氮源對(duì)蚜蟲(chóng)擬酵母生物合成新型乳化劑
——甘露糖赤蘚糖醇脂的影響

牛永武 吳嘉南 顧 頔 陳啟和

（浙江大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)系 杭州310058）

甘露糖赤蘚糖醇脂（Mannosylerythritol lipids，MELs）是一種糖脂類生物表面活性劑，主要由霉菌和酵母發(fā)酵獲得。MELs 的結(jié)構(gòu)主要以4-O-β-D-吡喃甘露糖-內(nèi)消旋-赤蘚糖醇為親水基部分，以脂肪鏈或糖基上的乙?；鶠槭杷糠郑鶕?jù)乙?；臄?shù)量和位置，分為A、B、C、D 4 個(gè)構(gòu)型[1-2]，見(jiàn)圖1。在上個(gè)世紀(jì)50年代被發(fā)現(xiàn)[3]，自90年代以來(lái)受到越來(lái)越多的研究者關(guān)注。目前，MELs 相關(guān)報(bào)道集中于表面活性有良好的乳化性，生物降解性，較低的臨界膠束濃度等[4]，還具有特殊的生理學(xué)活性，如抑制微生物生長(zhǎng)[5-6]，誘導(dǎo)細(xì)胞變異[7-9]，提高基因轉(zhuǎn)染效率[10-11]，與糖蛋白有較強(qiáng)的配位能力[12]等，在石油化工、化妝品、醫(yī)藥[13]等方面具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。

在國(guó)內(nèi)，相對(duì)于鼠李糖脂、槐糖脂而言，圍繞MELs 的研究和關(guān)注較少。而國(guó)內(nèi)外用于發(fā)酵合成MELs 的主要有南極假絲酵母 （Candida antarctica）、玉米黑粉菌（Ustilago maydis）、南極擬 酵母（Pseudozyma rantarctica）、蚜蟲(chóng)擬酵母（Pseudozyma aphidis）等菌株。大量研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中氮源是否充足對(duì)微生物合成MELs 有顯著影響，在氮源限制條件下，玉米黑粉菌、蚜蟲(chóng)擬酵母和湖北擬酵母（Pseudozyma hubeiensis）能夠 合成MELs 和纖維二糖脂（CLs）兩種糖脂[14]。目前有關(guān)氮源種類的研究較少。Rau 等[15]對(duì)發(fā)酵液中的氮源、碳源和碳氮比進(jìn)行初步研究，然而未涉及有機(jī)氮源。本文主要對(duì)比不同種類氮源對(duì)MELs 產(chǎn)量的影響，對(duì)選出的較優(yōu)氮源進(jìn)行復(fù)配，獲得合適的復(fù)配比例和添加量，探究氮源對(duì)產(chǎn)物的表面活性的影響。

1 試驗(yàn)方法

1.1 菌株、試劑及材料

蚜蟲(chóng)擬酵母，購(gòu)于德國(guó)菌種保藏中心。

乙酸乙酯、甲醇、氯仿，均為分析純；大豆油，金龍魚(yú)精煉一級(jí)，上海嘉里食品工業(yè)有限公司；考馬斯亮藍(lán)染液、牛血清蛋白等。

圖1 MELs 的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of MELs

LHR-250 生化培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；HYG-II 回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速搖床，上海新蕊自動(dòng)化設(shè)備有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，RV8-HB10，IKA；SP-756 紫外分光光度計(jì)，上海光譜；Thermo酶標(biāo)儀，美國(guó)；全自動(dòng)表面張力儀，QBZY-2，上海方瑞儀器有限公司。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

活化培養(yǎng)基（g/L）：酵母提取物3.0，麥芽汁提取物3.0，葡萄糖10.0，蛋白胨5.0。

液體種子培養(yǎng)基 （g/L）：NaNO33.0，MgSO4·7H2O 0.30，KH2PO40.30，酵母提取粉1.0，葡萄糖40.0。

發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：大豆油80.0 mL/L，MgSO4·7H2O 0.30，KH2PO40.30，氮源種類和添加量根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行，大豆油單獨(dú)滅菌，無(wú)菌環(huán)境中添加。

