鄭燕菲 覃小靜 蔡杰慧

摘 要 對(duì)單性木蘭葉中總黃酮的含量及其提取條件進(jìn)行研究。結(jié)果表明，采用硝酸鋁顯色法建立了總黃酮的定量分析方法;采用L9（34）正交試驗(yàn)表優(yōu)化提取條件，在最佳提取條件乙醇濃度60%、提取溫度80 ℃、料液比1∶25、提取時(shí)間150 min下，單性木蘭葉總黃酮得率為2.76%。試驗(yàn)結(jié)果對(duì)瀕危植物單性木蘭成分的研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)，具有重要的指導(dǎo)作用。

關(guān)鍵詞 單性木蘭;總黃酮;含量測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.14.065

單性木蘭，為木蘭科單性木蘭屬，是我國(guó)特有的珍稀瀕危植物，僅分布于我國(guó)西南地區(qū)，在廣西壯族自治區(qū)已有人工種植林。單性木蘭葉化學(xué)成分的研究只有揮發(fā)油、多糖和多酚等，而總黃酮的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。若能把瀕危植物單性木蘭葉作為原料，提取獲得天然的黃酮類(lèi)化合物，開(kāi)發(fā)成為天然的抗氧化劑和具有保健功能的食品添加劑，對(duì)提高該植物的綜合利用價(jià)值具有重大意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

原料：新鮮單性木蘭葉摘自廣西壯族自治區(qū)南寧市武鳴區(qū)，經(jīng)廣西大學(xué)林學(xué)院賴家業(yè)教授鑒定為木蘭科單性木蘭屬植物單性木蘭。

試劑：蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品;石油醚、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉以及硝酸鋁等試劑均為分析純;試驗(yàn)用水為蒸餾水。

儀器：DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，RE-3000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，AR224CN型電子天平，722型分光光度計(jì)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

向5支10 mL容量瓶中準(zhǔn)確移入0.131 0 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL，分別加入0.72 mol·L-1 NaNO2溶液0.3 mL，搖勻后放置6 min，再分別加入0.47 mol·L-1 Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻后放置6 min，加入1 mol·L-1 NaOH溶液4.0 mL搖勻，用蒸餾水定容至刻度，搖勻并靜置15 min，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 單性木蘭葉總黃酮提取液的制備

將新鮮單性木蘭葉洗凈、干燥、粉碎，取適量粉末于圓底燒瓶中，加入料液比為1∶4 g·mL-1的石油醚，于70 ℃回流240 min脫色除脂，揮去溶劑、烘干得單性木蘭葉脫脂原料;稱(chēng)取一定量的單性木蘭葉脫脂原料置于250 mL圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入一定料液比的不同溶劑，在不同溫度條件下加熱回流一定時(shí)間后，離心，過(guò)濾，上清液即為單性木蘭葉總黃酮提取液。

1.2.3 單性木蘭葉總黃酮的含量測(cè)定

分別移取不同的單性木蘭葉總黃酮提取液1.0 mL，按照1.2.1的操作測(cè)定吸光值，計(jì)算單性木蘭葉總黃酮的得率。

1.2.4 單性木蘭葉總黃酮工藝優(yōu)化

考察乙醇濃度、料液比、提取溫度和提取時(shí)間4個(gè)因素對(duì)單性木蘭葉總黃酮得率的影響，計(jì)算總黃酮得率。準(zhǔn)確稱(chēng)取單性木蘭葉脫脂原料5.0 g，分別以乙醇濃度（50%、60%、70%、80%、95%）、液料液比（1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40）、提取溫度（50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃）以及提取時(shí)間（60 min、90 min、120 min、150 min、180 min）為影響因素進(jìn)行試驗(yàn)。

利用單因素試驗(yàn)的結(jié)果，選擇4個(gè)提取因素（A：乙醇濃度;B：料液比;C：溫度;D：時(shí)間）進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，并進(jìn)行方差分析，確定單性木蘭葉總黃酮提取的最佳條件。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量方法的確定

以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，吸光值Y為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性擬合，結(jié)果為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液在質(zhì)量濃度0.013 1～0.065 5 mg·mL-1范圍內(nèi)與吸光值呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=13.847X+0.003 2，R2=0.999 8。經(jīng)精密度、穩(wěn)定性及加標(biāo)回收試驗(yàn)。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

單因素試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。單性木蘭葉總黃酮得率隨著乙醇濃度的增大呈先升后降的趨勢(shì)，乙醇濃度為70%時(shí)達(dá)到最大。黃酮類(lèi)物質(zhì)的溶解性與溶劑極性有關(guān)，當(dāng)乙醇與水的比例適宜時(shí)，總黃酮的溶解度最大，故選70%的乙醇作為最佳溶劑?？傸S酮的得率隨著料液比的增大而增大，溶劑的量越大，細(xì)胞里外濃度差越大，黃酮類(lèi)物質(zhì)越容易被提取。當(dāng)料液比為1∶30時(shí)得率達(dá)到最大，之后得率不再變化。所以，從節(jié)約成本、試驗(yàn)操作方面考慮，選擇料液比為1∶25為最佳提取液固比。單性木蘭葉中總黃酮的得率隨著溫度的升高而增大，當(dāng)溫度達(dá)到70 ℃時(shí)得率達(dá)到最大值，70 ℃后得率逐漸降低。這是因?yàn)闇囟冗^(guò)低黃酮類(lèi)物質(zhì)不易被溶出，而溫度過(guò)高黃酮類(lèi)物質(zhì)會(huì)發(fā)生氧化、縮合等化學(xué)反應(yīng)，故選擇70 ℃作為提取的最佳溫度。總黃酮的得率隨著時(shí)間的增大而增大，提取時(shí)間為120 min時(shí)得率達(dá)到最大，超過(guò)120 min后得率保持不變，故選擇120 min作為最佳的提取時(shí)間。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

L9（34）正交試驗(yàn)安排與結(jié)果，如表1所示。

由表1可知，影響單性木蘭葉中總黃酮得率的4個(gè)因素的主次順序是：A>C>B>D。單性木蘭葉中，總黃酮的最佳提取條件為A1C3B2D3，即乙醇濃度60%、提取溫度80 ℃、料液比1∶25、提取時(shí)間150 min。在此最佳條件下進(jìn)行驗(yàn)證，平行提取5次，提取率分別為2.74%、2.76%、2.76%、2.74%和2.78%，平均值為2.76%，且RSD值為0.61%，說(shuō)明正交試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3 結(jié)論與討論

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用硝酸鋁顯色法建立總黃酮的定量分析方法，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=13.847X+0.003 2;采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法優(yōu)化提取條件，得單性木蘭葉總黃酮最佳提取條件為乙醇濃度60%、提取溫度80 ℃、料液比1∶25、提取時(shí)間150 min。在此條件下，單性木蘭葉總黃酮得率為2.76%。本試驗(yàn)首次對(duì)單性木蘭葉總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定及其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，具有一定的前瞻性，為瀕危植物單性木蘭的進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

（責(zé)任編輯：劉昀）