伍錫棟 謝 夢 寇 光 丁 琦 張 蕓 張五萍

(1. 江西省醫(yī)療器械檢測中心，南昌 330029)(2. 江西省人民醫(yī)院體檢科，南昌 330006) (3. 江西省人民醫(yī)院藥學部，南昌 330006)

抑郁癥表現(xiàn)為顯著而持久的心境低落，具有發(fā)病率高、死亡率高、持續(xù)性久[1-2]以及年輕化的特點。全世界每年約有85萬的患者選擇自殺[3]，抑郁癥還可以增加心腦血管等患病風險，影響體內(nèi)脂類代謝，已經(jīng)嚴重影響了人類的健康。鹽酸氟西汀是臨床常用的選擇性5-HT再攝取抑制劑，具有神經(jīng)保護、抗炎、抗腫瘤等藥理作用[4]，在體內(nèi)可代謝為諾氟西汀，其半衰期更長，是相比其他抗抑郁藥的優(yōu)勢所在，臨床實驗已經(jīng)證明鹽酸氟西汀治療抑郁癥的可靠性和安全性；維丙胺為維生素C衍生物，臨床上主要用于急性肝炎及高血脂等癥，不良反應輕少，可促進肝細胞再生，降低血清氨基酸轉(zhuǎn)移酶活性，改善肝功能，對肝臟具有解毒和保護作用及調(diào)節(jié)脂類代謝作用。目前臨床上治療抑郁癥主要采用諸如選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)、選擇性5-羥色胺及去甲腎上腺素(NE)再攝取抑制劑(SNRIs)、NE及特異性5-羥色胺能抗抑郁劑(NaSSA)等的西藥抗抑郁藥治療，療效單一。應激模型是抗抑郁藥物評價應用最為廣泛的模型，主要包括絕望模型、LH模型和慢性不可預知應激模型等，本研究結(jié)合抑郁癥的獨特發(fā)病機制—肝腦同病[5]，給予肝臟輔助治療可以減輕抑郁癥癥狀作為研究的切入點，采用慢性輕度不可預見性應激加孤養(yǎng)建立慢性應激抑郁癥小鼠模型[6]，將維丙胺膠囊與鹽酸氟西汀聯(lián)合用藥，旨在觀察其對抑郁癥的治療效果，為臨床維丙胺用于抗抑郁治療提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

維丙胺膠囊(0.1 g/片，華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司)，鹽酸氟西汀膠囊(20 mg/片，Patheon France)，蔗糖(食用級500 g/袋，河南浩金生物科技有限公司)，ICR小鼠，6～8周齡雄性50只，體質(zhì)量18～22 g，SPF級，購買于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK(湘)2016-0002。飼料、飲水與墊料先經(jīng)121 ℃ 高壓蒸汽滅菌20 min，墊料取出后放入電鼓風干燥箱干燥后使用，實驗動物自由取食飲水，飼養(yǎng)于江西省醫(yī)療器械檢測中心IVC動物實驗室，許可證號SYXK(贛)2016-0002，實驗動物許可證No.43004700043118。

1.2 方法

1.2.1孤養(yǎng)配合慢性應激小鼠抑郁癥動物模型的建立[6]：每只小鼠均單籠飼養(yǎng)，溫度(26±2)℃，濕度60%～80%。刺激條件：禁食24 h，冰水游泳(4 ℃、水深10 cm，5min)，禁飲24 h，熱水游泳(45 ℃、水深10 cm，10 min)，直流電擊足底(電流1.0 mA、電壓50 V，每隔1 min刺激1次，每次刺激10 s，持續(xù)30次)，夾尾1 min，搖晃(高速水平搖晃1次/s、持續(xù)15 min)，行為限制2 h，(鼠籠45°傾斜24 h)、潮濕墊料(100 g墊料加入200 mL水)10 h，空瓶放置1 h，晝夜顛倒(6:00～18:00光照刺激，次日18:00～6:00光照刺激)。實驗過程中每種刺激至少給予2次，每天隨機給予1種刺激，同種刺激不能連續(xù)出現(xiàn)，使小鼠不能預料刺激的發(fā)生，每次應激實驗均在另一個獨立的實驗室進行。連續(xù)給予21 d刺激，造成慢性輕度不可預見性應激刺激抑郁模型。

1.2.2實驗動物分組及給藥方法：空白對照組(10只/籠喂養(yǎng)，不給予任何刺激，正常取食飲水)，按照1.2.1方法建立抑郁癥動物模型，并隨機分為4組，每組10只，即模型組(給予生理鹽水并正常喂養(yǎng))、鹽酸氟西汀組(給予氟西汀20 mg/片)、維丙胺組(給予維丙胺0.1 g/片)、聯(lián)合用藥組(給予氟西汀聯(lián)合維丙胺)，各組動物均在模型建立后，開始灌胃給予相應藥物，每天1次，灌胃量0.2 mL/10 g(根據(jù)人衛(wèi)版《藥理學實驗方法》第三版中按人體表面積折算的等效劑量)，根據(jù)單味藥的臨床用藥方法，連續(xù)給藥30 d。