以上3 種培養(yǎng)基pH 值均未經(jīng)調(diào)節(jié)，配制后均按50 mL/瓶（250 mL 錐形瓶）分裝，115 ℃滅菌20 min。

將保藏的菌種轉(zhuǎn)接于活化培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min 條件下培養(yǎng)1.5 d，然后將其轉(zhuǎn)接至種子培養(yǎng)基中，相同條件下培養(yǎng)2 d。培養(yǎng)好的種子液離心，獲得菌體，并用0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液洗滌2～3 次。按菌體濕重計(jì)，用生理鹽水溶解為0.12 g/mL 的接種液，按照2%（V/V）的接種量進(jìn)行接種，于28 ℃、180 r/min 條件下培養(yǎng)8 d。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 不同氮源對(duì)蚜蟲(chóng)擬酵母合成MELs 的影響選取NaNO3、酵母提取粉（Yeast Extract，YE）、（NH4）2SO4、NH4NO34 種氮源，以4.0 g/L 的量在組1、組2、組3、組4 中分別加入NaNO3、酵母提取粉、（NH4）2SO4和NH4NO3，每組設(shè)計(jì)3 個(gè)平行。發(fā)酵結(jié)束后，觀察發(fā)酵現(xiàn)象，測(cè)定MELs 產(chǎn)量、生物量、pH 等指標(biāo)，選取較優(yōu)氮源進(jìn)行復(fù)配發(fā)酵。

1.3.2 優(yōu)質(zhì)氮源復(fù)配對(duì)合成MELs 的影響 根據(jù)1.3.1 節(jié)中的結(jié)果，選取發(fā)酵效果好的2 種氮源進(jìn)行復(fù)配，本實(shí)驗(yàn)室已有研究表明蚜蟲(chóng)擬酵母發(fā)酵第4～7 天時(shí)大量合成MELs，故選取發(fā)酵第3，4，5、5.5，6、6.5，7，8 天為取樣時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組取3 個(gè)平行樣品，測(cè)定發(fā)酵液中生物量、產(chǎn)物產(chǎn)量、pH、發(fā)酵液還原糖濃度和胞外蛋白濃度，同時(shí)觀察發(fā)酵過(guò)程中發(fā)酵液狀態(tài)的變化。

1.4 pH、MELs 產(chǎn)量及生物量的測(cè)定

發(fā)酵結(jié)束后，測(cè)定發(fā)酵液的pH。隨后加入等體積的乙酸乙酯（約50 mL），充分振蕩萃取，裝入50 mL 離心管，3 000 r/min 離心5 min，乙酸乙酯層移至平底燒瓶中進(jìn)行旋蒸（45～60 ℃，3 000 Pa），獲得含有部分油脂的粗產(chǎn)物，將其溶解至15.00 mL甲醇中，振蕩混勻，3 000 r/min 離心5 min，取出甲醇層旋蒸獲得純化后的MELs 粗產(chǎn)物，稱量并計(jì)算產(chǎn)物產(chǎn)量。離心后的菌體取出，用去離子水洗滌2～3 遍，60 ℃烘干至恒重，稱量并計(jì)算生物量。

1.5 發(fā)酵液中蛋白濃度的測(cè)定

采用Bradford 蛋白質(zhì)定量試劑盒法[16]。取考馬斯亮藍(lán)染液平衡至室溫混勻，預(yù)熱分光光度計(jì)；將0，1，2，3，4，5，6 μL 牛血清蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00 mg/mL）分別加入酶標(biāo)板，加PBS（pH：7.4～7.6）補(bǔ)足至10 μL；加Bradford 考馬斯亮藍(lán)染液190 μL，混勻，室溫放置5～10 min，以PBS（pH：7.4～7.6）做為空白對(duì)照，在595 nm 下，測(cè)定吸光值；以蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（g/L）為橫坐標(biāo)x，吸光度為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，函數(shù)關(guān)系為：y=1.1011x（R2=0.9934）。樣品測(cè)定中，取10 μL 發(fā)酵液上清液和190 μL 考馬斯亮藍(lán)染液混勻，室溫放置5～10 min，用酶標(biāo)儀測(cè)定595 nm 下的吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出發(fā)酵液中蛋白含量。

