?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠酒精性肝損傷的影響研究

文/孫 宇 張 娟 卿德剛＊ 倪 慧 陳鋼糧 劉姍姍 徐建國(guó)

（1 新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所；2 新疆旺源駝奶實(shí)業(yè)有限公司）

駝乳是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的乳品，含有多種免疫調(diào)節(jié)因子和抑菌抗炎成分，如免疫球蛋白、乳鐵蛋白、溶菌酶、維生素C等，具有調(diào)節(jié)免疫、抑菌、抗炎、抗病毒等作用，被稱為“沙漠白金”，具有較高的食療作用和醫(yī)用價(jià)值。世界各地駱駝產(chǎn)區(qū)的牧民常飲用駝乳以增強(qiáng)體質(zhì)，并用駝乳輔助治療腸胃炎、糖尿病、肺結(jié)核、肝病等疾病[1，2]。駝乳中含有牛磺酸[3]，牛磺酸對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的多種動(dòng)物疾病模型均有一定的治療作用。肝臟是?；撬岽x的主要場(chǎng)所，也是其重要的靶器官，因此牛磺酸與肝病的關(guān)系近年來(lái)成為研究熱點(diǎn)。有學(xué)者報(bào)道，駝乳對(duì)肝病患者來(lái)說(shuō)是一種很好的輔助食品，對(duì)肝損傷有保護(hù)作用[4～6]。為進(jìn)一步提升駝乳對(duì)肝損傷的保護(hù)效果，本文在駝乳粉中添加?；撬?，以期考察?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠酒精性肝損傷的影響。

1 材料與儀器

1.1 材料

駝乳粉（新疆旺源駝奶實(shí)業(yè)有限公司提供）；?；撬幔ㄊ称芳?jí)，購(gòu)自潛江永安藥業(yè)有限公司）。將駝乳粉和牛磺酸以9∶1（質(zhì)量比）混合作為試驗(yàn)材料。

1.2 動(dòng)物

健康雄性ICR清潔級(jí)小鼠60只，由新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（滬）2012-0002，體重18.0～22.0 g，按體重隨機(jī)分為5組，每組12 只。全部動(dòng)物均給予飼料和飲用水，自由取用。

1.3 主要儀器

JY92-Ⅱ型超聲波細(xì)胞粉碎儀、離心機(jī)、MD酶標(biāo)儀、振蕩器、恒溫水浴箱、AU-640生化分析儀、甘油三脂和總蛋白測(cè)定試劑盒、丙二醛和還原型谷胱甘肽測(cè)定試劑盒、冷凍切片機(jī)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及急性肝損傷模型建立

將小鼠按體重隨機(jī)分5 組，每組12 只，分別設(shè)為低、中、高劑量組（受試物含量分別為0.5 g/kg、1.0 g/kg、3.0 g/kg，統(tǒng)稱樣品組），空白組和模型組。各組連續(xù)灌胃30 d，灌胃體積20 mL/kg·BW，空白組和模型組給予純凈水。給予受試物結(jié)束后，樣品組和模型組一次灌胃給予50%乙醇（14 mL/kg·BW），空白組給予純凈水，禁食16 h，處死小鼠，取同一部位肝臟進(jìn)行肝臟組織病理學(xué)檢查及肝組織勻漿中丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG）測(cè)定。

表1 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝臟組織病理學(xué)變化的影響

2.2 檢測(cè)方法

2.2.1 肝臟組織病理學(xué)檢查

取肝組織經(jīng)12%福爾馬林溶液固定后，從肝左葉中部做橫切面取材，冰凍切片，蘇丹III染色，光鏡檢查。

2.2.2 生化指標(biāo)測(cè)定

取0.2 g肝組織，制成5%肝組織勻漿，用生化儀測(cè)定勻漿中TG和蛋白質(zhì)含量，用丙二醛和還原型谷胱甘肽測(cè)定試劑盒測(cè)定MDA和GSH含量。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。小鼠肝組織勻漿中TG、MDA、GSH等數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，原始數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，在滿足“方差齊”和“正態(tài)分布”的要求后，用單因素方差分析法（ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)P＜0.05的數(shù)據(jù)用多個(gè)試驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均屬的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對(duì)方差不齊和組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

