楊俊蕓，黃恩龍，胡軍，劉起軍*

（1.四川省內(nèi)江市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 內(nèi)江 641000；2.四川恒通動(dòng)保生物科技有限公司，四川 內(nèi)江 641000）

過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉以過(guò)硫酸氫鉀為主要成分，輔以增效劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和有機(jī)酸等輔料，含有效氯不低于10.0%。該產(chǎn)品具有強(qiáng)酸性，其pH值在2.5左右，可以殺滅多種病原菌，其代謝產(chǎn)物不會(huì)對(duì)人類(lèi)和環(huán)境帶來(lái)影響[1]；該產(chǎn)品還具有強(qiáng)氧化性，溶解后產(chǎn)生高能量、高活性的小分子自由基、活性氧等衍生物[2]，通過(guò)循環(huán)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)系統(tǒng)破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性，所產(chǎn)生的自由基等衍生物作用于DNA、RNA 的磷酸二酯鍵，干擾病原體DNA 和RNA 的合成[3-4]。過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉也具有廣譜性，既克服了H2O2等普通氧化劑氧化能力不強(qiáng)且具有選擇性氧化的缺點(diǎn)，又避免了鹵素類(lèi)消毒劑有毒副產(chǎn)物生成而對(duì)人體健康有危害的風(fēng)險(xiǎn)。

“全衛(wèi)效康”是四川某動(dòng)保公司聯(lián)合國(guó)內(nèi)科研機(jī)構(gòu)開(kāi)發(fā)的一種長(zhǎng)效過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉消毒劑。為觀察驗(yàn)證其消毒效果和方便臨床使用，筆者開(kāi)展了本次試驗(yàn)。

1 材料

1.1 藥品

1.1.1 “全衛(wèi)效康”（過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合粉），粉紅色顆粒狀粉末，有檸檬氣味，有效氯含量不低于10.0%。四川某動(dòng)保公司生產(chǎn)，批號(hào)：20190701。

1.1.2 “衛(wèi)可”（過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合粉），粉紅色顆粒狀粉末，有檸檬氣味，有效氯含量不低于10.0%。杜邦公司生產(chǎn)，批號(hào)：1706BA0210。

1.2 供試菌株 大腸桿菌（8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC9372），均由中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心提供。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 普通肉湯培養(yǎng)基，普通瓊脂培養(yǎng)基，參照藥典[5]自配。

1.4 試劑 稀釋液[6]：0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液（PBS）、生理鹽水、蒸餾水，自制；中和劑：0.5%硫代硫酸鈉+1%吐溫-80，用生理鹽水稀釋，121 ℃高壓滅菌15 min。

1.5 試驗(yàn)菌懸液的制備[7]開(kāi)封凍干菌種后，用普通肉湯溶化懸浮菌體，然后劃線接種于適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)18 h，選擇典型的單個(gè)菌落進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳至3 代后接種到適宜的普通肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)24 h即得菌懸液。

2 方法與結(jié)果

2.1 中和劑選擇試驗(yàn)

2.1.1 試驗(yàn)菌 大腸桿菌與金黃色葡萄球菌。將制備好的菌懸液用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，使試驗(yàn)菌含菌量為1×106～1×107CFU/mL。

2.1.2 方法步驟 試驗(yàn)共設(shè)6個(gè)組，第1組：消毒劑+菌懸液；第2 組：（消毒劑+菌懸液）+中和劑；第3 組：中和劑+菌懸液；第4 組：（消毒劑+中和劑）＋菌懸液；第5 組：PBS+菌懸液；第6 組：未接種菌的培養(yǎng)基對(duì)照。按順序分別在1～5 組加入相對(duì)應(yīng)的消毒劑（0.25%）、中和劑、消毒劑與中和劑混合液（1∶9）、PBS 各4.5 mL，菌懸液均為0.5 mL，除第2、4 組前二者混合作用10 min 再加入第三者外，其余各組均混合作用10 min，再取出0.5 mL，用生理鹽水等量稀釋后，做細(xì)菌培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.1.3 結(jié)果判定 當(dāng)?shù)? 組不長(zhǎng)菌，其他各組間細(xì)菌數(shù)相差不超過(guò)10%，第1 組不長(zhǎng)菌或長(zhǎng)菌數(shù)遠(yuǎn)少于第2組，第2組長(zhǎng)菌數(shù)超過(guò)100 CFU/mL，根據(jù)中和劑鑒定試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)判為所選的中和劑濃度。

2.1.4 試驗(yàn)結(jié)果 0.5%硫代硫酸鈉+1%吐溫-80為所選中和劑濃度，且中和劑及其產(chǎn)物對(duì)細(xì)菌及培養(yǎng)基無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 中和劑選擇試驗(yàn)結(jié)果

2.2 細(xì)菌定量消毒試驗(yàn)[8-9]

2.2.1 方法步驟 將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，并用稀釋液稀釋成含菌量為5×105～5×106CFU/mL 的菌懸液。將消毒劑用滅菌蒸餾水稀釋成3 個(gè)不同濃度，各吸取4.5 mL 分別加入3 個(gè)試管內(nèi)，置于20±2 ℃水浴中。待試管內(nèi)液體溫度與水浴溫度平衡后，在3個(gè)試管中分別加入上述配好的0.5 mL菌懸液，混勻并開(kāi)始記時(shí)。分別于4 個(gè)不同間隔時(shí)間，各取0.5 mL 菌液混合液移入4.5 mL 中和劑中，混勻，中和10 min，作適當(dāng)稀釋后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照以洗脫液代替消毒液，按上述步驟同時(shí)進(jìn)行。