1.6 發(fā)酵液中還原糖濃度的測(cè)定

采用DNS 法測(cè)定還原糖濃度。配制質(zhì)量濃度為1.000 g/L 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液；用移液槍分別準(zhǔn)確吸取0.08，0.16，0.32，0.64 mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液置于6 支10.00 mL 比色管中，并補(bǔ)水至0.80 mL，加0.60 mL DNS 溶液，搖勻；沸水浴5 min 后，取出，冷卻至室溫，用去離子水稀釋至10 mL，取200 μL 于96 孔板，用酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)520 nm 處的吸光度，以葡萄糖含量（mg）為橫坐標(biāo)x，吸光度為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，函數(shù)關(guān)系為：y=0.8558x（R2=0.9932）。

取發(fā)酵液上清0.08 mL 樣品，測(cè)定方法同上，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算0.08 mL 發(fā)酵液中還原糖含量x，發(fā)酵液中還原糖濃度C=x/0.08。

1.7 測(cè)定臨界膠束濃度 （Critical micelle concentration，CMC）

臨界膠束濃度是衡量表面活性劑的一個(gè)重要定量指標(biāo)，對(duì)于實(shí)際應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。取甲醇-環(huán)己烷分離純化后的樣品0.10 g，溶于100.00 mL去離子水中，配制成質(zhì)量濃度1.00 g/L 的原液；用去離子水稀釋50，60，70，80，90，100，120，150 倍，

獲得不同濃度的MELs 溶液（見(jiàn)表1）。

表1 MELs 系列梯度溶液配制Table 1 The preparation of a series of concentrations of MELs solution

在25 ℃條件下，采用鉑金板法[17]測(cè)定各溶液的表面張力，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次。然后將表面張力對(duì)溶液濃度做曲線，拐點(diǎn)對(duì)應(yīng)的濃度即為樣品的臨界膠束濃度。

2 結(jié)果與分析

氮源是微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)要素之一，不同氮源對(duì)于微生物的生長(zhǎng)代謝具有明顯影響。氮源主要分為有機(jī)氮源和無(wú)機(jī)氮源，有機(jī)氮源中選取酵母提取粉，無(wú)機(jī)氮源主要存在形式為NO3-和NH4+兩種形式，試驗(yàn)中選擇了含有硝酸根離子的NaNO3、含有銨根離子的（NH4）2SO4以 及NH4NO3做為研究的氮源，其中NaNO3屬于生理性堿性物質(zhì)，（NH4）2SO4屬于生理性酸性物質(zhì)。

2.1 不同氮源對(duì)蚜蟲(chóng)擬酵母代謝合成MELs 的影響

在其他成分相同的條件下，組1、組2、組3、組4 分別加入等質(zhì)量的不同氮源物質(zhì)，發(fā)酵8 d后，觀察發(fā)酵現(xiàn)象，見(jiàn)圖2，測(cè)定pH、MELs 產(chǎn)量和生物量，見(jiàn)表2。從圖2可以看出，組1 發(fā)酵液顯暗黃色，表面有油花；組2 菌體生長(zhǎng)較多，發(fā)酵液略顯土黃色，表面漂浮不均勻淺綠色油滴狀物質(zhì)；組3 菌體生長(zhǎng)少，發(fā)酵液顏色呈白色，大量大豆油漂浮在表面；組4 發(fā)酵液呈現(xiàn)類似渾濁石灰水的顏色，菌體生長(zhǎng)少，成片的大豆油漂浮在液面上層。表2中的結(jié)果顯示，4 種所選氮源中，添加NaNO3做為氮源，合成MELs 產(chǎn)量最高；而添加酵母提取粉時(shí)，生物量最大；（NH4）2SO4和NH4NO3為唯一氮源時(shí)，pH 大幅度下降，菌體生長(zhǎng)受到嚴(yán)重影響，生物量和MELs 產(chǎn)量均嚴(yán)重下降，分析認(rèn)為NH4+被利用后，發(fā)酵液中生成大量的H+，使培養(yǎng)液pH 大大降低，嚴(yán)重影響了蚜蟲(chóng)擬酵母生長(zhǎng)和發(fā)酵合成MELs，當(dāng)NO3-和NH4+同時(shí)存在時(shí)，蚜蟲(chóng)擬酵母生長(zhǎng)優(yōu)先利用NH4+，導(dǎo)致培養(yǎng)液pH 下降，說(shuō)明生理性酸性物質(zhì)不適合做為蚜蟲(chóng)擬酵母的氮源。因此，選取酵母提取物和NaNO3進(jìn)一步復(fù)配，得到合適的比例以提高M(jìn)ELs 的產(chǎn)量。

