盧元全

【摘 ?要】目的 ：探討環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）在肺結(jié)核患者痰標(biāo)本中的應(yīng)用效果。方法 ：選取2018年2月-2018年11月本院接收的50份肺結(jié)核且抗結(jié)核治療涂片陽(yáng)性患者痰標(biāo)本、50份涂片陰性患者痰標(biāo)本，每份痰標(biāo)本同時(shí)利用LAMP法檢查檢核分枝桿菌復(fù)合群核酸、培養(yǎng)羅氏固體（L-J），分別對(duì)L-J培養(yǎng)及LAMP法陽(yáng)性率計(jì)算。結(jié)果： 50份痰涂片抗酸染色陽(yáng)性標(biāo)本中，LAMP檢測(cè)陽(yáng)性50份，L-J培養(yǎng)陽(yáng)性42份，檢出率分別是100%和84.00%，差異顯著（P<0.05）;50份痰涂片抗酸染色陰性標(biāo)本中，LAMP法與L-J培養(yǎng)陽(yáng)性分別有15例和8例，相比于痰涂片陰性標(biāo)本，LAMP陽(yáng)性率較L-J培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論： 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在肺結(jié)核痰標(biāo)本診斷中應(yīng)用效果顯著，而且該方法具有操作簡(jiǎn)單、方便等特點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】肺結(jié)核;環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）;抗酸染色

【中圖分類號(hào)】R446.5 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ? 【文章編號(hào)】1672-3783（2019）12-0108-01

結(jié)核病是常見慢性傳染病疾病之一，該病主要是因?yàn)榻Y(jié)核分枝桿菌造成的，是三大傳染疾病之一。據(jù)有關(guān)資料顯示[1]，2015年全球大約有1049萬(wàn)新發(fā)結(jié)核疾病，其中140萬(wàn)左右死于結(jié)核病。早期研究顯示，活動(dòng)性結(jié)核病在結(jié)核病傳播控制中具有重要作用。本次實(shí)驗(yàn)針對(duì)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在肺結(jié)核患者痰標(biāo)本中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析，以下是具體報(bào)告。

1 研究資料與方法

1.1 研究資料

選取2018年2月-2018年11月本院接收的50份肺結(jié)核且抗結(jié)核治療涂片陽(yáng)性患者痰標(biāo)本、50份涂片陰性患者痰標(biāo)本，其中，60例男性，40例女性;年齡18歲-82歲，均值（46.51±3.46）歲。

1.2 方法

恒溫?zé)晒夂怂釘U(kuò)增儀，型號(hào)LF-160;Loopam核酸快速提取試劑盒、Looamp結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑盒。

方法：

1.2.1 痰結(jié)核分枝桿菌鏡檢與涂片

通過(guò)直接圖片抗酸染色顯微鏡檢查，根據(jù)《中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃?痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證》對(duì)痰標(biāo)本收集，并涂片鏡檢，每例送合格痰標(biāo)本1份。

1.2.2 L-J結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)

取4倍體積的4%NaOH溶于鏡檢，并通過(guò)LAMP法對(duì)其他合格痰標(biāo)本檢測(cè)，均勻搖晃、震蕩，并放置15分鐘，充分液化痰標(biāo)本。利用一次性無(wú)菌吸管吸取2-3滴，并在2管酸性培養(yǎng)基斜面上、中、下位置滴注，蓋緊蓋子，后將標(biāo)本置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，接種4周后，平均7日進(jìn)行1次觀察。

