王歲歲，張汆，戚良號，楊杰，袁懷波，*

（1.合肥工業(yè)大學食品與生物工程學院，安徽 合肥 230000；2.滁州學院生物與食品工程學院，安徽 滁州 239000；3.淮南湖鑫水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，安徽 淮南 232000）

芡實是睡蓮科芡屬一年生水生草本植物[1]。芡實種仁和種皮中經(jīng)分離得到的幾種單體化合物如黃酮[2]、腦苷脂[3]、生育酚聚合物[4]、環(huán)二肽[5]通常被認為具有抗氧化[6-7]、調(diào)節(jié)血脂、降低血糖等多種藥理活性[8-9]。

高血脂癥俗稱“高血脂”，又稱血脂異常[10]。目前臨床治療高血脂癥有他汀類、貝特類等藥物，因其具有較好的降總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）作用，成為目前臨床應用最好的降脂藥物[11]。但他汀類藥物本身具有副作用，尤其與貝特類藥物聯(lián)用時，作用更甚[12]。因此，開辟新的降脂途徑是當前醫(yī)藥研究人員迫切需要解決的熱點問題[13]，但至今尚無突破性進展。本研究以芡實殼及芡實種仁為基礎(chǔ)材料制備芡實超微粉，考察芡實超微粉對高脂小鼠的血脂調(diào)節(jié)作用。為芡實超微粉在高血脂癥患者飲食輔助治療應用中提供重要的參考價值，對控制高血脂癥的發(fā)病率及促進芡實資源的深度開發(fā)有著重要意義[14]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SPF 級小鼠、普通飼料：常州卡文斯實驗動物有限公司；芡實：淮南湖鑫水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司；高脂飼料：合肥工業(yè)大學食品與生物工程學院實驗室制備；生理鹽水、苦味酸、辛伐他汀片、冰醋酸等：上海生物工程有限公司；總膽固醇、總甘油三脂、高密度、低密度脂蛋白膽固醇、Bradford 法蛋白檢測、總超氧化物歧化酶、丙二醛、肝酯酶測定試劑盒：南京建成科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SL-150 型高速多功能粉碎機：浙江省永康市松青五金廠；羅氏血糖儀：羅氏生物股份有限公司；752 紫外可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司；SC-3614型低速離心機：安徽中科佳學儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 高脂飼料制備及高血脂癥小鼠模型的建立

高脂飼料：15%蔗糖，10%豬油，3%蛋黃，72%普通飼料。

25 ℃恒溫條件下，60 只 ICR 雄鼠（20±5）g，普通飼料適應性喂養(yǎng)1 周后將小鼠隨機分為6 組，每組10 只。隨機選取一組為正常組，即空白對照組，喂養(yǎng)普通飼料，余下5 組均給予高脂飼料喂養(yǎng)。

1.3.2 小鼠分組及芡實超微粉的灌胃

芡實經(jīng)粉碎機粉碎后再用200 目篩過濾，使其為超微粉形態(tài)。

造模成功后分組，第一組為正常組：普通飼料，每日灌胃等量生理鹽水；第二組為高脂模型對照組：高脂飼料，不進行灌胃；第三組為陽性對照組：高脂飼料，每日灌胃辛伐他丁溶液3.33 mg/（kg·d）；第四、五、六組分別為芡實超微粉低、中、高劑量組：高脂飼料，分別每日灌胃芡實超微粉溶液500、1 000、2 000 mg/（kg·d）。灌胃時間為6 周，飲水均為純凈水[15]。

1.3.3 小鼠體重及空腹血糖的測定

從適應性喂養(yǎng)開始，每隔一周對小鼠稱重并記錄。尾靜脈取血測定小鼠血糖，分3個階段收集，適應性喂養(yǎng)1 周后為初始血糖，灌胃3 周后為治療中期血糖，灌胃6 周后為治療后血糖。

1.3.4 小鼠血清和肝組織的采集

灌胃處理6 周后，用鑷子對眼球進行摘除，取血0.8 mL 左右，靜置 30 min，3 000 r/min 離心 15 min，吸取上清液，在-20 ℃中保存。將小鼠脫頸致死，取出小鼠肝臟，稱重并記錄數(shù)據(jù)。