2.2.2 結(jié)果判斷 按不同稀釋度推算出每個(gè)樣本存活菌數(shù)（CFU/mL），按下式計(jì)算殺滅率：

式中，Nt為空氣中細(xì)菌的自然消亡率；V0與Vt分別為對(duì)照組試驗(yàn)開(kāi)始前和試驗(yàn)過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)的空氣含菌量；V0′與Vt′分別為試驗(yàn)組消毒處理前和消毒過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)的空氣含菌量；Kt為消毒處理對(duì)空氣中細(xì)菌的殺滅率，應(yīng)達(dá)到99.9%以上。

2.2.3 試驗(yàn)結(jié)果“全衛(wèi)效康”（1∶400）能在10 min 內(nèi)殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌黑色變種芽孢，殺菌效果與“衛(wèi)可”（1∶400）相同。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 兩種產(chǎn)品不同濃度下的定量消毒試驗(yàn)結(jié)果

2.3 硬水拮抗試驗(yàn)

2.3.1 方法步驟 將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，并用稀釋液稀釋成含菌量為5×105～5×106CFU/mL 的菌懸液。將消毒劑用硬水稀釋成3 個(gè)不同濃度，各吸取4.5 mL分別加入3個(gè)試管內(nèi)，置于20±2 ℃水浴中。待試管內(nèi)液體溫度與水浴溫度平衡后，在3 個(gè)試管中分別加入上述配好的0.5 mL 菌懸液，混勻并開(kāi)始記時(shí)。分別于4 個(gè)不同間隔時(shí)間，各取0.5 mL 菌液混合液移入4.5 mL 中和劑中，混勻，中和10 min，作適當(dāng)稀釋后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照以洗脫液代替消毒液，按上述步驟同時(shí)進(jìn)行。

2.3.2 結(jié)果判斷 結(jié)果判斷同2.2.2。

2.3.3 試驗(yàn)結(jié)果“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”都有很強(qiáng)的抗硬水能力，實(shí)驗(yàn)條件下“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的抗硬水能力一致，硬水對(duì)兩種消毒劑殺菌能力的影響不顯著。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 硬水條件下“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的殺菌性能

2.4 有機(jī)物保護(hù)試驗(yàn)[10]

2.4.1 方法 以無(wú)菌小牛血清作為有機(jī)物代表，在菌懸液中加入小牛血清，使其濃度為10%。通過(guò)定量殺菌試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，各組試驗(yàn)至少重復(fù)3次，計(jì)算不同濃度有機(jī)物存在時(shí)的殺菌率，并作比較。

2.4.2 試驗(yàn)結(jié)果“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”都有很強(qiáng)的抗有機(jī)物能力，實(shí)驗(yàn)條件下，“全衛(wèi)效康”（1∶400）的抗有機(jī)物能力優(yōu)于“衛(wèi)可”（1∶400），有機(jī)物對(duì)兩種消毒劑消毒效果的影響不明顯。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 有機(jī)物條件下“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的殺菌性能

2.5 能量試驗(yàn)[10]

2.5.1 方法步驟 將兩種消毒劑用標(biāo)準(zhǔn)硬水稀釋成3個(gè)濃度的消毒液，每個(gè)濃度分裝3 mL于無(wú)菌試管內(nèi)，然后分別于第0、10、20 min（第1、2、3次）加入1 mL菌懸液，并于第8、18、28 min分別取20 μL混合液于含中和劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管中，一式5份；取2支含5 mL中和產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)肉湯管，向其中加入5 μL試驗(yàn)菌液作為陽(yáng)性對(duì)照。將以上各試驗(yàn)組與對(duì)照組的樣本試管置于37 ℃培養(yǎng)48 h，觀察是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。

2.5.2 結(jié)果判定 在第1次和第2次加入菌懸液的5 管樣本中，有2 管或2 管以上不長(zhǎng)菌的消毒劑濃度作為最低合格濃度[6]。

2.5.3 試驗(yàn)結(jié)果“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的殺菌效果接近，對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最低合格濃度為0.5%。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 "全衛(wèi)效康"和"衛(wèi)可"的能量性能測(cè)試對(duì)比

2.6 過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉的臨床快速鑒別方法

2.6.1 聞氣味 將藥品溶于水中，應(yīng)無(wú)氯氣釋放或無(wú)刺激性氣味；加入大量氯化鈉，應(yīng)釋放出刺激性氣味（氯氣）。

2.6.2 觀顏色 將藥品兌水，觀察是否能夠長(zhǎng)時(shí)間不褪色；保持時(shí)間越長(zhǎng)，說(shuō)明配方組分越穩(wěn)定。

3 小結(jié)

過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽兼顧了氯制劑、氧化劑、酸制劑的三重功效，殺菌譜廣，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，副作用小，安全性高[11-12]。該消毒劑成分復(fù)雜，主要包括過(guò)硫酸氫鉀、硫酸氫二鉀和硫酸鉀等復(fù)合物，屬于以硫酸根自由基為基礎(chǔ)的強(qiáng)氧化活性殺菌成分。過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽易溶于水，一旦溶于水即產(chǎn)生豐富的活性氧、羥基自由基等高能量、高活性的小分子物質(zhì)，能對(duì)各種微生物進(jìn)行破壞和殺滅。

本試驗(yàn)表明，“全衛(wèi)效康”在定量殺菌、抗硬水和抗有機(jī)物等方面與原研單位生產(chǎn)的過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉（衛(wèi)可）基本一致，在某些方面（抗有機(jī)物等）甚至優(yōu)于“衛(wèi)可”。