黃志華, 魏培堅, 江 玲, 陳 穗, 程必紅, 林 穎, 吳林耿, 許秋雄, 吳少偉, 王海燕, 沈建新

(1. 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)本科生， 2. 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實驗室，3. 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室， 4. 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，廣東 汕頭 515041)

飲料中的酒精成分可給機(jī)體各功能系統(tǒng)(特別是神經(jīng)系統(tǒng))帶來諸多影響。飲用烈性酒或長期酗酒可致情緒不穩(wěn)、注意力分散、周圍性神經(jīng)病變、酒精中毒性癡呆等神經(jīng)功能相關(guān)變化[1-4]。蛙類坐骨神經(jīng)干是其外周神經(jīng)系統(tǒng)中的重要組成部分,其離體標(biāo)本具有制備方便、長度長、功能穩(wěn)定的優(yōu)點,是檢測神經(jīng)干動作電位的理想標(biāo)本[5-7]。已有一些研究探討了不同濃度酒精溶液對蛙類坐骨神經(jīng)干動作電位的影響,但綜合分析后發(fā)現(xiàn)這些研究或多或少存在各種缺陷(如配液方法錯誤、給藥方法和記錄方法不合理等),導(dǎo)致其結(jié)論不精確不可靠(詳見討論部分)[5, 8-17]。本研究克服我們發(fā)現(xiàn)的這些缺陷,采用自身對照實驗設(shè)計方法，在離體神經(jīng)干的中樞端施加刺激,在外周端記錄由刺激所引起的雙相復(fù)合動作電位(biphasic compound action potentials, APs)的波形變化；合理配制的更大范圍的不同濃度(1%～80%)酒精任氏液，通過經(jīng)典神經(jīng)干屏蔽盒中新加裝的加藥液槽作用到刺激電極和記錄電極之間的一段神經(jīng)干上，用生物機(jī)能實驗系統(tǒng)(BL-420F)[6, 17, 18]收集數(shù)據(jù)，再用自編的程序輔助處理數(shù)據(jù)，從而系統(tǒng)定量分析不同濃度酒精任氏液對同一神經(jīng)干AP峰值和傳導(dǎo)速度的影響，同時評估其恢復(fù)情況。研究結(jié)果較全面地揭示了不同濃度酒精任氏液對神經(jīng)干AP的影響情況，為進(jìn)一步的深入和精準(zhǔn)研究打下良好基礎(chǔ)；所采用的實驗方法將可推廣應(yīng)用于定量檢測藥物對外周神經(jīng)干AP的作用研究中。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

牛蛙，雌雄不拘，健康，體重約100 g

1.2 主要實驗儀器和試劑

常用蛙類手術(shù)器械、經(jīng)典神經(jīng)干屏蔽盒、生物機(jī)能實驗系統(tǒng)BL-420F(含硬件,軟件和配件，均購自成都泰盟軟件有限公司)、無水乙醇、加藥液槽等。

1.3 不同酒精任氏液的配制

標(biāo)準(zhǔn)任氏液的配方(g/L): NaCl 6.5、KCl 0.14、Na2CO30.20、NaH2PO40.01、CaCl20.12[5, 6, 17]。先配制5倍濃度的任氏液母液,再按比例各取相應(yīng)容積的母液、無水酒精和蒸餾水混合成為含不同濃度酒精(0%、1%、2%、4%、8%、16%、32%、48%、64%、80%，容積百分比)的任氏液，保證不同濃度酒精任氏液中各離子濃度與標(biāo)準(zhǔn)任氏液的配方相同。

1.4 蛙坐骨神經(jīng)干標(biāo)本的制備和使用

按常規(guī)方法制備蛙坐骨神經(jīng)干標(biāo)本[5, 6, 17],長度約6～8 cm，在標(biāo)準(zhǔn)任氏液中浸泡30 min后，置于經(jīng)典神經(jīng)干屏蔽盒中，形成如圖1所示的單通道雙相AP記錄連接：S1+和S2-是刺激電極的正極和負(fù)極，R1是記錄電極,R2是參比電極, E是接地線。