1.3.5 小鼠血脂指標的測定

小鼠血清TC、TG、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）的測定：取小鼠血清樣本，在4 ℃條件下融化，按試劑盒操作步驟進行。

1.3.6 小鼠血清及肝組織樣本中相關(guān)酶類的測定

組織勻漿的制備：準確稱取肝組織按重量（g）∶體積（mL）=1∶9 的比例加入生理鹽水，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2 500 r/min～3 000 r/min離心10 min，取上清。

小鼠血清及肝組織中總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、肝酯酶含量的測定及小鼠肝組織中蛋白濃度的檢測：按試劑盒操作步驟，以血清和勻漿為樣本測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 芡實超微粉對小鼠體重的影響

芡實超微粉對小鼠體重的影響見表1。

表1 芡實超微粉對小鼠體重的影響（±s，n=10）Table 1 The effect of ultrafine powder on body weight of mice（±s，n=10）

表1 芡實超微粉對小鼠體重的影響（±s，n=10）Table 1 The effect of ultrafine powder on body weight of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；A 與正常組比較，差異極顯著（p＜0.01）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

體重/g灌胃前 灌胃后正常組 29.85±1.62 43.20±1.51b高脂模型組 29.37±2.46 48.37±1.76a陽性對照組 3.33 30.04±1.94 40.53±0.42ab低劑量組 500 28.32±1.17 39.64±2.79ab中劑量組 1 000 29.37±1.52 38.16±1.73ab高劑量組 2 000 29.61±1.93 36.34±1.41Ab組別 灌胃劑量/[mg/（kg·d）]

由表1可知，灌胃前各組小鼠體重無顯著性差異（p＞0.05），灌胃6 周后，高脂模型組小鼠體重顯著高于正常組（p＜0.05），陽性對照組和低、中、高劑量組小鼠體重均顯著低于高脂模型組（p＜0.05），且灌胃劑量越高，體重減輕效果越顯著，說明芡實超微粉有降低高脂小鼠體重的作用，并且呈現(xiàn)一定程度的劑量依賴關(guān)系。

2.2 芡實超微粉對小鼠肝臟指數(shù)的影響

芡實超微粉對小鼠肝臟指數(shù)的影響見表2，肝臟指數(shù)/%=肝臟質(zhì)量/小鼠體重×100。

表2 芡實超微粉對小鼠肝臟指數(shù)的影響（n=10）Table 2 Effect of superfine powder on liver index in mice（n=10）

由表2所示，高脂模型組小鼠肝臟指數(shù)極顯著高于空白組（p＜0.01），與高脂模型組相比，陽性對照組、中、高劑量灌胃組小鼠肝臟指數(shù)顯著降低，說明灌胃辛伐他丁起到了一定的保護高血脂癥小鼠肝組織正常脂肪代謝的作用，灌胃一定劑量的芡實超微粉也起到了延緩高血脂癥小鼠的肝指數(shù)增高的作用，并且灌胃芡實超微粉的劑量越高，肝指數(shù)降低越顯著，呈現(xiàn)了一定程度的劑量依賴關(guān)系。

2.3 芡實超微粉對小鼠血糖水平的影響

芡實超微粉對小鼠血糖的影響見表3。

表3 芡實超微粉對小鼠血糖的影響（n=10）Table 3 Effect of superfine powder on blood glucose in mice（n=10）

由表3可知，各組小鼠灌胃前的初始血糖水平無明顯差異（p＞0.05）；灌胃3 周后，高脂模型組小鼠血糖水平極顯著高于空白組（p＜0.01），并且陽性對照組、低、中、高劑量灌胃組小鼠血糖水平也極顯著低于高脂模型組（p＜0.01）；灌胃6 周后，高脂模型組小鼠血糖水平顯著上升且顯著高于其余各組血糖水平，陽性對照組、低、中、高劑量組小鼠血糖水平極顯著低于高脂模型組（p＜0.01）。由此可知，連續(xù)給予小鼠飼喂高脂飼料會顯著提高小鼠體內(nèi)血糖水平，給高血脂癥小鼠連續(xù)灌胃芡實超微粉會顯著降低其體內(nèi)血糖水平，且灌胃劑量越大，血糖降低效果越顯著，呈現(xiàn)了一定的劑量依賴性。

