楊 昕，劉 芳，杜 靜，張繼朋

肺癌發(fā)病率、病死率位居惡性腫瘤首位，是一個(gè)嚴(yán)重影響人群健康和生活質(zhì)量的公共衛(wèi)生問題。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)是肺癌最常見類型，占肺癌的80%～85%[1]。手術(shù)是早期NSCLC的首選治療手段，而治療失敗的原因主要為腫瘤晚期轉(zhuǎn)移及惡性程度較高所致，其中腫瘤轉(zhuǎn)移是多種因素引發(fā)的生物學(xué)行為。腫瘤轉(zhuǎn)移涉及多個(gè)基因產(chǎn)物，其中轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1蛋白(crosshead box transcription factor M1， MTA1)、叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1(transfer related gene 1 protein， FOXM1)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，有望成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。本研究探討FOXM1和MTA1在NSCLC中的表達(dá)及其與臨床特征和預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年6月—2014年2月陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的符合納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的行手術(shù)治療的86例NSCLC，其中男63例，女23例；年齡25～81(63.15±6.93)歲；病程6個(gè)月～1.1年，平均7.69個(gè)月；腫瘤直徑1.36～6.58 cm，平均3.96 cm；TNM分期為Ⅰ期16例，Ⅱ期20例，Ⅲ期31例，Ⅳ期19例；吸煙72例；術(shù)后接受放療21例，接受化療11例；腫瘤部位為左肺41例，右肺45例；腫瘤分化程度為低分化25例，中分化43例，高分化18例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；②所有患者均行手術(shù)治療，術(shù)中及術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為NSCLC。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病者；②存在其他部位惡性腫瘤者；③有嚴(yán)重原發(fā)性肝腎功能不全者；④臨床資料不完整或缺乏準(zhǔn)確性者。

1.3觀察指標(biāo) 記錄患者的臨床資料，包括年齡、性別、TNM分期、吸煙史、腫瘤部位等，檢測FOXM1、MTA1表達(dá)情況，隨訪5年(電話隨訪、短信隨訪及回院復(fù)查)，觀察疾病轉(zhuǎn)移(復(fù)查影像學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶)、預(yù)后情況，分析FOXM1、MTA1表達(dá)與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系。

1.3.1FOXM1檢測：所有患者手術(shù)切除病灶常規(guī)固定制作石蠟標(biāo)本，切成厚4 μm薄片，采用SP法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色(免疫組化)，操作步驟參考美國Santa Cruz公司的試劑盒說明書，同時(shí)利用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。若FOXM1胞核或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽性細(xì)胞。所有免疫組化結(jié)果均由兩位病理科醫(yī)師在雙盲條件下進(jìn)行獨(dú)立判斷，按照文獻(xiàn)[3]進(jìn)行染色判讀，將(-)和(+)計(jì)為陰性，(++)計(jì)為弱陽性，(+++)計(jì)為強(qiáng)陽性，并將弱陽性和強(qiáng)陽性計(jì)為陽性。

1.3.2MTA1檢測：所有患者手術(shù)切除病灶常規(guī)固定制作石蠟標(biāo)本，切成厚4 μm薄片，標(biāo)本常規(guī)脫蠟脫水，經(jīng)高壓抗原修復(fù)2 min，抗原修復(fù)液為枸櫞酸鹽緩沖液，3%過氧化氫溶液作用10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，鼠抗人MTA1多克隆抗體按1∶100稀釋后于4℃環(huán)境下孵育過夜，次日取出后于室溫恢復(fù)30 min，磷酸鹽緩沖液清洗，滴加即用型二抗，37℃作用30 min后用磷酸鹽緩沖液清洗，DAB染色，復(fù)染后封片，置于高倍顯微鏡下觀察。用已知MTA1陽性表達(dá)的NSCLC組織作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。鼠抗人MTA1多克隆抗體來源于美國Abcam公司，兔抗鼠二抗及DAB顯色液購自邁新生物技術(shù)公司。MTA1陽性表達(dá)為細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒，根據(jù)免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析計(jì)數(shù)[4]，若≤6分為低表達(dá)，>6分為高表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1免疫組化結(jié)果 FOXM1陽性表達(dá)76例，陰性表達(dá)10例，陽性率為88.37%，其中強(qiáng)陽性52例，弱陽性24例；MTA1高表達(dá)68例，低表達(dá)18例，高表達(dá)率為79.07%。34例生存，52例死亡，生存率39.53%。

