李曉梅

摘? 要：目前雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）QX基因型是我國(guó)主要流行的一種IBV。為充分了解該基因型毒株對(duì)宿主相關(guān)器官的病理?yè)p傷情況，特將IBV-QX 株人工感染發(fā)病，在臨床明顯期（9d）采集試驗(yàn)雞的心、肝、脾、腦、胰、腺胃、十二指腸、法氏囊和胸腺進(jìn)行病理學(xué)分析。結(jié)果顯示：發(fā)病雞臨床癥狀明顯，出現(xiàn)典型的“花斑腎”;病理學(xué)分析得出，發(fā)病雞心肌細(xì)胞顆粒變性;肝細(xì)胞輕度脂肪變性;脾臟少量淋巴細(xì)胞壞死，并且有少量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn);腦膜充血;胰腺細(xì)胞顆粒變性、壞死;腺胃上皮細(xì)胞變性壞死，固有層炎性細(xì)胞浸潤(rùn);十二指腸未見明顯病變;法氏囊大部分淋巴濾泡呈現(xiàn)空泡化，殘留濾泡淋巴細(xì)胞極度減少;胸腺皮質(zhì)部壞死淋巴細(xì)胞核濃縮深染。本試驗(yàn)簡(jiǎn)明地闡述了IBV-QX 株對(duì)傳統(tǒng)上的非靶器官的病理?yè)p傷，有助于進(jìn)一步揭示IBV的致病機(jī)制。

關(guān)鍵詞：雞傳染性支氣管炎病毒;QX基因型;病理變化

中圖分類號(hào)：S858.315.3? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2019）07-0009-04

雞傳染性支氣管炎（Avian Infectious Bronchitis，AIB）是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一種高度接觸性傳染病。IBV感染后的雞主要出現(xiàn)呼吸道、腎臟和生殖道等部位的病理變化，致使感染發(fā)病雞飼料報(bào)酬比降低、產(chǎn)蛋率下降而造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。IBV對(duì)所有品種、各年齡段和不同性別的雞均有易感性，特別是4周齡前的雛雞最為易感發(fā)病[2]。陳良珂等人對(duì)我國(guó)17個(gè)省市的390株IBV研究發(fā)現(xiàn)，QX基因型占比55%，臨床分型腎型占比82%。由此可知，我國(guó)主要流行的IBV為QX基因型，其主要造成腎臟部位病變[3]。1962年美國(guó)學(xué)者首次系統(tǒng)地對(duì)腎型IBV進(jìn)行了描述[4]，隨后世界各地陸續(xù)報(bào)道腎臟病變的分離株;1995年我國(guó)山東和江蘇兩省報(bào)道了臨床表現(xiàn)型為生殖型的病例[5]，被感染預(yù)備母雞或產(chǎn)蛋母雞生殖道出現(xiàn)病變，造成產(chǎn)蛋率下降、產(chǎn)畸形蛋或軟殼蛋，甚至出現(xiàn)卵黃性腹膜炎，未表現(xiàn)明顯臨床癥狀的發(fā)病雞停止產(chǎn)蛋，俗稱“假母雞”。IBV屬單股正鏈含包膜的RNA病毒，在復(fù)制過(guò)程中很容易發(fā)生基因突變，此外，IBV轉(zhuǎn)錄過(guò)程不連續(xù)的特點(diǎn)使其在復(fù)制時(shí)更容易出現(xiàn)較高頻率的基因插入、基因缺失和基因重組[6，7]。研究表明，IBV的S蛋白決定宿主選擇和組織嗜性及血清型[8]。但有學(xué)者將IBV的動(dòng)態(tài)分布與病理變化聯(lián)系起來(lái)，發(fā)現(xiàn)各基因型的IBV在器官中的病毒載量與病理?yè)p傷存在一定的相關(guān)性[9]?，F(xiàn)已明確IBV可對(duì)宿主的呼吸道和腎臟等主要靶器官造成明顯的病理?yè)p傷，但很少報(bào)道該病毒對(duì)其它器官組織的損傷情況[10，11]。為此，本試驗(yàn)就人工感染IBV后的臨床癥狀明顯期采集發(fā)病雞的相關(guān)組織制作病理切片，以探究IBV對(duì)宿主相關(guān)器官的損傷情況，進(jìn)一步為IBV的致病機(jī)理研究提供素材。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

