高效液相色譜固定相法拆分手性除草劑甲咪唑煙酸

舒亞玲，沈靜茹，溫廣源，張 思，陸金富

(中南民族大學 化學與材料科學學院 分析化學國家民委重點實驗室，湖北 武漢 430074)

咪唑啉酮類除草劑是一類具有較高生物活性的極性除草劑，常用來防治廣譜雜草[1]。其具有極性和可電離性，是地表水和地下水中最常見的化學物質之一[2]。甲咪唑煙酸就是唑啉酮類除草劑系列中的一種，此前的毒理學研究表明，它會導 致一些健康問題，如眼睛過敏、貧血、肝損傷、膽固醇升高和肌肉退化[3]。張愛娟[4]等選用ZORBAX SB-C18色譜注，在反相高效液相色譜模式下，可以實現(xiàn)原藥中甲咪唑煙酸消旋體含量測定，且該方法的平均回收率高達98.78%，但無法實現(xiàn)兩對映體分離。由于對映體的生物學、藥理學和毒理學效應的差異日益引起人們的關注，因此對純對映體物質的需求越來越大。手性固定相高效液相色譜法分離對映體已成為有力的工具之一[5]。環(huán)糊精的衍生物作為手性固定相材料是近年來應用很廣泛的手性固定相之一，具有手性識別能力強、性能穩(wěn)定、成本較低的優(yōu)點[6]。本文采用雙-(6-氧-間羧基苯磺?；?-β-環(huán)糊精高效液相色譜手性柱，構建了甲咪唑煙酸對映體手性分離的新方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

LC-16高效液相色譜儀(島津儀器(蘇州)有限公司)；ZD-2型自動電位滴定計(上海偉業(yè)儀器廠)；KQ2200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FA2004電子分析天平(上海華光儀器儀表廠)；25 μL微量進樣器(上海高鴿工貿有限公司)；自制雙-( 6-氧-間羧基苯磺?；? -β-環(huán)糊精高效液相色譜手性柱(150 mm×?4.6 mm)；甲咪唑煙酸標準品(阿拉丁試劑網(wǎng))；甲醇、冰醋酸和三乙胺(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)。

1.2 實驗前處理

將甲咪唑煙酸標準品配置成1.073×10-4mol/L的甲咪唑煙酸溶液，過濾備用。移取適量的冰醋酸溶于水中，用三乙胺調節(jié)pH配置成緩沖溶液。將甲醇和醋酸-三乙胺緩沖溶液分別經(jīng)過0.22 μm濾膜過濾，脫氣備用。

2 結果與討論

2.1 流動相配比的影響

選用20 mmol/L醋酸-三乙胺為緩沖液，pH值4.80 ，流速0.5 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫25℃的條件下，甲咪唑煙酸消旋體濃度為1.073×10-4mol/L，進樣體積20 μL。改變流動相中甲醇和醋酸-三乙胺的體積比，將甲醇配比從15%變至75%，考察分離結果。

結果顯示：在甲醇比例為25%～45%時，甲咪唑煙酸對映體有分離跡象。隨著甲醇比例的增加，樣品峰保留時間逐漸減小，峰型相對來說愈加尖銳，洗脫強度增加。這可能是由于流動相的疏水性增加，與樣品相似相容，使得樣品更容易洗脫出來。流動相配比為15%∶85%、25%∶75%、35%∶65%和55%∶45%的考察結果如圖1所示。綜合考慮保留時間、峰型以及分離度，選擇25%∶75%為甲醇和醋酸-三乙胺的最佳配比。

甲醇:醋酸-三乙胺a.15/85；b.25/75；c.35/65；d.55/45

圖1 不同流動相比例對甲咪唑煙酸對映體分離的影響

Fig.1 Effect of different proportion of mobile phase on imazapic enantioseparation

2.2 pH值的影響

在甲醇和醋酸-三乙胺的體積比為25%∶75%，其他條件同2.1的條件下，只改變醋酸-三乙胺的pH值分別為4.50、4.80、5.50、6.00、6.30、6.50、6.80和7.00來分析樣品的分離情況。結果顯示：在pH值4.50～7.00范圍內，兩對映體均有拆分跡象，在4.80～6.50范圍內分離度較大，隨著pH值的增大，峰型逐漸變得銳利，樣品峰的出峰時間大體呈現(xiàn)逐漸減小的趨勢。這說明pH值的增大有利于樣品的洗脫。且在pH值5.50至6.50范圍，樣品分離度都大于1.5，可以實現(xiàn)基線分離。pH值分別為4.50、4.80、6.50和7.00的考察結果如圖2所示，結合樣品的洗脫強度綜合考慮，選擇6.50為最佳pH值。

pH值：a.4.50；b.4.80；c.6.50；d.7.00；

圖2 不同pH值對甲咪唑煙酸對映體分離的影響

Fig.2 Effect of different pH on imazapic enantioseparation

2.3 對照試驗

在最佳分離條件下，1.073×10-4mol/L甲咪唑煙酸和溶劑水的對照結果如圖3所示。結果顯示：溶劑水(圖3b曲線)的出峰時間與樣品前峰的出峰時間有重疊，水峰的響應強度微弱且為負峰，對甲咪唑煙酸的響應信號(圖3a曲線)沒有貢獻，即對甲咪唑煙酸對映體手性拆分結果無影響。

a.甲咪唑煙酸；b.水

圖3 對照實驗色譜圖

Fig.3 Chromatogram of the control experiment

3 結論

采用自制的雙-( 6-氧-間羧基苯磺?；? -β-環(huán)糊精高效液相色譜柱構建手性環(huán)境，使用島津LC-16高效液相色譜儀分離甲咪唑煙酸外消旋體。分別探究分離條件(如醋酸-三乙胺與甲醇的配比和pH值等)對甲咪唑煙酸兩對映體分離效果的影響，得到最佳分離條件為：20 mmol/L醋酸-三乙胺，pH值6.50 ,流速為0.5 mL/min，柱溫25℃，甲醇與醋酸-三乙胺的體積比為25%∶75%。在最佳條件下可以實現(xiàn)甲咪唑煙酸對映體的手性分離，其分離度為2.34。這為甲咪唑煙酸外消旋體的手性分離提供了一種新方法。

致謝

感謝中央高?；究蒲袠I(yè)務費專項資金項目(項目號：CZY18044)的資助。