圖2 添加不同氮源發(fā)酵8 d 的發(fā)酵液Fig.2 The 8th day fermentation solution with different nitrogen sources

表2 添加不同氮源發(fā)酵8 d 后的pH 值、生物量、產(chǎn)物產(chǎn)量Table 2 pH，biomass and the yield of MELs with different nitrogen sources after fermented 8 d

2.2 兩種氮源不同復(fù)配對(duì)蚜蟲(chóng)擬酵母合成MELs過(guò)程的影響

為進(jìn)一步確定NaNO3和酵母提取粉對(duì)發(fā)酵合成MELs 的影響，將其進(jìn)行了復(fù)配，各試驗(yàn)組保持氮源物質(zhì)的總添加量不變，試驗(yàn)組編號(hào)為0，1，2，3，4，分別加入4.0 g/L YE、1.0 g/L NaNO3+3.0 g/L YE、2.0 g/L NaNO3+2.0 g/L YE、3.0 g/L NaNO3+1.0 g/L YE、4.0 g/L NaNO3。在各取樣時(shí)間點(diǎn)測(cè)定生物量、產(chǎn)物產(chǎn)量、pH、發(fā)酵液殘余還原糖和胞外蛋白濃度，結(jié)果見(jiàn)圖3～圖7。

2.2.1 發(fā)酵過(guò)程中生物量的變化 生物量多少能夠反映菌體生長(zhǎng)情況。圖3顯示測(cè)定結(jié)果表明，發(fā)酵5 d 后，組2 首先獲得最高的生物量，6 d 后，組3 獲得最高生物量。而在僅添加硝酸鈉的組4 中，發(fā)酵過(guò)程中生物量偏低。而添加酵母提取粉較多的組0 和組1 中，生物量逐漸上升，7 d 后趨向于穩(wěn)定，發(fā)酵8 d 后，組0 和組1 生物量明顯高于組2 和組3，是組4 的近2 倍，說(shuō)明增加酵母提取粉的添加量有利于蚜蟲(chóng)擬酵母的生長(zhǎng)。各試驗(yàn)組在發(fā)酵5～7 d 之間，出現(xiàn)不同程度的生物量下降現(xiàn)象，分析認(rèn)為與蚜蟲(chóng)擬酵母合成MELs 的過(guò)程有關(guān)，在發(fā)酵0～5 d 時(shí)，菌體大量生長(zhǎng)，且運(yùn)輸大豆油至胞內(nèi)進(jìn)行代謝，同時(shí)在胞內(nèi)完成MELs 的合成，進(jìn)而在后期分泌至胞外，故此生物量出現(xiàn)下降。

圖3 不同組生物量隨發(fā)酵時(shí)間的變化Fig.3 The changes of biomass with culture time in different groups

2.2.2 發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)物產(chǎn)量的變化 產(chǎn)物水平是衡量氮源是否合適的最主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果見(jiàn)圖4，產(chǎn)物產(chǎn)量從第3 天逐漸上升，至7 天時(shí)，產(chǎn)物產(chǎn)量基本達(dá)到最大。發(fā)酵8 d 后，MELs 產(chǎn)量為組2＞組3＞組0＞組4＞組1，組2 與組1 相比產(chǎn)量提高了22.7%。只添加硝酸鈉做為氮源時(shí)，生物量明顯偏低，而發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)物產(chǎn)量也明顯偏低，后期MELs 產(chǎn)量與只添加酵母提取粉的組0 和添加少量NaNO3的組1 接近，說(shuō)明將硝酸鈉和酵母粉混合添加更有利于MELs 合成。Masaaki 等[18]在研究湖北擬酵母利用橄欖油合成MELs 時(shí)，發(fā)現(xiàn)添加一定量的酵母提取物可以促進(jìn)生物量和產(chǎn)物產(chǎn)量的提高，與本研究有相似結(jié)果，分析推測(cè)是由于酵母提取物中的維生素、 氨基酸等物質(zhì)為促進(jìn)因子加強(qiáng)了菌株生長(zhǎng)和MELs 合成。