3 結(jié)果

3.1 牛磺酸聯(lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝臟組織病理學(xué)變化的影響

在電鏡下觀察小鼠肝臟組織，根據(jù)脂滴在肝細(xì)胞內(nèi)的分布、面積和范圍，將肝細(xì)胞脂滴含量分為5 級(jí)，以判斷小鼠肝臟組織的病理學(xué)變化情況。除空白組外，各組小鼠均出現(xiàn)不同程度的肝細(xì)胞脂肪變性（表1）；模型組肝細(xì)胞脂肪變性與空白組相比，差異極顯著（P＜0.01），表明建模成功；樣品組與模型組小鼠相比，肝細(xì)胞脂肪變性不同程度減輕，其中中劑量組差異顯著（P＜0.05），表明?；撬崧?lián)合駝乳粉具有減輕酒精性肝損傷小鼠肝細(xì)胞脂肪變性的作用。

3.2 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中MDA含量的影響

?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）含量的影響見(jiàn)表2。模型組小鼠肝勻漿中MDA含量升高，與空白組相比差異極顯著（P＜0.01），表明建模成功。樣品組小鼠肝勻漿中MDA值與模型組相比均有所降低，其中低、中劑量組與模型組相比差異顯著（P＜0.05），表明低、中劑量組能降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中MDA含量。

3.3 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中GSH含量的影響

?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響見(jiàn)表3。模型組小鼠肝勻漿中GSH含量降低，與空白組相比差異極顯著（P＜0.01），表明建模成功。樣品組小鼠肝勻漿中GSH含量與模型組相比均有所增加，其中低、中劑量組與模型組相比差異顯著（P＜0.05），表明低、中劑量組能增加酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中GSH含量。

3.4 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中TG含量的影響

牛磺酸聯(lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中甘油三脂（TG）含量的影響見(jiàn)表4。模型組小鼠肝勻漿中TG含量增高，與空白組相比差異極顯著性（P＜0.01），表明建模成功。樣品組小鼠肝勻漿中TG含量與模型組相比均有下降，且各劑量組與模型組相比差異均極顯著（P＜0.01），表明各劑量組均具有降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中TG含量的功能。

表2 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）含量的影響（±s）

表2 牛磺酸聯(lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）含量的影響（±s）

值—1 7 13 71空白組 12 1.08±0.40 0.000

表3 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響（±s）

表3 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響（±s）

組別 動(dòng)物數(shù)（只）GSH（mg/g蛋白質(zhì)）F值模型組 12 4.43±2.29** —低劑量組 12 6.93±2.45# 0.045中劑量組 12 6.97±2.35# 0.041高劑量組 12 6.76±2.75 0.065空白組 12 7.22±0.97 0.002

表4 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中甘油三脂（TG）含量的影響（±s）

表4 ?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)小鼠肝勻漿中甘油三脂（TG）含量的影響（±s）

組 別 動(dòng)物數(shù) TG（μmol/g肝）F值模型組 12 14.4±4.5** —低劑量組 12 8.7±2.6## 0.002中劑量組 12 8.8±3.8## 0.002高劑量組 12 8.6±3.9## 0.002空白組 12 5.0±3.6 0.000

4 討論

機(jī)體大量攝入乙醇后，在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化成乙醛，乙醛可減少還原性谷胱甘肽（GSH）的濃度，引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生過(guò)量的丙二醛（MDA），增加自由基的毒性作用，同時(shí)影響肝臟微管功能，減少微管蛋白分泌，阻礙脂蛋白的排除，甘油三酯（TG）在高爾基體中堆積，難以排出，使三羧酸循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱，從而影響脂肪代謝，導(dǎo)致脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉淀，這與急性酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，灌胃30 d牛磺酸聯(lián)合駝乳粉后，低、中劑量組能顯著降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中MDA含量（P＜0.05），說(shuō)明樣品可通過(guò)抑制自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生，從而部分抑制過(guò)氧化反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞；低、中劑量組能顯著提高酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中GSH含量（P＜0.05），說(shuō)明樣品可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)于自由基的耐受，從而減輕氧化應(yīng)激損傷；各劑量組均能顯著降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中TG含量（P＜0.01），說(shuō)明樣品可以改善肝臟的微管功能，促進(jìn)脂蛋白排出，減少TG在肝臟內(nèi)堆積，增強(qiáng)TG在肝臟內(nèi)的代謝。此外，病理學(xué)變化表明，與模型組相比，各劑量組小鼠肝細(xì)胞脂肪變性有不同程度的減輕，其中中劑量組差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明樣品對(duì)小鼠肝臟組織病理學(xué)指標(biāo)的影響呈陽(yáng)性。綜上所述，?；撬崧?lián)合駝乳粉對(duì)酒精性肝損傷具有輔助保護(hù)作用，是一種很好的護(hù)肝產(chǎn)品。C