曾華蘭，何 煉，葉鵬盛，蔣秋平，華麗霞，張 敏，王明娟，何曉敏

(四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物育種栽培研究所，成都 青白江 610300)

大豆是四川省的主要農(nóng)作物，常年種植面積在27萬hm2以上，居國內(nèi)第6位。大豆花葉病毒病是影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)的重要病害，造成的產(chǎn)量損失在15%～20%，嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)。培育和應(yīng)用抗病品種是防治大豆病毒病最為經(jīng)濟(jì)有效的方法之一，品種的抗病性評價是選育抗病品種不可缺少的手段，育種者可根據(jù)抗性鑒定評價結(jié)果，有針對性地開展大豆抗病性篩選，以達(dá)到育出抗病品種的目的。因此，研制大豆花葉病毒病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程，將對指導(dǎo)和促進(jìn)四川省大豆抗病品種選育和大豆生產(chǎn)發(fā)展，保障大豆產(chǎn)量質(zhì)量和安全性均具有重要意義。

1 規(guī)程的適用范圍

研制的四川省大豆花葉病毒病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程，規(guī)定了大豆抗病毒病鑒定方法和抗病性評價標(biāo)準(zhǔn)，適用于大豆育種、生產(chǎn)和植保單位對大豆品種、材料的抗病毒病抗性鑒定和抗病評價。

2 規(guī)范性引用文件

包括《GB 1352-2009 大豆》《GB 5084-2005 農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》《GB/T 8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則》《NY/T 496 肥料合理使用準(zhǔn)則通則》《NY/T 1276 農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則》《NY/T 5335-2006 無公害食品 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量調(diào)查規(guī)范》等。

3 鑒定田塊及鑒定網(wǎng)室

大豆品種病毒病抗性鑒定評價在人工接種鑒定網(wǎng)室中進(jìn)行。人工接種鑒定網(wǎng)室建立在有利于病毒病發(fā)生的地區(qū)，正常年份感病對照品種的病情指數(shù)能達(dá)到50以上；地塊要求地勢平坦，土壤以沙壤土為宜。試驗地土壤應(yīng)符合NY/T 5335要求。

4 前期準(zhǔn)備

4.1 供試毒源

供鑒定試驗的病毒病毒源，選擇我國大豆生產(chǎn)的主要流行株系。供試毒源應(yīng)來自于四川大面積大豆生產(chǎn)品種上花葉病毒病典型病樣，在感病寄主上繁殖鑒定，篩選出呈明顯花葉癥狀的病樣，采用摩擦接種法接種到感病品種上進(jìn)行單斑分離，獲得純化分離物，將純化的大豆花葉病毒陽性分離物分別在感病品種上繁殖后，冷凍干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

4.2 毒源擴(kuò)繁

在防蟲網(wǎng)室中，將大豆病毒株系分別在感病品種上進(jìn)行擴(kuò)繁。定期噴藥殺滅蚜蟲，以保證試驗毒源的純度。病葉裝入無菌塑料袋置低溫冰箱保存，或隔3個月接種繁殖1次。

4.3 接種毒源制備

從發(fā)病植株取新鮮的病葉，將新鮮病葉與磷酸緩沖液(0.1M，pH 7.0)按質(zhì)量比1∶5的比例置于研缽中，加金剛砂(600目)少許，將病葉研磨成勻漿備用。

4.4 對照品種

鑒定評價試驗設(shè)置一個感病對照品種。感病對照品種要求高度感病，即正常年份的病毒病病情指數(shù)能達(dá)到50.0左右，且感病性穩(wěn)定。

5 鑒定評價方法

5.1 供試品種的種植要求

供試品種按正常播種季節(jié)播種，大豆種子應(yīng)符合GB1352-2009要求。每個品種采取隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)3次，2行區(qū)，行長2.0m，每小區(qū)種植30株以上。

5.2 接種時間

大豆播種出苗后，在植株第一對真葉完全展開時進(jìn)行第1次接種，在第1片復(fù)葉展開時重復(fù)接種1次。

5.3 接種方法

病毒株系需要分別獨立接種，且不同病毒株系接種的植株需要采用防蟲網(wǎng)分隔。

采用摩擦接種法。用接種刷蘸取毒液，采用人工摩擦接種方法接種，接種后用清水沖洗葉片表面，將殘留物沖凈。

5.4 田間管理

在人工鑒定防蟲網(wǎng)室中，試驗采取凈作方式，肥水管理按照常規(guī)進(jìn)行，試驗地肥料使用應(yīng)符合NY/T 496、DB 51/ 338的要求，灌溉水應(yīng)符合GB 5084要求。在大豆苗期和成株期不防治病毒病，可用選擇性除草劑防除田間雜草，但需要施用殺蟲劑、殺螨劑防治蚜蟲、葉螨等害蟲。病蟲防控藥劑應(yīng)符合GB/T 8321、DB51/337的要求。

表1 花葉型病情級別劃分標(biāo)準(zhǔn)

表2 壞死型病情級別劃分標(biāo)準(zhǔn)

5.5 調(diào)查時間及方法

在第2次接種后20～30d，病毒病癥狀穩(wěn)定時調(diào)查發(fā)病情況，逐株記載供試品種植株的病毒病癥狀類型、病級。每品種每重復(fù)至少調(diào)查25株。

5.6 病級劃分標(biāo)準(zhǔn)

如果在同一植株上同時出現(xiàn)花葉、壞死2種癥狀，病級則取級別高者。

5.7 抗性型劃分標(biāo)準(zhǔn)

5.7.1 計算方法 根據(jù)各品種的發(fā)病程度級別，計算發(fā)病株率、病情指數(shù)。

發(fā)病株率=(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))×100%

病情指數(shù)(DI)=Σ(各級病株數(shù)×相應(yīng)病級)/(調(diào)查總株數(shù)×最高病級)×100

5.7.2 抗病性評價 根據(jù)各品種的相對病情指數(shù)，按照下表標(biāo)準(zhǔn)評價各品種的抗病性。

表3 抗病性評價標(biāo)準(zhǔn)