賀志軍 周遠(yuǎn)青 馮影豪 林超群 梁玉全 潘碧燕

1南方醫(yī)科大學(xué)順德醫(yī)院（佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院）檢驗(yàn)科（廣東佛山528308）；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)順德醫(yī)院（佛山市順德區(qū)中醫(yī)院）腫瘤科（廣東佛山 528300）

地中海貧血（thalassemia，簡稱地貧）又稱海洋性貧血，是一組由珠蛋白基因缺失或突變導(dǎo)致肽鏈合成障礙所引起的遺傳性血液病［1］，常見于熱帶和亞熱帶地區(qū)，我國主要以廣東、廣西、海南為高發(fā)地區(qū)［2-3］。重型地貧是一種非常嚴(yán)重的致死性疾病，目前尚無有效的治療方法，但可通過對孕產(chǎn)婦進(jìn)行產(chǎn)前篩查和診斷以防止患兒出生，從而達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的，因此產(chǎn)前篩查與診斷是優(yōu)生手段之一［4-5］。由于地中海貧血有著地域性的差異，國內(nèi)外關(guān)于順德地區(qū)孕產(chǎn)婦人群地貧調(diào)查研究報(bào)道較少見，為完善本地區(qū)孕產(chǎn)婦人群地貧的遺傳學(xué)特點(diǎn)，本研究采用異常血紅蛋白表型、基因類型和血液學(xué)特征相結(jié)合分析的方法，研究本院孕產(chǎn)婦人群地貧發(fā)病率及基因類型，并比較分析各種地貧的血液學(xué)特征，為本院產(chǎn)前遺傳咨詢和優(yōu)生優(yōu)育提供更好的數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2016年1月至2017年12月在本院產(chǎn)科門診參與地貧初篩的孕產(chǎn)婦資料，排除急性感染、慢性失血以及近期服用影響血細(xì)胞參數(shù)藥物等的影響，共14 448例，年齡20～48歲。以平均紅細(xì)胞體積（MCV）＜82 fL、平均紅細(xì)胞血紅蛋白（MCH）＜27 pg和（或）HbA2＜2.5%或HbA2＞3.5%為初篩陽性。以基因診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，將地貧基因檢測結(jié)果陰性的705例孕產(chǎn)婦作為對照組。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定，所有檢查均經(jīng)過本人知情同意。

1.2檢測的方法及結(jié)果判斷

1.2.1血常規(guī)測定采用貝克曼庫爾特LH750全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑，檢測孕產(chǎn)婦的紅細(xì)胞MCV、MCH、MCHC等血細(xì)胞參數(shù)。

1.2.2血紅蛋白電泳測定采用法國Sebia公司生產(chǎn)的Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀及配套血紅蛋白電泳試劑盒對標(biāo)本進(jìn)行HbA2檢測，嚴(yán)格按照廠家提供的說明書進(jìn)行電泳分析。

1.2.3基因檢測及測序采用單管四重Gap-PCR法檢測3種缺失型α地中海貧血基因，包括東南亞型缺失（--SEA），右側(cè)缺失（-α3.7）和左側(cè)缺失（-α4.2）；采用PCR-反向斑點(diǎn)雜交（PCR-RDB）同時(shí)檢測標(biāo)本中常見17種β珠蛋白基因突變位點(diǎn)（CD17、CD41-42、IVS-Ⅰ-1、βE、-28、CD27/28、CD71-72、CD43、-29、IVS-Ⅱ-654、CD31、CD14-15、-30、-32、CAPM、Int、IVS-Ⅰ-5），α、β地中海貧血基因檢測使用由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的檢測試劑盒，相關(guān)檢測嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。若有檢測結(jié)果高度懷疑的標(biāo)本，采用基因測序法進(jìn)行驗(yàn)證，由深圳華大基因有限公司完成。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和分析，各組數(shù)據(jù)計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示。以基因診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，建立ROC曲線，計(jì)算ROC曲線下面積（AUC），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1地中海貧血產(chǎn)前篩查結(jié)果順德地區(qū)14 448例孕產(chǎn)婦人群經(jīng)血常規(guī)和血紅蛋白電泳篩查，初篩陽性2 656例，初篩陽性率為18.38%（2 656/14 448）。經(jīng)地貧基因檢測的例數(shù)為1 159例，所占比例為8.02%（1 159/14 448）。檢出302例單純?chǔ)恋刎毣蛉笔?，?6.06%（302/1 159），檢出143例單純?chǔ)碌刎毣蛲蛔?，?2.34%（143/1 159），9例α、β復(fù)合型地貧，占0.78%（9/1 159），具體情況見表1。

