王桂峰，王 云

(1. 天津市津南區(qū)咸水沽醫(yī)院，天津 300350； 2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617)

胃復(fù)春片是由紅參、香茶菜、麩炒枳殼3味中藥制成的市售中藥復(fù)方制劑，屬于國家中藥保護(hù)品種，具有健脾益氣、活血解毒的作用，臨床用于慢性萎縮性胃炎、胃癌前病變、慢性淺表性胃炎、胃及十二指腸潰瘍等[1-5]。本試驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)[6-8]與《中國藥典》中對于單味藥材的標(biāo)準(zhǔn)，分別確定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷和新橙皮苷5種分成作為胃復(fù)春片的指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法，首次建立了人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷和新橙皮苷同時(shí)測定的方法。結(jié)果表明，該方法測定簡便、快速、重復(fù)性好，可用于胃復(fù)春片的質(zhì)量控制，為胃復(fù)春片后續(xù)質(zhì)量提高提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 安捷倫1290高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；XSE105 電子天平，瑞士梅特勒公司； KQ3000超聲儀，昆山超聲儀器有限公司。

1.2試藥 人參皂苷Rg1對照品(批號(hào)110703-201530，質(zhì)量分?jǐn)?shù)91.7%)、人參皂苷Re對照品(批號(hào)110754-201525，質(zhì)量分?jǐn)?shù)92.3%)、人參皂苷Rb1對照品(批號(hào)110704-201424，質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.7%)、柚皮苷對照品(批號(hào)110722-201613，質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.3%)、新橙皮苷對照品(批號(hào)111857-201102，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.6%)均由中國食品藥品檢定研究院提供； 3批胃復(fù)春片(批號(hào)161126，170505，170906，杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司)。乙腈為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為安捷倫XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈(A相)-0.1%磷酸水溶液(B相)；梯度洗脫見表1；流速 0.9 ml/min；柱溫 45 ℃；分段變波長測定：0～30.0 min為203 nm，30.0～50.0 min為283 nm，50.0～60.0 min為203 nm。進(jìn)樣量為10 μl。

表1 梯度洗脫程序

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷、新橙皮苷適量，加甲醇溶解并制備成含人參皂苷Rg160 μg/ml、人參皂苷Re 40 μg/ml、人參皂苷Rb180 μg/ml、柚皮苷 300 μg/ml、新橙皮苷200 μg/ml的混合對照品儲(chǔ)備液，備用。再精密吸取混合對照品儲(chǔ)備液適量置50 ml量瓶中，甲醇稀釋至刻度，得含人參皂苷Rg112 μg/ml、人參皂苷Re 8 μg/ml、人參皂苷Rb116 μg/ml、柚皮苷 60 μg/ml、新橙皮苷40 μg/ml的混合對照品溶液，備用。

2.2.2供試品溶液制備 取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置 2 500 ml燒杯中，加甲醇2 000 ml，超聲處理(功率 300 W，頻率50 kHz) 1 h，放冷，加甲醇稀釋至2 500 ml，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性對照溶液制備 按胃復(fù)春片處方比例和工藝，分別制備缺少人參和枳殼藥材的陰性對照樣品；并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備各陰性對照溶液。

2.3專屬性試驗(yàn) 移取上述“2.2”項(xiàng)下的各溶液適量，依法進(jìn)樣測定，供試品溶液中測定成分人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷、新橙皮苷分離度均符要求，各陰性樣品溶液在所測成分相應(yīng)的位置處未見色譜峰，說明陰性樣品溶液對測定沒有干擾。見圖1。

2.4線性試驗(yàn) 精密吸取按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備的混合對照品儲(chǔ)備液0.1、0.5、1、1.5、2.0、3.0、4.0和8.0 ml，分別置 20 ml量瓶中，以甲醇定容，搖勻，即得系列質(zhì)量濃度的混合對照品溶液。分別吸取上述系列混合對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值(Y)對質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，見表2。

2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷、新橙皮苷峰面積的RSD值分別為1.5%、1.3%、1.7%、0.5%和0.7%，均小于2.0%，表明精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批胃復(fù)春片(批號(hào)161126)6 份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果顯示，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷、新橙皮苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.954、1.188、3.559、8.957和5.984 mg/g，RSD 分別為0.8%、0.7%、0.7%、0.9%和0.5%，均小于1.0%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)161126)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12、16和18 h 進(jìn)樣測定，結(jié)果顯示人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷、新橙皮苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為1.3%、1.1%、1.4%、1.0%和1.5%，表明供試品溶液在18 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(批號(hào)為161126)(人參皂苷Rg1含量2.0 mg/g、人參皂苷Re含量1.2 mg/g、人參皂苷Rb1含量3.6 mg/g、柚皮苷含量9.0 mg/g、新橙皮苷含量6.0 mg/g)9份，每份約1.0 g，精密稱定，分成3組，每組分別加入0.8、1.0和1.2 ml的對照品溶液(人參皂苷Rg1含量1.995 mg/ml、人參皂苷Re含量1.191 mg/ml、人參皂苷Rb1含量3.593 mg/ml、柚皮苷含量8.996 mg/ml、新橙皮苷含量6.011 mg/ml)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷和新橙皮苷的平均回收率分別為99.88%、100.10%、100.2%、100.09%和99.75%，RSD分別為0.67%、0.70%、0.59%、0.20%和0.65%。見表3-7。

表3 人參皂苷Rg1回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表4 人參皂苷Re回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9樣品測定 對購買的3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、柚皮苷和新橙皮苷的量，結(jié)果見表8。

表5 人參皂苷Rb1回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表6 柚皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表7 新橙皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表8 樣品中5種成分的含量

3 討論

試驗(yàn)首先確定了胃復(fù)春片中的指標(biāo)成分，由于香茶菜藥材中的指標(biāo)成分沒有相關(guān)的對照品，所以只對人參與麩炒枳殼中的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行研究，在后續(xù)的研究中將加入香茶菜指標(biāo)成分的研究。其次，對于供試品的制備進(jìn)行了考查，對超聲時(shí)間和溶劑進(jìn)行了篩選。最后，參考《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了方法開發(fā)，在原有標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了流動(dòng)相與色譜柱的篩選。該方法簡便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于胃復(fù)春片的質(zhì)量控制，為胃復(fù)春片后續(xù)質(zhì)量提高提供參考。