1.1.1? 病毒株? IBV-QX毒株由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所山東省禽病診斷與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。

1.1.2? 試驗(yàn)動(dòng)物? 9日齡SPF雞胚購(gòu)自山東昊泰實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，用于病毒復(fù)蘇。8日齡SPF雛雞，雌雄不限，購(gòu)自濟(jì)南斯派福瑞禽業(yè)科技有限公司。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? IBV-QX株的EID50測(cè)定? 首先，將IBV-QX株用9日齡雞胚連傳3代以復(fù)壯病毒;然后，取45枚9日齡SPF雞胚，用含50000U/ml丁胺卡那的PBS對(duì)收集的雞胚尿囊液進(jìn)行10倍梯度稀釋，每個(gè)梯度對(duì)應(yīng)5枚雞胚，尿囊腔接種0.1ml/胚，共設(shè)置8個(gè)梯度;對(duì)照組接入等劑量的滅菌PBS。接毒后，早晚各照胚1次，棄去24h內(nèi)死胚，24h后死胚置于4℃保存，144h后統(tǒng)一收胚，按照相關(guān)公式計(jì)算出該分離株的EID50，并觀察雞胚發(fā)育情況。

1.2.2? 人工感染發(fā)病與樣品采集? 50只8日齡SPF雛雞分養(yǎng)在2個(gè)動(dòng)物房的隔離器內(nèi)，試驗(yàn)組和空白對(duì)照組各25只。試驗(yàn)組雞接毒劑量為0.1ml（滴鼻，病毒滴度約為1.5×103 EID50/ml），空白對(duì)照組用等量滅菌PBS處理。兩組雞均在攻毒后9d隨機(jī)取5只剖檢，觀察組織器官病變情況并采集心、肝、脾、腦、胰、腺胃、十二指腸、法氏囊和胸腺，用4%中性福爾馬林溶液固定后制作病理組織切片。15d時(shí)統(tǒng)一處理余下試驗(yàn)雞。

2? 結(jié)果與分析

2.1? IBV-QX株的EID50測(cè)定與胚胎發(fā)育情況? 通過(guò)將IBV-QX株接種雞胚，測(cè)定其EID50，該過(guò)程發(fā)現(xiàn)雞胚發(fā)育明顯受到病毒抑制，出現(xiàn)死胚、侏儒胚等現(xiàn)象。144h后統(tǒng)一收胚，經(jīng)相關(guān)公式計(jì)算得出IBV-QX株半數(shù)感染量為1.0×106.25EID50/0.1ml。圖1展示的是雞胚接毒144h后空白對(duì)照組與感染病毒組的雞胚發(fā)育情況。

2.2? 發(fā)病雞的臨床癥狀與剖檢變化? 人工感染IBV-QX株發(fā)病，試驗(yàn)組發(fā)病雞出現(xiàn)IBV感染后的典型臨床癥狀，羽毛蓬亂，精神狀態(tài)不佳（圖2-A）;剖檢時(shí)可見腹腔有大量泡沫性積液（圖2-B）;腎臟腫大充血，呈現(xiàn)典型“花斑腎”（圖2-C）;病死雞的腎臟病變嚴(yán)重，壞死（圖2-D）。試驗(yàn)過(guò)程中攻毒組在7d時(shí)死亡1只，8d時(shí)死亡3只，10d時(shí)死亡1只，對(duì)照組無(wú)上述臨床癥狀，也無(wú)死亡。