圖4 不同組產(chǎn)物產(chǎn)量隨發(fā)酵時(shí)間的變化Fig.4 The changes of MELs yield with culture time in different groups

2.2.3 發(fā)酵過(guò)程中pH 變化 圖5結(jié)果表明，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵液的pH 基本在5.30 和6.50之間，處于一個(gè)偏酸性的環(huán)境，原因可能有兩個(gè)，一是磷酸二氫鉀的緩沖作用，二是大豆油分解出小分子的脂肪酸與硝酸根利用后產(chǎn)生的OH-相互作用。在研究pH 相關(guān)的其他試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)（數(shù)據(jù)未列出），pH 處于該范圍內(nèi)，對(duì)菌體生長(zhǎng)和MELs 合成影響無(wú)顯著性差異，當(dāng)pH 低于4.50 或者高于8.00 時(shí)，會(huì)對(duì)菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成產(chǎn)生不利的影響。所以，在本研究中，硝酸鈉和酵母提取粉的比例變化對(duì)生物量和MELs 產(chǎn)量的影響并非源于對(duì)pH 的影響。

2.2.4 發(fā)酵過(guò)程中還原糖變化 現(xiàn)階段，關(guān)于蚜蟲(chóng)擬酵母利用大豆油為唯一碳源發(fā)酵合成MELs的代謝途徑尚未完全清楚。Hewald 等[19]在玉米黑粉菌中發(fā)現(xiàn)了合成MELs 的相關(guān)基因簇，檢測(cè)MELs 產(chǎn)物中脂肪酸鏈長(zhǎng)度呈現(xiàn)Cn-2 的規(guī)律，推測(cè)大豆油通過(guò)縮鏈反應(yīng)（β-氧化途徑）來(lái)獲得生長(zhǎng)和代謝能量。Günther 等[20]測(cè)定了蚜蟲(chóng)擬酵母的基因組和不同碳源水平的轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)了類似于玉米黑粉菌中合成MELs 的基因簇。為了探究MELs 合成過(guò)程中是否有糖類分泌到發(fā)酵液，利用DNS 法測(cè)定發(fā)酵液中還原糖含量，結(jié)果見(jiàn)圖6。在發(fā)酵第5 天之前，在只添加硝酸鈉做為氮源的組4 中，發(fā)酵液中未測(cè)定出還原糖的存在，說(shuō)明MELs 中的甘露糖基以及細(xì)胞生長(zhǎng)所需的糖類是直接在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生并在細(xì)胞內(nèi)被利用。而在添加酵母提取粉的試驗(yàn)組中，3～5 d 含有較大量還原糖，且隨著酵母提取粉的添加量增加，發(fā)酵液中的還原糖也不斷增加，但測(cè)定平行樣品之間波動(dòng)較大，分析認(rèn)為與酵母提取粉中復(fù)雜的成分相關(guān)。在發(fā)酵5 d 之后，組4 中還原糖含量增加，而添加酵母提取粉中的試驗(yàn)組還原糖含量下降，且趨于穩(wěn)定，推測(cè)此時(shí)微生物生長(zhǎng)已將酵母提取粉中的復(fù)雜成分利用，微生物生長(zhǎng)達(dá)到穩(wěn)定時(shí)期，大量合成所需的酶、 糖類并開(kāi)始分泌次級(jí)代謝產(chǎn)物MELs，而MELs 可以改變細(xì)胞膜的通透性[11]，釋放MELs的同時(shí)將胞內(nèi)未及時(shí)利用的部分糖類釋放至發(fā)酵液中。