表1 14 448例孕產(chǎn)婦地貧篩查與基因診斷結(jié)果Tab.1 14 448 cases of maternal thalassemia screening and genetic diagnosis results 例

2.2地中海貧血基因檢測結(jié)果本研究經(jīng)地貧基因檢測的例數(shù)為1 159例，確診為地中海貧血的患者有454例，確診率為39.17%（454/1 159）。檢出5種α地貧基因缺失類型，其中東南亞型缺失（--SEA）所占比例最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=335.173，P＜0.01）。共檢出11種β地貧基因突變類型，其中以-28（A→G）和CD41-42（-TCTT）位點(diǎn)的突變所占比例最高，其次為 IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD17（A→T），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。檢出7種α、β復(fù)合型地貧基因類型，α、β以及α、β復(fù)合型地中海貧血具體的基因檢測結(jié)果見表2、3和4。

表2 α地中海貧血基因檢測結(jié)果Tab.2 α thalassemia gene test results

表3 β地中海貧血基因檢測結(jié)果Tab.3 β thalassemia gene test results

表4 α、β復(fù)合型地中海貧血基因檢測結(jié)果Tab.4 α、β Complex thalassemia gene test results 例

2.3 兩組血常規(guī)指標(biāo)比較將地貧基因檢測結(jié)果陽性的454例孕產(chǎn)婦作為觀察組，并將地貧基因檢測結(jié)果陰性的705例孕產(chǎn)婦作為對照組，分別比較兩組對象的MCV、MCH、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、血紅蛋白A2（HbA2）水平，發(fā)現(xiàn)觀察組的MCV、MCH、MCHC水平均比對照組的低，而HbA2水平比對照組的高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表5。

表5 兩組不同類型孕婦血常規(guī)指標(biāo)Tab.5 Blood routine indicators of different types of pregnant women in two groups ±s

表5 兩組不同類型孕婦血常規(guī)指標(biāo)Tab.5 Blood routine indicators of different types of pregnant women in two groups ±s

地貧類型觀察組對照組F值P值例數(shù)454 705 MCV（fL）75.22±9.11 90.12±8.51 799.90＜0.01 MCH（pg）23.64±3.37 29.36±3.18 851.38＜0.01 MCHC（g/L）314.21±7.87 325.38±7.90 553.91＜0.01 HbA2（%）3.37±1.47 2.57±0.46 180.61＜0.01

2.4 ROC曲線分析血常規(guī)指標(biāo)在α地貧的診斷價(jià)值選取302例α地貧基因篩查陽性孕產(chǎn)婦作為觀察組，將地貧基因檢測結(jié)果陰性的705例孕產(chǎn)婦作為對照組，對兩組MCV、MCH、MCHC、HbA2進(jìn)行多項(xiàng)分析，以敏感度為縱坐標(biāo)，以1-特異性為橫坐標(biāo)，建立ROC曲線。MCV、MCH、MCHC、HbA2曲線下面積分別為0.844、0.849、0.836、0.657。MCV、MCH、MCHC、HbA2診斷的靈敏度分別是87.7%、89.6%、80.7%、51.1%，特異度分別是71.9%、74.2%、75.8%、67.5%，見圖1。