2.3? 相關(guān)器官病理變化? 采集臨床癥狀明顯期（9d）試驗(yàn)雞的心、肝、脾、胰、十二指腸、腺胃、腦、法氏囊制作病理切片，在200倍電鏡下觀察。結(jié)果顯示，心臟血管充血，心肌細(xì)胞顆粒變性;肝細(xì)胞輕度脂肪變性;脾臟少量淋巴細(xì)胞壞死，并且有少量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn);腦膜充血;胰腺細(xì)胞顆粒變性、壞死;腺胃上皮細(xì)胞變性壞死，固有層炎性細(xì)胞浸潤(rùn);十二指腸未見明顯病變;法氏囊大部分淋巴濾泡呈現(xiàn)空泡化，殘留濾泡淋巴細(xì)胞極度減少;胸腺皮質(zhì)部壞死，淋巴細(xì)胞核濃縮深染。而對(duì)照組各器官無(wú)明顯病理變化。

[10]? BENYEDA Z，SZEREDI L，MATO T，et al. Comparative histopathology and immunohistochemistry of QX-like， Massachusetts and 793/B serotypes of infectious bronchitis virus infection in chickens[J].J Comp Pathol， 2010，143（4）：276-283.

[11]? Z B，T M，T S，et al.Comparison of the pathogenicity of QX-like，M41 bronchitis strains from different pathological conditions[J]. Avian pathology ： journal of the W.V.P.A， 2009， 38（6）：449-456.

[12]? JAKHESARA S J，NATH B，PAL J K，et al. Emergence of a genotype I variant of avian infectious bronchitis virus from Northern part of India[J].Acta Trop， 2018， 183：57-60.

[13]? ZHAO F， ZOU N， WANG F， et al. Analysis of a QX-like avian infectious bronchitis virus genome identified recombination in the region containing the ORF 5a，ORF 5b，and nucleocapsid protein gene sequences[J].Virus Genes，2013， 46（3）：454-464.

[14]? 朱國(guó)強(qiáng)，王永坤，孫龍生，等.腺胃病變型雞傳染性支氣管炎毒株H_（95）的研究[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），1996，17（4）： 55-59.

[15]? 王玉東，王永玲，張子春，等.雞腺胃型傳染性支氣管炎病毒（QX IBV）的分離和鑒定[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，1998，（01）：3-5.

[16]? 楊麗媛.IBV山西分離株人工感染雛雞的臨床病理學(xué)研究及病毒在體內(nèi)分布的檢測(cè)[D].太原：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

Abstract：At present，Avian Infectious Bronchitis Virus （IBV） QX genotype is one of the most epidemic IBV in China. In order to understand the pathological damage of this genotypic strain to the related organs of the host，IBV-QX strain was artificially infected.The heart，liver，spleen，brain，pancreas，proventriculus， duodenum，bursa of Fabricius and thymus of the chickens were collected for pathological analysis during the clinical obvious period （9 dpi）.The results showed that the clinical symptoms were obvious and typical "spotted kidney"appeared in the chickens.Pathological analysis showed that the granulosa degeneration of cardiac muscle cells was observed.Mild steatosis of liver cells.There was a small amount of lymphocytic necrosis in the spleen and a small amount of xenotropic infiltration.Meningeal congestion.Granulosa degeneration and necrosis of pancreatic cells.The epithelial cells of proventriculus were degeneration and necrosis，and the inflammatory cells of lamina propria were infiltrated.No obvious lesion was observed in duodenum.Most of the follicles of bursa of Fabricius showed vacuolation，and the lymphocytes of residual follicles decreased extremely.This was a hyperchromatic concentration of necrotic lymphoid nuclei in the thymic cortex.This study briefly described the pathological damage of IBV-QX strain on traditional non-target organs，which was helpful to further reveal the pathogenesis of IBV.

Key Words： Avian Infectious Bronchitis Virus; QX genotype; Pathological changes□