1.5 不同濃度酒精任氏液的施加方法

我們在刺激電極S2和地線E之間創(chuàng)新性地加裝一個加藥液槽，使刺激輸出的負(fù)極和接地線電極之間的一段神經(jīng)干浸泡在加藥液槽的液體中，通過滴管吸取或添加不同濃度酒精任氏液于加藥液槽中，達(dá)到既可定量改變局部神經(jīng)干所接觸的液體環(huán)境而又不影響電極與神經(jīng)干接觸部位的目的(圖1)。

Fig.1Diagram to show how to record biphasic action potentials (APs) from a nerve trunk with a new-armed agent reservoir

S1+ S2-: Stimulating positive and negative electrodes; R1+ R2-: Recording and reference electrodes; E: Ground electrode; Ch1: Channel 1 of the experimental system of BL-420F

1.6 實驗記錄方案

本實驗均在室溫(23～25℃)下進(jìn)行。在標(biāo)本功能穩(wěn)定后，加藥液槽中首先加的是標(biāo)準(zhǔn)任氏液,記錄刺激強度對雙相AP的影響情況，作幅度-強度關(guān)系曲線，確定標(biāo)本的最適刺激強度；之后以最適刺激強度以上刺激作為后續(xù)實驗的固定強度，進(jìn)行如下系列實驗：(1)在標(biāo)準(zhǔn)任氏液作用下,記錄雙相AP波形；(2)將加藥液槽中的標(biāo)準(zhǔn)任氏液置換為某一不同濃度酒精(從1%開始)任氏液，作用5 min后，記錄其雙相AP波形，此為藥物作用后的效應(yīng)記錄；(3)之后用標(biāo)準(zhǔn)任氏液反復(fù)沖洗加藥槽5次,將加藥液槽中的液體完全置換成標(biāo)準(zhǔn)任氏液,浸泡5 min，再次記錄雙相AP波形，此為沖洗后的恢復(fù)記錄；(4)如“(3)”能成功記錄到AP，則置換加藥液槽中的液體為更高濃度的酒精任氏液，重復(fù)“(2)”和“(3)”的實驗；如“(3)”不能記錄到AP，則該標(biāo)本的實驗結(jié)束，換下一個標(biāo)本再從頭開始實驗記錄。采用此流程，一個標(biāo)本最多可進(jìn)行20次實驗記錄，歷時約150 min。替換藥液時要注意不改變電極與神經(jīng)干接觸的部位，并注意給神經(jīng)干表面加濕，以保證標(biāo)本活性和記錄的穩(wěn)定性。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

用BL-420F實驗系統(tǒng)記錄所得數(shù)據(jù)均可先導(dǎo)出為文本文件，再通過自編的程序可對其進(jìn)行自動或半自動的系統(tǒng)定量處理分析和綜合比較統(tǒng)計(視需要采用不同的統(tǒng)計分析方法如配對t-檢驗或隨機(jī)區(qū)組方差分析等)。

2 結(jié)果

2.1 坐骨神經(jīng)干雙相AP最適刺激強度的測定和傳導(dǎo)速度的計算

在加藥液槽中加入標(biāo)準(zhǔn)任氏液，實驗系統(tǒng)的刺激參數(shù)設(shè)置如下：程控單刺激，波寬0.05 ms，延時5 ms，采樣率20 000 Hz，刺激強度從0 V開始，逐次增加刺激幅度(增量為0.02 V)；記錄所產(chǎn)生的雙相AP波形。當(dāng)實驗中觀察到雙相AP的幅度保持穩(wěn)定，不再隨刺激強度的增大而變化時即可停止本次實驗記錄。實驗結(jié)果經(jīng)處理分析后可發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)出如下規(guī)律(圖2A)： 隨著刺激強度的增大，雙相AP的波形從無到有，幅度從小到大，增大到一定程度后峰值不再隨刺激強度的增大而增大，保持穩(wěn)定；如把各波形按刺激強度從小到大順序排列，連接其峰值連線可得到一條長尾S型曲線，該曲線可反映雙相AP峰值與刺激強度之間的關(guān)系；由此曲線可找出該標(biāo)本的最適刺激強度(在本例中最適刺激強度為 0.92 V)。通過雙相AP的波形，可找出其刺激起點(即刺激偽跡起點)的時間點a和峰值所在的時間點b，由此可得到時間差(t=ab，圖2B)； 而刺激電極S2和記錄電極R1之間的神經(jīng)干長度為d(圖1),因此，該標(biāo)本的雙相AP平均傳導(dǎo)速度v=d/t(在本例中，雙相AP平均傳導(dǎo)速度為23.53 m/s)(圖2B)。