2.2FOXM1、MTA1在NSCLC患者不同臨床特征中的表達(dá)情況 是否吸煙、腫瘤分化程度、是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的NSCLC患者FOXM1表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，是否吸煙、不同TNM分期、不同腫瘤直徑、不同腫瘤分化程度、是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的NSCLC患者M(jìn)TA1表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 FOXM1、MTA1在NSCLC患者不同臨床特征中的表達(dá)情況

注：FOXM1指叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1，MTA1指轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1蛋白，NSCLC指非小細(xì)胞肺癌

2.3影響NSCLC患者預(yù)后的單因素分析 單因素分析顯示，年齡、是否吸煙、TNM分期、腫瘤直徑、腫瘤分化程度、是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、FOXM1及MTA1表達(dá)情況是影響NSCLC患者預(yù)后的相關(guān)因素(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.4影響NSCLC患者預(yù)后的多因素分析 多因素logistic回歸分析顯示，年齡≤60歲、吸煙、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤直徑>3 cm、腫瘤分化程度低分化、發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、FOXM1表達(dá)陽性、MTA1高表達(dá)為影響NSCLC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表2 影響NSCLC患者預(yù)后的單因素分析[例(%)]

注：NSCLC指非小細(xì)胞肺癌，F(xiàn)OXM1指叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1，MTA1指轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1蛋白

3 討論

肺癌是我國發(fā)病率、病死率最高的惡性腫瘤，全球肺癌的發(fā)病率占患癌總數(shù)的15%，且呈逐年上升趨勢。肺癌早期無特征性臨床表現(xiàn)，早期正確診斷率低，晚期肺癌患者往往已不能行根治性手術(shù)治療或手術(shù)治療后易復(fù)發(fā)，直接影響患者的生存時(shí)間[5-8]。有研究認(rèn)為，腫瘤組織中FOXM1表達(dá)與肺癌臨床病理因素存在一定相關(guān)性[9]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)FOXM1在NSCLC中呈高表達(dá)，參與肺血管的形成、腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移，并與NSCLC的預(yù)后相關(guān)，抑制其表達(dá)可延緩腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[10]。付軍科等[11]運(yùn)用RNA干擾技術(shù)下調(diào)FOXM1表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)通過下調(diào)FOXM1表達(dá)水平可降低肺癌細(xì)胞的侵襲能力，進(jìn)而降低肺癌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)，推測FOXM1有望作為NSCLC治療的新靶點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)OXM1陽性表達(dá)76例，陰性表達(dá)10例，陽性率為88.37%；MTA1高表達(dá)68例，低表達(dá)18例，高表達(dá)率為79.07%，表明FOXM1、MTA1與NSCLC發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，F(xiàn)OXM1失調(diào)對惡性腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤新生血管生成及腫瘤細(xì)胞侵襲均有一定的影響，且FOXM1在中低分化的鱗癌細(xì)胞中更易檢測，同時(shí)FOXM1陽性表達(dá)與NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12-14]。本文發(fā)現(xiàn)FOXM1表達(dá)與是否吸煙、腫瘤分化程度、是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在密切相關(guān)性，與高映浩等[15]報(bào)道一致。轉(zhuǎn)移相關(guān)基因是一類新發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因家族，其中MTA1由核小體重構(gòu)及組蛋白脫乙?；笍?fù)合物構(gòu)成，參與核小體重塑及組蛋白去乙?；痆16-18]。

表3 影響NSCLC患者遠(yuǎn)期預(yù)后的多因素logistic回歸分析

注：NSCLC指非小細(xì)胞肺癌，F(xiàn)OXM1指叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1，MTA1指轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1蛋白

有研究證實(shí)，MTA1表達(dá)陽性與FOXM1高表達(dá)存在相似之處，均具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性增殖的作用，并且MTA1在多種人類腫瘤中呈異常高表達(dá)，參與腫瘤血管生成及細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程[18-20]。本研究多因素logistic回歸分析顯示，F(xiàn)OXM1表達(dá)陽性、MTA1高表達(dá)為影響NSCLC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示FOXM1、MTA1表達(dá)與NSCLC的轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，推測FOXM1、MTA1可能成為NSCLC腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，故探索FOXM1、MTA1在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)和分子學(xué)機(jī)制有助于進(jìn)一步解析NSCLC的生物學(xué)行為。

綜上所述，F(xiàn)OXM1表達(dá)陽性、MTA1高表達(dá)為影響NSCLC患者預(yù)后的不良因素，臨床應(yīng)提高警惕。然而，本研究不足之處在于樣本量較小，研究結(jié)論需加大樣本量以進(jìn)一步證實(shí)。