌量較高，則可轉(zhuǎn)移到特定的R- V R10溶液中進(jìn)行相對(duì)時(shí)間較少（最低8小時(shí)）的培養(yǎng)。注意，此項(xiàng)培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)使用41.5℃的恒溫箱，且保證培養(yǎng)的時(shí)間不超出24小時(shí)。

在完成培養(yǎng)后，應(yīng)備至3M沙門氏菌測(cè)試片，使其平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，并使用移液器向測(cè)試片滴放2mL的無(wú)菌水，然后再放置上層膜，并在操作中避免出現(xiàn)氣泡。把3M壓板放在測(cè)試片的中心位置，并施加較輕的壓力，使無(wú)菌水充分的覆蓋在試片的表面。注意，不能在膜上發(fā)生壓板的滑動(dòng)，以免實(shí)驗(yàn)效果受到影響。完成處理后，需將制成的試片放置在溫度為20℃- 25℃的避光位置，保持1小時(shí)。完成水化的試片，應(yīng)在8小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行使用，以免影響試驗(yàn)效果。

當(dāng)完成試片的水化后，需進(jìn)行接種處理，對(duì)于菌量較低的試驗(yàn)樣品，可以采用10μL的滅菌接種環(huán)，蘸取相應(yīng)的增菌液。如果預(yù)估的菌量較高，則需使用R- V R10溶液，并蘸取滿10μL完成接種。在完成接種后，應(yīng)根據(jù)待檢測(cè)的食品情況進(jìn)行排列，且在清晰的劃線條件下，區(qū)分不同食品的品類，以便更加清晰的觀測(cè)到試驗(yàn)的結(jié)果信息。此時(shí)，應(yīng)使用41.5℃的恒溫箱，進(jìn)行24小時(shí)的培養(yǎng)。注意，單次的培養(yǎng)不應(yīng)使被檢測(cè)疊片數(shù)量超過(guò)20。

完成接種以及其后續(xù)培養(yǎng)處理后，應(yīng)根據(jù)試片的表現(xiàn)形式，對(duì)食品樣品的帶菌情況進(jìn)行初步判定。當(dāng)被測(cè)試對(duì)象出現(xiàn)黃色暈圈、并帶有紅色菌落，可將其定義為陽(yáng)性菌落，同時(shí)僅帶有紅色菌落的測(cè)試片，也可以定義為陽(yáng)性菌落。然后，將判定為陽(yáng)性菌落的測(cè)試片單獨(dú)進(jìn)行標(biāo)記，并執(zhí)行后續(xù)的確認(rèn)判斷。確認(rèn)判斷中，需掀起3M沙門氏菌上膜片，并使用確認(rèn)膜片進(jìn)行替換。在保證凝膠層與確認(rèn)膜片完全貼合，且沒(méi)有氣泡的條件下，完成測(cè)試片的閉合。閉合后，還需對(duì)膜片的貼合效果進(jìn)行再次確認(rèn)，并將其放置在41.5℃的恒溫箱中，維持4- 5小時(shí)。如果待確定的試片中，發(fā)生藍(lán)色沉淀或是黑色菌落，則可確定該膜片的測(cè)試食物中沙門氏菌為陽(yáng)性。

綜上所述，沙門氏菌快速測(cè)試板法，可以快速定位食品中所攜帶的沙門氏菌，完成食品檢測(cè)的客觀需要。在檢測(cè)方法上，又可明顯的區(qū)分為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法與3M沙門氏菌快速檢測(cè)法，在食品檢測(cè)活動(dòng)中，有較為突出的應(yīng)用價(jià)值。而對(duì)此項(xiàng)技術(shù)的研究分析，不僅可以鞏固技術(shù)應(yīng)用效果，也可加快食品檢測(cè)的技術(shù)發(fā)展，為保衛(wèi)社會(huì)食品安全創(chuàng)造科學(xué)條件。但日后有關(guān)研究人員仍需對(duì)這一方法展開深入的探究，通過(guò)不斷的嘗試與探索，進(jìn)一步完善該方法，提升其檢測(cè)效果。