2.2 不同濃度酒精任氏液對神經(jīng)干AP的影響及其沖洗后的恢復(fù)(典型結(jié)果示例)

固定刺激強度于最適刺激強度以上刺激(本研究中一般固定為2.0 V，可保證幾乎所有標(biāo)本都達(dá)到最適強度以上刺激)，分別記錄標(biāo)準(zhǔn)任氏液(Control)和不同濃度酒精任氏液(1%A-80%A)作用于神經(jīng)干后引起的神經(jīng)干雙相AP波形變化(圖3左側(cè))，并同時記錄相應(yīng)濃度酒精任氏液作用后再用標(biāo)準(zhǔn)任氏液沖洗并浸泡后神經(jīng)干雙相AP波形的恢復(fù)情況(圖3右側(cè)。 圖3為一個典型結(jié)果波形示例，圖4則是對此典型結(jié)果的雙相AP峰值和平均傳導(dǎo)速度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理和比較)。

Fig.2Relationship between biphasic APs of sciatic nerve trunk and stimulus intensity, and the measurement of average conduction velocity

A: Relationship between AP waveforms and stimulus intensity. As stimulus increases, AP starts to appear and its amplitude increases gradually till being stable. A long tail “S” shape curve is formed if connecting the peak points of each AP. The maximal stimulus intensity is determined when the curve begins to reach its plateau (0.92 V in this case). B: A typical AP waveform elicited by a stimulus above the maximal intensity. “a” is the starting time point of a stimulus (i.e. the beginning of the stimulus artifact) and “b” is the time point where AP maximal amplitude is located, and time difference is represented as Δt=ab. So average condition velocity is calculated byv=d/Δt (23.53 m/s in this case; “d” is the nerve distance between S2- and R1+ as shown in Fig.1)

Fig.3Effects of Ringer’s solution with different concentrations of alcohol on action potentials (APs) and recovery after washout (Typical case)

Control: AP under Ringer’s solution without alcohol; 1%A: AP under the treatment of Ringer’s solution with alcohol concentration at 1%; 1%W: AP after washout off “1%A” using Ringer’s solution. Others follow the same naming patterns

Fig.4Effects of Ringer’s solution with different concentrations of alcohol on action potential (AP) peak amplitude and conduction velocity (representative case)

A: Effects of Ringer’s solution with different concentrations of alcohol on AP peak amplitude (effect curve) and recovery after washout (recovery curve); B: Effects on AP conduction velocity (effect curve) and recovery after washout (recovery curve). Original data axis is on the left and standardized data axis on the right; Control: indicates AP under Ringer’s solution without alcohol; 1%A: AP under the treatment of Ringer’s solution with alcohol concentration at 1%; 1%W: AP recovery after washout by Ringer’s solution from being treated with “1%A”, and etc

2.3 不同濃度(1%～80%)酒精任氏液對神經(jīng)干雙相AP峰值和產(chǎn)生概率的影響和恢復(fù)情況 (標(biāo)準(zhǔn)化后數(shù)據(jù)綜合分析, n=10)