1.2.3行為學表現(xiàn)評價指標

1.2.3.1 小鼠體質(zhì)量的變化：記錄分2部分，第1部分記錄前21 d建立抑郁癥模型，即空白對照組與模型組(模型組、鹽酸氟西汀組、維丙胺組、聯(lián)合用藥組)的比較分析，第2部分記錄灌胃給藥30 d，每3 d測量體質(zhì)量1次，并對各組動物進行比較分析。

1.2.3.2 糖水偏愛試驗(Sucrose preference test，SPT)：每籠同時放置2個水瓶，第1個24 h，2瓶均裝有質(zhì)量濃度為1%的蔗糖溶液；第2個24 h禁食禁水，隨后每只小鼠籠隨機放置2個水瓶，分別裝1%蔗糖溶液及純水，記錄小鼠在4 h內(nèi)消耗的糖水量，計算第1天、第21天及第50天小鼠的糖水偏愛率。糖水偏愛率(%)=蔗糖水消耗總量/(蔗糖水消耗總量+純水消耗總量)×100%。

1.2.3.3 強迫游泳試驗(Forced swim test，F(xiàn)ST)：將小鼠分別放置于水深14 cm玻璃燒杯中[7](杯高24 cm，直徑13 cm)，游泳2 min后，持續(xù)記錄4 min內(nèi)小鼠累計不動時間。不動時間：指小鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài)，僅有細小肢體運動以保持頭部懸浮在水面。

1.2.3.4 懸尾試驗(Tail suspension test，TST)：參照Steru等[8]建立的方法，使用醫(yī)用膠布將小鼠尾部距尾尖2 cm處固定在懸尾箱(25 cm×25 cm×35 cm)頂部，持續(xù)6 min，記錄后4 min持續(xù)不動累計時間。

1.3 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 動物體質(zhì)量的變化

各組動物體質(zhì)量均有不同程度減輕，第9天，與空白對照組比較，具有顯著性差異(△P<0.05)，第21天具有極顯著性差異(△△P<0.01)；給藥后，各給藥組體質(zhì)量均有增長，第46天，與鹽酸氟西汀組比較，聯(lián)合用藥組具有顯著性差異(#P<0.05)，見表1，表2。

2.2 小鼠糖水總消耗量及糖水偏愛率的比較

第21天，與空白對照組比較，各組小鼠糖水總消耗量及糖水偏愛率均有顯著性差異(△P<0.05)；第50天，與模型組比較，聯(lián)合用藥組糖水總消耗量具有顯著性差異(*P<0.05)，糖水偏愛率具有極顯著性差異(**P<0.01)；與鹽酸氟西汀組比較，聯(lián)合用藥組糖水偏愛率具有顯著性差異(#P<0.05)，空

表1 模型建立期動物體質(zhì)量的變化情況Table 1 The changes condition of the animal weight in model establishment

注：與空白對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

Note：Compared with the control group,△P<0.05，△△P<0.01

表2 給藥期動物體質(zhì)量的變化情況Table 2 The changes condition of the animal weight in administering drug

注：①與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與鹽酸氟西汀組比較，#P<0.05.②第21天為給藥第0天

Note：①Compared with the model group,*P<0.05，**P<0.01；Compared with the Fluoxetine hydrochloride group,#P<0.05.②The 21st day was the 0th day of administration

表3 小鼠糖水總消耗量及糖水偏愛率的比較Table 3 The comparison of total sugar water consumption and preference rate of sugar in

注：①與空白對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01，與鹽酸氟西汀組比較，#P<0.05.②第21天為給藥第0天

Note：①Compared with the control group,△P<0.05，△△P<0.01；Compared with the model group,*P<0.05，**P<0.01，Compared with the Fluoxetine hydrochloride group,#P<0.05.②The 21st day was the 0th day of administration

白對照組糖水總消耗量及糖水偏愛率在給藥期前后自身比較均無顯著性差異(P>0.05)，見表3。

2.3 給藥對小鼠強迫游泳不動時間與懸尾不動時間的比較

給予抑郁癥小鼠藥物治療后，給藥組小鼠強迫游泳不動時間和懸尾不動時間均有減少，與模型組比較，維丙胺組強迫游泳和懸尾不動時間具有顯著性差異(*P<0.05)，聯(lián)合用藥組懸尾不動時間具有極顯著性差異(**P<0.01)，與鹽酸氟西汀組比較，聯(lián)合用藥組懸尾不動時間也具有顯著性差異(#P<0.05)，見表4。

表4 給藥對小鼠強迫游泳與懸尾不動時間的比較Table 4 The comparison of the fixed time thatforced swimming and suspension immobility in