2.4 芡實超微粉對小鼠血脂水平的影響

芡實超微粉對小鼠血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影響見表4。

表4 芡實超微粉對小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of superfine powder on levels of serum TC，TG，HDL-C and LDL-C in mice（±s，n=10）

表4 芡實超微粉對小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of superfine powder on levels of serum TC，TG，HDL-C and LDL-C in mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

組別 TC 含量 TG 含量 HDL-C 含量 LDL-C 含量正常組 4.42±0.35b 1.92±0.84b 5.43±0.32 1.12±0.35b高脂模型組 4.85±0.24a 2.75±0.53a 3.98±0.47a 1.98±0.69a陽性對照組 4.07±0.31b 1.69±0.41b 5.21±0.17b 1.77±0.28b低劑量組 4.33±0.22 2.20±0.79b 4.87±0.28b 1.83±0.71中劑量組 3.75±0.73b 1.87±0.23b 5.18±0.91b 1.76±0.41b高劑量組 3.46±0.57b 1.73±0.45b 5.82±0.34b 1.50±0.18b

由表4可知，正常組小鼠TC、TG 都處于正常水平；模型組小鼠TC、TG 水平顯著高于正常組（p＜0.05），陽性對照組、低、中、高劑量組小鼠 TC、TG 水平顯著低于模型組（p＜0.05）。模型組小鼠HDL-C 含量顯著低于正常組（p＜0.05），陽性對照組、低、中、高劑量組小鼠HDL-C 含量顯著高于模型組。與空白組相比，模型組小鼠體內(nèi) LDL-C 顯著提高（p＜0.05），而中、高劑量組小鼠LDL-C 含量顯著低于模型組。以上表明，連續(xù)給予小鼠高脂飼料會顯著提高小鼠體內(nèi)血脂水平，辛伐他汀藥物能顯著改善小鼠高血脂癥狀，給予高血脂癥小鼠灌胃一定量的芡實超微粉會顯著降低其體內(nèi)血脂水平，且灌胃量越大，效果越明顯，呈現(xiàn)出一定的劑量正相關(guān)性。

2.5 芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影響

芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中T-SOD 活力的影響見表5。

表5 芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中T-SOD活力的影響（±s，n=10）Table 5 Effect of superfine powder on T-SOD activity in serum and liver of mice（±s，n=10）

表5 芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中T-SOD活力的影響（±s，n=10）Table 5 Effect of superfine powder on T-SOD activity in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

組別血清/（U/mL）肝臟/（U/mgprot）正常組 238.89±6.34b 101.44±5.27b高脂模型組 219.45±4.17a 83.93±2.62a陽性對照組 232.24±5.87b 98.71±4.64b低劑量組 218.23±8.21 96.18±5.82中劑量組 235.47±4.75b 105.88±4.39b高劑量組 244.72±6.18b 107.91±8.14b

由表5可知，模型組小鼠T-SOD 活力顯著低于正常組（p＜0.05），中、高劑量組小鼠 T-SOD 活力顯著高于模型組（p＜0.05），說明芡實超微粉對高血脂癥引起的T-SOD 活力下降具有明顯緩解作用。且灌胃芡實超微粉劑量越高，小鼠T-SOD 活力提升越顯著，以高劑量組最優(yōu)。

2.6 芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中丙二醛（MDA）含量的影響

芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中MDA 含量的影響見表6。

表6 芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中MDA含量的影響（±s，n=10）Table 6 Effect of superfine powder on MDA content in serum and liver of mice（±s，n=10）

表6 芡實超微粉對小鼠血清及肝臟中MDA含量的影響（±s，n=10）Table 6 Effect of superfine powder on MDA content in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）。