通過大量實驗,我們得到10個標(biāo)本的完整有效數(shù)據(jù)。各個標(biāo)本的峰值數(shù)據(jù)都以各自標(biāo)準(zhǔn)液時的雙相AP的峰值為1進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并作統(tǒng)計分析可獲如下結(jié)果(圖5)：(1)不同濃度酒精任氏液對神經(jīng)干雙相AP峰值影響的特點：≤4%酒精任氏液對雙相AP的峰值無影響；≥8%可使雙相AP峰值下降(P<0.05)；≤8%時神經(jīng)干雙相AP的產(chǎn)生概率均為100%(10/10)，但8%時神經(jīng)干的雙相AP峰值已下降到正常時的89%±16%(P<0.05，n=10/10,分母10表示標(biāo)本總數(shù)為10,分子10表示能產(chǎn)生AP的標(biāo)本數(shù)為10,余類推)；16%可使部分(3/10)神經(jīng)干失去產(chǎn)生AP的能力，此時剩下的7個雙相AP的平均峰值下降到59%±28%；32%可使大部分(9/10)神經(jīng)干失去產(chǎn)生AP的能力，僅剩的1個雙相AP的峰值下降到2%；而≥48%可使全部(10/10)神經(jīng)干失去產(chǎn)生雙相AP的能力。(2) 不同濃度酒精任氏液作用后沖洗，神經(jīng)干雙相AP峰值恢復(fù)的特點： ≤32%酒精任氏液作用后沖洗，雙相AP峰值可完全恢復(fù)， 甚至8%和16%作用后沖洗還可使峰值增大(與標(biāo)準(zhǔn)液時相比，P<0.05)；48%作用后沖洗，多數(shù)標(biāo)本(9/10)可恢復(fù)產(chǎn)生雙相AP的能力，但平均峰值只有正常時的60%±27%；64%酒精任氏液作用后沖洗，還有部分標(biāo)本(4/10)可恢復(fù)產(chǎn)生雙相AP的能力，且峰值只有正常時的36%±17%；80%作用后沖洗，無法恢復(fù)產(chǎn)生雙相AP的能力。

Fig.5Effects of Ringer’s solution with different concentrations of alcohol on action potential (AP) peak and its recovery after washout (summarized analysis,n=10)

A: Curves demonstrating relationship between alcohol concentrations and AP peak; B: Simplified chart showing quantitative effects of alcohol concentration on AP peak, corresponding to the effect curve (Standardized AP peak under “Control” is considered as “1”); C: Simplified chart showing recovery of AP peak after washout, corresponding to the recovery curve

*P<0.05 decreased effectsvscontrol;#P<0.05 increased recoveryvscontrol;△P<0.05 decreased recoveryvscontrol

2.4 不同濃度(1%～80%)酒精任氏液對神經(jīng)干雙相AP傳導(dǎo)速度的影響和恢復(fù)情況(標(biāo)準(zhǔn)化后數(shù)據(jù)綜合分析, n=10)

對上述10個標(biāo)本的神經(jīng)干雙相AP的平均傳導(dǎo)速度數(shù)據(jù)都以各自標(biāo)準(zhǔn)液時的平均傳導(dǎo)速度為1進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并作統(tǒng)計分析，可獲得如下結(jié)果(圖6)：(1) 不同濃度酒精任氏液對雙相AP傳導(dǎo)速度的影響：≤4%酒精任氏液作用后傳導(dǎo)速度雖有下降趨勢，但均未達(dá)到顯著差異水平(P>0.05)；≥8%酒精任氏液作用后傳導(dǎo)速度則顯著下降(P<0.01)，8%酒精任氏液作用后傳導(dǎo)速度為正常時的87%±11%(n=10/10),16%酒精任氏液作用后傳導(dǎo)速度為正常時的75%±11%(n=7/10),32%酒精任氏液作用后傳導(dǎo)速度為正常時的74%(n=1/10)；(2)不同濃度酒精任氏液作用后沖洗，雙相AP傳導(dǎo)速度的恢復(fù)情況： ≤8%酒精任氏液作用后沖洗, 雙相AP的平均傳導(dǎo)速度與正常無異(n=10/10)，完全恢復(fù)；≥16%作用后沖洗,則雙相AP的平均傳導(dǎo)速度無法完全恢復(fù)，平均傳導(dǎo)速度明顯比標(biāo)準(zhǔn)液時低(P<0.05,n=10/10)：16%時，平均傳導(dǎo)速度為標(biāo)準(zhǔn)液時的88%±16%(n=10/10)；32%時，平均傳導(dǎo)速度為標(biāo)準(zhǔn)液時的82%±16%(n=10/10)；48%時，平均傳導(dǎo)速度為標(biāo)準(zhǔn)液時的78%±20%(n=9/10)。