注：與空白對照組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與鹽酸氟西汀組比較，#P<0.05

Note：①Compared with the control group,△P<0.05；Compared with the model group,*P<0.05，**P<0.01；Compared with the Fluoxetine hydrochloride group,#P<0.05

3 討論

各種藥物有不同藥理作用和治療靶點的差異性，研究表明單藥治療抑郁癥的痊愈率僅為20%～30%，約一半病人易復發(fā)，2/3治療無效的病人必須更改治療方案[9-11]。單一抗抑郁藥療程至少持續(xù)6周，換藥后需要3個月，無疑延長了治療時間，故臨床上逐漸采用聯(lián)合兩種或兩種以上不同作用機理的抗抑郁藥物[12]。姚琳和潘麗紅[13]聯(lián)合焦慮藥起效時間縮短了1/4，薛僖峰和姜濤[14]聯(lián)合心境穩(wěn)定劑總有效率提高了30%，多數(shù)文獻綜述聯(lián)合用藥并沒有增加不良反應，綜上所述對抑郁癥聯(lián)合用藥具有必要性和優(yōu)越性。抑郁癥的病因尚不明確，文獻綜述其病因與生物、生理及社會環(huán)境等因素有關(guān)，諸如生物學因素神經(jīng)生化、神經(jīng)內(nèi)分泌改變、神經(jīng)再生等因素有關(guān)。在特有腦區(qū)與平滑肌(腦-平滑肌軸)之間存在一個雙向影響、反饋的通路，通過神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡進行調(diào)節(jié)，腦-平滑肌(Brain-Smooth Mus-cle，B-SM) 軸存在3個靶點：腦、內(nèi)臟平滑肌與血管平滑肌，3靶點與肝臟疏泄藏血點對點關(guān)聯(lián)，腦-平滑肌軸是抑郁癥共病的生物學及發(fā)病學機制等[15]。田進文等[16]認為平滑肌系統(tǒng)是肝貯藏和疏泄血液的生理解剖基礎，提示肝臟血液供應影響平滑肌系統(tǒng)，進而對腦病具有影響，岳廣欣等[17]提出邊緣系統(tǒng)是肝主疏泄的高級中樞，(血管)平滑肌是肝疏泄藏血的效應器，進一步說明肝腦具有同病機制。醫(yī)學概述久病必傷及肝臟，導致肝陰血虧虛，及腦等臟器沒有充足的血液供應，神經(jīng)生化活動不能正常。肝體疏泄和藏血，血上供于腦，血足則腦髓充盈，能夠正常發(fā)揮其精神主宰的功能[18]，提示保護肝臟、改善肝臟造血功能，提高肝體疏泄藏血，促使腦髓營養(yǎng)充盈，能減輕抑郁癥癥狀。維丙胺化學成分單一，劑量易控制，為維生素C衍生物，不良反應輕少，可促進肝細胞再生，改善肝功能，對肝臟具有解毒和保護作用，故本研究結(jié)合肝腦同病機制，考察其對抑郁癥效果。

糖水偏愛率作為評價抑郁癥小鼠快感缺乏的有效客觀指標[19]，研究表明模型建立第21天，模型組小鼠糖水偏愛率下降20%，體質(zhì)量減輕、明顯，與空白對照組比較均具有顯著性差異，表明小鼠抑郁癥模型制造成功。小鼠懸尾試驗和強迫游泳試驗屬于行為絕望模型，利用動物在惡劣的環(huán)境下逃脫無望時出現(xiàn)“行為絕望”的原理對藥物潛在的抗抑郁作用進行評價與篩選。研究發(fā)現(xiàn)多數(shù)抗抑郁藥都可增加小鼠糖水偏愛率，減少小鼠懸尾和強迫游泳的不動時間，而對自發(fā)活動不產(chǎn)生影響[20]。本研究給藥后(第39天)，與模型組比較，維丙胺組(藥物劑量為45.5 mg/kg)體質(zhì)量增長具有顯著性差異，第50天，與模型組比較，維丙胺組糖水總消耗量及糖水偏愛率均具有顯著性差異，提示維丙胺可以增加小鼠體質(zhì)量、小鼠糖水消耗總量及糖水偏愛率，減少小鼠強迫游泳不動時間和懸尾不動時間，具有抗抑郁作用，其與鹽酸氟西汀聯(lián)合用藥，對小鼠糖水消耗總量、糖水偏愛率及減少小鼠強迫游泳不動時間和懸尾不動時間效果更顯著，與模型組比較，具有顯著性差異，綜上所述維丙胺聯(lián)合鹽酸氟西汀在抑郁癥動物模型上具有顯著的抗抑郁作用，為臨床抑郁癥的臨床用藥提供實驗依據(jù)。維丙胺抗郁抑機制可能與其臨床降低肝臟S-GDT，促進肝細胞再生，改善肝臟造血功能的作用，以及B-SM軸3靶點相互調(diào)節(jié)作用有關(guān)，具體的抗抑郁分子機制有待進一步研究探索。