圖1MCV、MCH、MCHC、HbA2的ROC曲線Fig.1 ROC curve of MCV、MCH、MCHC、HbA2

3 討論

地中海貧血是一種由于某類珠蛋白肽鏈的合成速率降低導(dǎo)致珠蛋白肽鏈合成不平衡，在臨床上表現(xiàn)為溶血性貧血的血紅蛋白病［6-8］。輕型地貧攜帶者臨床癥狀不明顯或無癥狀，如果不開展地貧篩查，可能導(dǎo)致地貧患兒的出生，對家庭和社會(huì)產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)和精神壓力［9］。廣東省屬于高發(fā)區(qū)之一，因此，進(jìn)行產(chǎn)前地貧篩查和地貧基因檢測在廣東的各個(gè)地區(qū)顯得十分重要［10］。

本研究經(jīng)地貧基因檢測的例數(shù)為1 159例，確診為地中海貧血的有454例，確診率為39.17%，本研究結(jié)果顯示：單純?chǔ)恋刎?、單純?chǔ)碌刎氁约唉?、β?fù)合型地貧確診率分別為26.06%、12.34%、0.78%。本地區(qū)以α地貧基因?yàn)橹鳎恋刎毠矙z出5種基因缺失類型，其中東南亞型缺失（--SEA）構(gòu)成比為82.45%，所占比例最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=335.173，P＜0.01），與國內(nèi)其他地區(qū)α地貧基因缺失類型一致［11-13］。單純?chǔ)碌刎毠矙z出11種基因突變類型，其中-28（A→G）和 CD41-42（-TCTT）位點(diǎn)突變的構(gòu)成比分別為29.37%、26.57%，所占比例最高，其次為IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD17（A→T），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。分別檢出IVS-Ⅰ-1（G→A，G→T）位點(diǎn)突變和CAPM位點(diǎn)突變的稀有型別各1例，構(gòu)成比為0.70%。而成明等［14］報(bào)道的廈門地區(qū)β地貧基因以IVS-Ⅱ-654（C→T）位點(diǎn)突變所占比例最高，這說明不同地區(qū)不同人群β地貧基因會(huì)因人群種屬不盡相同。α、β復(fù)合型地貧共檢出9例，發(fā)現(xiàn)7種地貧基因類型，基本都屬于稀有型別。

本研究分別比較了兩組對象的MCV、MCH、MCHC、HbA2水平，發(fā)現(xiàn)觀察組的HbA2水平比對照組的高，原因可能是觀察組以HbA2＜2.5%或HbA2＞3.5%為初篩陽性，而對照組的HbA2大部分在2.5%～3.5%范圍內(nèi)的緣故。

本研究為完善本地區(qū)孕產(chǎn)婦人群地貧的遺傳學(xué)特點(diǎn)，分析了順德地區(qū)孕產(chǎn)婦人群地貧的基因類型、分布特點(diǎn)以及血液學(xué)特征，對本地區(qū)地中海貧血的防治有重要意義。為避免中重型地貧患兒的出生，夫婦一方確診為地貧攜帶者，即使其配偶血液學(xué)指標(biāo)或HbA2篩查陰性，仍應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行地貧基因診斷。本研究也有不足之處，筆者只分析了孕產(chǎn)婦這一特殊人群，而沒有分析其丈夫的地貧基因攜帶情況，同時(shí)有部分初篩陽性卻未做地貧基因檢測的孕產(chǎn)婦，這樣會(huì)導(dǎo)致地貧基因確診率降低。有少部分初篩陰性卻進(jìn)行了地貧基因檢測的人群檢測出地貧基因，因?yàn)樗齻冞M(jìn)行了產(chǎn)前遺傳咨詢，要求進(jìn)行地貧基因檢測，因此對高度懷疑地貧或有家族史的人群應(yīng)及時(shí)進(jìn)行地貧基因檢測。本研究結(jié)果有助于更深入了解順德地區(qū)孕產(chǎn)婦人群的地中海貧血基因變異類型，對臨床診治、產(chǎn)前診斷、遺傳咨詢、地貧防治宣傳，防止重度地貧患兒出生，為臨床防治、實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育具有一定意義。