Fig.6Effects of Ringer’s solution with differentconcentrations of alcohol on action potential (AP) conduction velocity and its recovery after washout (summarized analysis,n=10)

A: Curves demonstrating relationship between alcohol concentrations and averaged conduction velocity; B: Simplified chart showing quantitative effects of alcohol concentration on AP conduction velocity, corresponding to the effect curve (Standardized conduction velocity under “control” is considered as “1”); C: Simplified chart showing recovery AP conduction velocity after washout, corresponding to the recovery curve

**P<0.01 decreased effectsvscontrol;#P<0.05 decreased recoveryvscontrol

3 討論

3.1 與已有研究相比,本研究的特色

神經(jīng)干AP是反映外周神經(jīng)功能的重要指標(biāo)。已有一些研究探討不同濃度酒精溶液對蛙類坐骨神經(jīng)干AP的影響。但綜合分析后發(fā)現(xiàn)這些研究或多或少存在各種缺陷，主要的缺陷主要是以下兩種：(1)實驗中所用不同濃度酒精溶液的配制方法不明確[8-10]，或配制方法不合理[11-13]：基本都用標(biāo)準(zhǔn)任氏液(有的可能直接用蒸餾水)將95%的酒精或無水乙醇按容積比配制成1%～12%或其他百分比的酒精溶液，這會導(dǎo)致終溶液中標(biāo)準(zhǔn)任氏液的成分與正常時相比發(fā)生較大改變，而不只是酒精濃度的不同，特別是在高濃度的時候。(2)更換不同濃度藥液時，采用浸泡法[5, 10-20]，即將神經(jīng)干從標(biāo)本盒上取下，浸泡到相應(yīng)的藥液中一段時間，之后再放到標(biāo)本盒中繼續(xù)實驗；這會導(dǎo)致神經(jīng)干的刺激部位和記錄部位發(fā)生改變，從而受刺激產(chǎn)生AP的纖維數(shù)量發(fā)生變化，能被記錄到的纖維數(shù)量也發(fā)生變化，而這些變化是人為的而不是由于藥液的改變所產(chǎn)生的，因此會嚴(yán)重影響同一標(biāo)本的不同次實驗記錄結(jié)果之間的可比性。由于上述種種缺陷的存在，導(dǎo)致影響相關(guān)研究的數(shù)據(jù)及結(jié)論的可靠性和精確度。

本工作通過分析文獻(xiàn)中已有研究的不足，并在實際測試中反復(fù)探索實踐，最終采用一套能克服上述缺陷的優(yōu)化研究方法(此方法在現(xiàn)有研究的文獻(xiàn)中未發(fā)現(xiàn))：(1)采用更合理的方法配制不同濃度的酒精任氏液(詳見材料與方法部分)，基本原則是以不同濃度的酒精溶液為底液配制標(biāo)準(zhǔn)任氏液；而不是反過來：以標(biāo)準(zhǔn)任氏液為底液配制不同濃度酒精的任氏液；從而保證在終溶液中任氏液的各基本成分在溶劑中的摩爾濃度與標(biāo)準(zhǔn)任氏液中的完全一樣，因而標(biāo)本不會因為無機(jī)鹽成分的濃度改變而影響活性；這樣可確保標(biāo)本功能的改變都是因為酒精濃度的改變而引起的。這也是為什么本研究配液時要使用5倍濃度的任氏液母液而不用標(biāo)準(zhǔn)任氏液的原因。 (2)采用在經(jīng)典標(biāo)本盒的刺激電極和記錄電極之間加裝加藥液槽的方法(圖1)，從而達(dá)到方便更換藥液，同時不改變刺激部位、不改變記錄部位、也不改變藥物作用部位的目的，這樣可保證除了藥液成分的不同外，其他條件都完全一致，確保同一標(biāo)本在不同藥液的作用下其結(jié)果具有嚴(yán)格的可比性。