組別血清/（mmol/mL）肝組織/（mmol/mgprot）正常組 44.15±1.36b 1.17±0.21b高脂模型組 57.73±2.41a 2.83±0.19a陽性對照組 50.18±1.84b 1.49±0.34b低劑量組 55.09±1.72 2.64±0.16中劑量組 53.47±2.08b 2.05±0.12b高劑量組 52.83±1.49b 1.68±0.42b

由表6可知，高脂模型組小鼠MDA 含量顯著高于正常組（p＜0.05），中、高劑量組小鼠 MDA 含量顯著低于高脂模型組（p＜0.05），說明芡實超微粉對于高血脂癥引起MDA 含量升高具有明顯的緩解作用。且灌胃芡實超微粉劑量越高，小鼠MDA 含量降低效果，以高劑量組最優(yōu)。

2.7 芡實超微粉對小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響

芡實超微粉對小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響見表7。

表7 芡實超微粉對小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響（±s，n=10）Table 7 Effect of superfine powder on hepatic esterase（HL）concentration in serum and liver of mice（±s，n=10）

表7 芡實超微粉對小鼠血清及肝組織中肝酯酶（HL）濃度的影響（±s，n=10）Table 7 Effect of superfine powder on hepatic esterase（HL）concentration in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 與正常組比較，差異顯著（p＜0.05）；b 與高脂模型比較，差異顯著（p＜0.05）；B 與高脂模型組相比，差異極顯著（p＜0.01）。

組別血清/（mmol/mL）肝組織/（mmol/mgprot）正常組 218.41±4.32b 232.01±5.36b高脂模型組 174.54±5.21a 201.32±4.29a陽性對照組 214.54±2.84b 223.34±3.48b低劑量組 195.67±4.61 211.03±3.31中劑量組 202.48±5.37b 230.95±5.16b高劑量組 218.39±4.69B 231.86±5.11B

由表7可知，模型組肝酯酶濃度顯著低于正常組（p＜0.05），陽性對照組、中劑量組小鼠肝酯酶含量顯著高于模型組（p＜0.05），高劑量組小鼠肝酯酶含量極顯著高于模型組（p＜0.01）。說明一定劑量的芡實超微粉能改善高血脂癥小鼠肝酯酶衰減的癥狀，且劑量越高，效果越顯著。

3 結(jié)論

經(jīng)過6 周的芡實超微粉灌胃處理后，高血脂癥小鼠的血清總膽固醇（T-CHO）、總甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量顯著降低，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量顯著上升，說明芡實超微粉對改善高血脂小鼠的高血脂癥方面起到了很大作用。

經(jīng)過6 周灌胃后，高血脂癥小鼠的血清及肝組織中總超氧化物歧化酶（T-SOD）、肝酯酶（HL）含量顯著上升，丙二醛（MDA）含量顯著降低，說明芡實超微粉能夠降低自由基數(shù)量，具有一定的抗氧化能力，且隨著灌胃芡實超微粉劑量的升高效果越顯著。

經(jīng)過六周的芡實超微粉灌胃后，高血脂癥小鼠的體重、肝臟指數(shù)及空腹血糖水平都有所降低，并且與芡實超微粉灌胃劑量成正比。小鼠肝組織的病變情況也隨灌胃芡實超微粉劑量的升高而減輕，說明芡實超微粉可以有效改善高血脂小鼠的肝損傷。

綜上所述，芡實超微粉能夠改善高血脂癥小鼠的癥狀，能夠通過不同的途徑協(xié)同作用，對高血脂癥小鼠降低血糖、緩解肝損傷等都有著積極作用，具有顯著的降血脂療效，并呈現(xiàn)一定的灌胃劑量依賴性。

試驗初步研究了芡實超微粉對小鼠降血脂的功效，發(fā)現(xiàn)芡實作為一種藥食兩用的植物具有良好的降血脂功能，目前國內(nèi)外對芡實超微粉的研究還不夠深入，此領(lǐng)域具有很大的研究前景。在未來的研究中，我們將進一步考察芡實超微粉的體內(nèi)降血脂機制及預防脂肪炎癥的相關(guān)機制。