1.2.3 LAMP法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群

①樣本前處理：1）在樣本處理會(huì)館中分別放置40-60μL痰液及陰性對(duì)照;2）翻轉(zhuǎn)3-5次樣本處理試管，并將其置于恒溫?zé)晒夂怂釘U(kuò)增儀中加熱，加熱至90℃，時(shí)間為5分鐘;3）完成加熱后，將樣本處理試管取出，放置室溫中保存，時(shí)間為2分鐘，顛倒混合3-5次;4）將吸附試劑管蓋子取出，然后將樣本處理試管擰入;5）垂直用力震蕩吸附管10次，水平用力甩動(dòng)10次。均勻混合，液體以淺黃色或者乳白色呈現(xiàn)出來(lái);6）在注射帽上面環(huán)套吸附管，倒置吸附管，在吸附管中推注注射帽，旋緊固定;②樣本及試劑溶液混合：1）在加熱管架上方放置注射帽頂端帽環(huán)，使拍管架與眼睛呈水平方向，在反應(yīng)管內(nèi)垂直放入純化裝置尖端，開始加樣;2）對(duì)純化裝置吸附管持續(xù)擠壓，滴加反應(yīng)液到兩刻度見，將反應(yīng)蓋蓋子蓋緊，并標(biāo)記;3）在所有樣本中均勻加入反應(yīng)管后，將陽(yáng)性對(duì)照管打開，取出1根毛細(xì)管，上端捏緊后，見陽(yáng)性對(duì)照插入其中，吸取液體緩慢放松，一直到刻度線，然后將其擰入到LAMP反應(yīng)管中，后將毛細(xì)血管丟棄，然后將反應(yīng)管該蓋子、陽(yáng)性對(duì)照管蓋好;4）緊握反應(yīng)管底端，蓋子上甩入全部反應(yīng)液，倒置2分鐘，充分混合反應(yīng)液與干燥的LAMP試劑;③LAMP擴(kuò)增反應(yīng)：1）在反應(yīng)液與待試劑均勻混合后，上下翻轉(zhuǎn)反應(yīng)管5次，用力甩反應(yīng)液至反應(yīng)管底部，然后在恒溫?zé)晒夂怂銛U(kuò)增儀前端反應(yīng)模塊中放置反應(yīng)管，將蓋子蓋好;2）在反應(yīng)模塊溫度高達(dá)67℃后，打開右側(cè)計(jì)時(shí)開關(guān)，然后開始進(jìn)行LAMP反應(yīng)，時(shí)間設(shè)置為40分鐘;④檢測(cè)熒光目視：結(jié)束LAMP擴(kuò)增反應(yīng)后，將反應(yīng)管取出，并置于恒溫?zé)晒夂怂釘U(kuò)增儀熒光檢測(cè)模塊，將熒光開關(guān)打開觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

分析痰液陽(yáng)性標(biāo)本中L-J培養(yǎng)分枝桿菌與LAMP法檢出結(jié)果、痰液標(biāo)本中L-J培養(yǎng)與LAMP法陽(yáng)性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確分析，計(jì)數(shù)資料的表示方法與檢驗(yàn)值分別是率（%）和x2，兩組對(duì)比，差異顯著（P<0.05）。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比痰液陽(yáng)性標(biāo)本中L-J培養(yǎng)分枝桿菌與LAMP法檢出結(jié)果

50份痰涂片抗酸染色陽(yáng)性標(biāo)本中，LAMP檢測(cè)陽(yáng)性50份，L-J培養(yǎng)陽(yáng)性42份，檢出率分別是100%和84.00%，差異顯著（P<0.05），如下表1：

2.2 對(duì)比痰涂陰標(biāo)本中L-J培養(yǎng)與LAMP法陽(yáng)性檢出率

在痰涂片陰性標(biāo)本中，LAMP陽(yáng)性率較L-J培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2：

3 討論

有效、快速診斷結(jié)核疾病在結(jié)核疾病控制總具有重要作用?，F(xiàn)階段，主要通過(guò)涂片抗酸染色、結(jié)核桿菌培養(yǎng)方式診斷結(jié)核病，但是，結(jié)核桿菌涂片抗酸染色具有較低的檢出率，一般是30-40%[2]。結(jié)核桿菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，往往需要13-29天，無(wú)法達(dá)到及早診斷的目的。LAMP是一種分子診斷技術(shù)，其具有檢查快等特點(diǎn)，且價(jià)格適中3]。根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)分析，LAMP陽(yáng)性檢出率較L-J培養(yǎng)陽(yáng)性更優(yōu)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?？梢姡琇AMP檢查法具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

總而言之，痰液標(biāo)本陽(yáng)性檢出率方面，LAMP法較L-J更高，而且LAMP具有操作簡(jiǎn)單、方便、快捷等特點(diǎn)，而且靈敏度和特異度較高，值得采納、推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊健， 張?zhí)烊A， 鮮小萍，等. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在肺結(jié)核病診斷中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2018， 22（12）：57-60.

[2] 黃文焰， 劉開鉗， 陳伊，等. LAMP技術(shù)在基層結(jié)核病診療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用研究[J]. 中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)， 2017， 17（12）：1264-1266.

[3] 劉亞?wèn)|， 冷雪， 時(shí)坤，等. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)， 2018， 34（5）：460-465.