此外，本研究提供了實驗數(shù)據(jù)的原始波形和數(shù)據(jù)的處理分析及標(biāo)準(zhǔn)化的詳細(xì)流程和方法(圖3，4)：只有在正常情況下能得到典型雙相AP波形的標(biāo)本，才能進(jìn)行后續(xù)的實驗流程；只有嚴(yán)格按要求走完所有實驗流程(同一標(biāo)本最多可進(jìn)行19次不同藥液的作用和記錄)的結(jié)果，才是一套完整有效的實驗結(jié)果。

還有，本研究不僅嚴(yán)格采用自身對照實驗設(shè)計方法，覆蓋更寬酒精濃度范圍(從1%到80%)，更有意義的是: 本研究還系統(tǒng)地記錄了不同濃度酒精任氏液作用后沖洗，神經(jīng)干雙相AP的恢復(fù)情況，從而使得本研究的結(jié)果更全面、更系統(tǒng)且更有實用意義(如可以作為高濃度酒精損傷后是否可恢復(fù)的重要參考)，從而保證本研究的相關(guān)結(jié)論具有更好的可靠性和實用性。

3.2 不同濃度酒精任氏液對神經(jīng)干雙相AP的影響特點

本研究采用系統(tǒng)定量的方法比較分析所得到的10例完整的有效數(shù)據(jù)(圖5，6)，發(fā)現(xiàn)：與標(biāo)準(zhǔn)任氏液的情況相比，(1)低濃度(≤4%)酒精任氏液對神經(jīng)干的雙相AP的峰值無影響；濃度≥8%酒精任氏液可使神經(jīng)干的雙相AP峰值顯著下降(P< 0.05)，雖然8%酒精任氏液時神經(jīng)干雙相AP的產(chǎn)生概率仍為100%(10/10)(圖5)。峰值的降低主要是因為興奮的神經(jīng)纖維數(shù)量減少，而不可能是因為某些單根神經(jīng)纖維的AP峰值降低所致,原因是在我們的實驗方法中,記錄電極所處位置的神經(jīng)干是不受酒精影響的,是完好的。(2)16%酒精任氏液可使部分(3/10)神經(jīng)干失去產(chǎn)生AP的能力，此時僅剩的7個雙相AP的峰值下降到59%±28%(標(biāo)準(zhǔn)化后的峰值)；32%酒精任氏液可使大部分(9/10)神經(jīng)干失去產(chǎn)生AP的能力，僅剩的1個雙相AP的峰值下降到2%；而≥48%可使全部(10/10)神經(jīng)干失去產(chǎn)生雙相AP的能力(圖5)。可見神經(jīng)干受刺激后產(chǎn)生AP的概率隨著酒精濃度的升高而降低,呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)；神經(jīng)干失去產(chǎn)生雙相AP能力的原因可能是一定濃度的酒精成分可使產(chǎn)生AP的相關(guān)通道蛋白(如鈉離子通道或鉀離子通道蛋白或鈉鉀泵蛋白)發(fā)生可逆或不可逆的功能變化。 (3)低濃度酒精任氏液對AP傳導(dǎo)速度無顯著影響，而≥8%酒精任氏液作用后傳導(dǎo)速度明顯下降(P<0.01, 圖6)。酒精成分影響AP傳導(dǎo)速度的原因可能在于：傳導(dǎo)速度快的神經(jīng)纖維對酒精更敏感，因而更容易失去產(chǎn)生AP的能力；或者酒精分子可能影響AP相關(guān)蛋白的動力學(xué)效應(yīng)或離子進(jìn)出通道的速度。綜合上述結(jié)果，可知，低濃度酒精(≤4%)任氏液作用后對雙相AP峰值和傳導(dǎo)速度無顯著影響；到8%時，AP的峰值和傳導(dǎo)速度已發(fā)生顯著減小或減慢。16%的酒精可使部分神經(jīng)干完全失去產(chǎn)生雙相AP能力；32%可使大部分神經(jīng)干失去產(chǎn)生雙相AP的能力，48%則可使所有神經(jīng)干都失去產(chǎn)生雙相AP能力。因此，通過進(jìn)一步的精細(xì)化實驗，應(yīng)該可進(jìn)一步明確使神經(jīng)干AP開始出現(xiàn)下降、明顯下降和完全喪失的酒精濃度臨界值的范圍。這些濃度范圍的明確，對于評估不同酒精濃度對人體的危害有一定的參考意義。