圖5 不同組pH 隨發(fā)酵時(shí)間的變化Fig.5 The changes of pH with culture time in different groups

2.2.5 發(fā)酵過(guò)程中胞外蛋白濃度變化 大多數(shù)細(xì)胞代謝活動(dòng)都需要蛋白酶的參與，為了進(jìn)一步確定蚜蟲(chóng)擬酵母合成MELs 的發(fā)酵液中的代謝作用，測(cè)定發(fā)酵液中的蛋白濃度，結(jié)果見(jiàn)圖7。可以看出，所有試驗(yàn)組胞外蛋白質(zhì)量濃度在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程均在0.30～0.50 g/L 范圍內(nèi)，且無(wú)顯著上升趨勢(shì)。說(shuō)明蚜蟲(chóng)擬酵母在合成MELs 過(guò)程中，主要將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收胞內(nèi)，在胞內(nèi)合成大量酶，催化多種反應(yīng)，而很少分泌蛋白酶至胞外進(jìn)行催化反應(yīng)，而目前所推測(cè)的MELs 合成途徑[4]，包括β-氧化途徑[21]、de novo 途徑和整合參入途徑均在細(xì)胞內(nèi)完成，與本試驗(yàn)中測(cè)定胞外蛋白濃度較低相符。

圖6 不同組還原糖質(zhì)量濃度隨發(fā)酵時(shí)間的變化Fig.6 The changes of reducing sugar concentration with culture time in different groups

2.3 各復(fù)配組獲得MELs 臨界膠束濃度的分析

MELs 由不同構(gòu)型組成，為了探究不同氮源復(fù)配對(duì)蚜蟲(chóng)擬酵母合成MELs 性質(zhì)的影響。取各組分離純化后的MELs 產(chǎn)物測(cè)定臨界膠束濃度，見(jiàn)圖8。結(jié)果顯示，當(dāng)只添加硝酸鈉做為氮源（組4）時(shí)，臨界膠束質(zhì)量濃度為14.29 mg/L，此時(shí)水溶液的表面張力為（30.90±0.21）mN/m，而組0，1，2，3中MELs 產(chǎn)物的臨界膠束質(zhì)量濃度均為12.50 mg/L，水溶液表面張力分別降低至（30.86±0.43），（28.52±0.30），（31.45±0.66），（29.68± 0.26）mN/m，與報(bào)道中[15]采用單一MEL-A 構(gòu)型在臨界膠束濃度得到的表面張力值相比，非常接近。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加酵母提取粉對(duì)于合成MELs 的構(gòu)型組成比例有一定的影響，進(jìn)而影響MELs 的表面活性。

圖7 不同組胞外蛋白濃度隨發(fā)酵時(shí)間的變化Fig.7 The changes of extracellular protein concentration with culture time in different groups

圖8 不同組MELs 臨界膠束濃度的測(cè)定Fig.8 Determination of the critical micelle concentration of MELs from different groups

3 結(jié)論

本文通過(guò)比較硝酸鈉、酵母提取粉、硫酸銨、硝酸銨4 種氮源對(duì)蚜蟲(chóng)擬酵母利用大豆油發(fā)酵合成MELs 的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)硝酸鈉有利于MELs 的合成，而酵母提取物更有利于微生物的生長(zhǎng)。選取硝酸鈉和酵母提取粉進(jìn)行復(fù)配，綜合生物量、產(chǎn)物產(chǎn)量、pH、發(fā)酵液還原糖濃度和胞外蛋白濃度等指標(biāo)分析表明：添加2.0 g/L 硝酸鈉和2.0 g/L 酵母提取粉時(shí)，最有利于蚜蟲(chóng)擬酵母發(fā)酵合成MELs，同時(shí)間接證明MELs 的合成主要在細(xì)胞內(nèi)完成，隨后分泌至胞外。對(duì)氮源復(fù)配不同組獲得的MELs產(chǎn)物測(cè)定臨界膠束濃度，發(fā)現(xiàn)添加酵母提取粉對(duì)于MELs 產(chǎn)物的表面活性具有一定影響，而酵母提取粉的添加量對(duì)MELs 產(chǎn)物的表面活性無(wú)顯著影響。