3.3 不同濃度酒精任氏液作用后沖洗神經(jīng)干雙相AP的恢復(fù)特點

在探究不同濃度酒精任氏液對神經(jīng)干雙相AP的影響效應(yīng)的同時,本研究還系統(tǒng)定量比較分析了不同濃度酒精任氏液作用后再用標(biāo)準(zhǔn)任氏液沖洗,神經(jīng)干雙相AP在峰值和產(chǎn)生概率及傳導(dǎo)速度等方面的恢復(fù)情況,發(fā)現(xiàn)：(1)≤32%酒精任氏液作用后沖洗，神經(jīng)干雙相AP的峰值可完全恢復(fù)到標(biāo)準(zhǔn)任氏液時的水平，甚至8%和16%酒精任氏液作用后沖洗還可使AP峰值增大(與標(biāo)準(zhǔn)液時相比，P< 0.05)，相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步明確；(2)48%酒精任氏液作用后沖洗，多數(shù)標(biāo)本(9/10)可恢復(fù)產(chǎn)生雙相AP的能力，但平均峰值下降至60%±27%；64%酒精任氏液作用后沖洗，仍有部分標(biāo)本(4/10)可恢復(fù)產(chǎn)生雙相AP的能力，但峰值下降至36%±17%；80%酒精任氏液作用后沖洗，神經(jīng)干無法恢復(fù)產(chǎn)生雙相AP的能力,此時估計所有神經(jīng)纖維膜上的蛋白質(zhì)已經(jīng)發(fā)生不可逆的變性,因而功能無法恢復(fù)。(3)≤8%酒精任氏液作用后沖洗, 雙相AP的平均傳導(dǎo)速度與正常無異；≥16%而≤64%的酒精任氏液作用后沖洗,雙相AP的平均傳導(dǎo)速度無法完全恢復(fù)：與標(biāo)準(zhǔn)液時相比，平均傳導(dǎo)速度顯著降低(P<0.05)。上述結(jié)果表明,一定濃度的酒精(如≤8%)作用于神經(jīng)干后,如及時去除酒精的影響,神經(jīng)干產(chǎn)生雙相AP的功能(包括峰值和傳導(dǎo)速度)是可以完全恢復(fù)的；但超過一定濃度(如≥16%)后，即使AP的幅度可以完全恢復(fù)，但傳導(dǎo)速度卻無法完全恢復(fù)，這說明此時神經(jīng)干中的有些神經(jīng)纖維的功能狀態(tài)已經(jīng)發(fā)生不可逆的改變；濃度更高(如80%)時，神經(jīng)干功能完全失去恢復(fù)的可能。通過進(jìn)一步的精細(xì)化實驗，應(yīng)該可以進(jìn)一步明確酒精作用后功能可以完全恢復(fù)以及完全無法恢復(fù)的酒精濃度范圍，這對于判斷酒精損傷后的預(yù)后有重要參考意義。

綜上所述, 本研究克服了同類研究中存在的配液不合理、給藥不科學(xué)、結(jié)果可靠性不足等種種缺陷[5, 8-20]，嚴(yán)格采用自身對照實驗設(shè)計和系統(tǒng)定量數(shù)據(jù)分析方法，在更廣的濃度范圍(1%～80%)內(nèi)，探究了不同濃度酒精任氏液對蛙坐骨神經(jīng)干雙相AP的峰值和傳導(dǎo)速度的作用及沖洗后神經(jīng)干功能恢復(fù)的情況，獲得了一系列定量較精準(zhǔn)的規(guī)律性變化，并提出可以進(jìn)一步精細(xì)定量研究的方向。其他動物特別是哺乳類動物如大、小鼠或兔子的神經(jīng)干是否也有類似的情況也是值得定量探究的內(nèi)容。本研究結(jié)果使我們對酒精的外周神經(jīng)作用的認(rèn)識更全面更精準(zhǔn)，對日常酒精飲料的合理使用有一定的參考意義，也有助于判斷酒精使用過量所致?lián)p傷的預(yù)后恢復(fù)效果。