葉韻婕，林金端，黃振勇，劉紅偉

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院/廣東省清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院：1.輸血科；2.分子診斷中心，廣東清遠(yuǎn) 511500

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)是一組高發(fā)于中國南方沿海地區(qū)的嚴(yán)重威脅人類健康的單基因隱性遺傳性血液病，可分為α地貧和β地貧兩類。α地貧又可分為缺失型和非缺失型兩類，其中α珠蛋白基因大片段缺失導(dǎo)致的缺失型α地貧是臨床常見的變異類型。與缺失型α地貧相比，α珠蛋白基因或其調(diào)節(jié)序列發(fā)生點突變引起的非缺失型α地貧臨床上較少見，以往常容易被臨床忽視。非缺失型α地貧等位基因與東南亞型缺失(--SEA)或泰國型缺失(--THAI)雜合時可引發(fā)非缺失型血紅蛋白H病(Hb H病)[1]，而非缺失型Hb H病的臨床表現(xiàn)和血液學(xué)改變常比缺失型Hb H病更重[2]，部分非缺失型Hb H病患兒甚至需要不定期輸血治療[3-4]。因此,近幾年來非缺失型α地貧以及其引起的Hb H病的產(chǎn)前診斷及干預(yù)越來越受到臨床的重視。地貧基因突變具有高度的異質(zhì)性，表現(xiàn)為明顯的地域性或群體特異性，不同種族以及人群擁有不同的基因突變譜[5]。廣東清遠(yuǎn)地處廣東省西北山區(qū)，毗鄰廣西，南靠珠三角，且有少數(shù)民族聚居，地貧基因遺傳背景復(fù)雜。目前有關(guān)廣東清遠(yuǎn)地區(qū)非缺失型α地貧基因型分布的相關(guān)研究報道還很少，為了解本地區(qū)非缺失型α地貧基因的分布特征，本文將2014年4月至2018年12月本院非缺失型α地貧基因的檢測結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2014年4月至2018年12月在本院門診部及住院部進行α地貧基因檢測的受檢者9 047例，年齡1 d至89歲，其中男3 797例，女5 250例。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 采用枸櫞酸鈉9∶1抗凝真空管抽取受檢者外周靜脈血2 mL。

1.2.2DNA提取 按照血液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)說明書操作提取全血基因組DNA，提取的DNA標(biāo)本于-20 ℃保存，剩余全血標(biāo)本于-80 ℃冷凍保存。提取試劑盒由潮州凱普公司提供，試驗過程嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書操作。

1.2.3PCR擴增 按照地貧基因檢測試劑盒說明書采用生物素標(biāo)記的引物對3種常見的α珠蛋白基因缺失區(qū)域(--SEA、-α3.7、-α4.2)及3種常見的非缺失型α珠蛋白基因突變區(qū)域(αWSα、αCSα、αQSα)進行特異性擴增。擴增試劑盒由潮州凱普公司提供，核酸擴增儀由美國Applied biosystems公司提供，試驗過程嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書操作。

1.2.4膜雜交 將擴增產(chǎn)物加入導(dǎo)流雜交儀反應(yīng)孔中，與標(biāo)記有不同類型的地貧缺失或突變基因探針的尼龍膜進行雜交，經(jīng)沖洗、封阻、酶標(biāo)、洗滌、顯色后判讀結(jié)果。雜交試劑盒及雜交儀由潮州凱普公司提供，試驗過程嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書操作。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示。

2 結(jié) 果

9 047例受檢者中，共檢出非缺失型α地貧256例，其中男100例，女156例，非缺失型α地貧基因攜帶率為2.83%。研究中共檢出12種非缺失型α地貧基因型，其中非缺失型α地貧基因攜帶者(αWSα/αα、αCSα/αα、αQSα/αα)203例，占79.30%；非缺失型Hb H病患者(--SEA/αWSα、--SEA/αCSα、--SEA/αQSα)39例，占15.23%，非缺失型Hb H病檢出率為0.43%(39/9 047)；同時還檢出非缺失α地貧雙重雜合子(αCSα/αWSα)和純合子(αQSα/αQSα)各1例。αWSα、αCSα、αQSα 3種常見的非缺失型α地貧等位基因構(gòu)成比依次為48.84%(126/258)、30.62%(79/258)、20.54%(53/258)。見表1。

表1 256例非缺失型α地貧基因型及構(gòu)成比(%)

3 討 論

本研究共檢出非缺失型α地貧256例，非缺失型α地貧基因攜帶率為2.83%，高于廣西橫縣的2.14%[6]以及深圳地區(qū)的1.90%[7]。這與本研究中部分受檢者先經(jīng)過血細(xì)胞分析或血紅蛋白電泳篩查，提示可能為α地貧基因攜帶者再進行α地貧基因檢測有關(guān)。此前也有相關(guān)研究表明，清遠(yuǎn)地區(qū)人群α地貧基因總攜帶率為11.47%，高于廣東省平均水平[8]。結(jié)合本次研究結(jié)果可知，廣東清遠(yuǎn)地區(qū)非缺失型α地貧基因攜帶率也較高，因此在日常地貧防控工作中應(yīng)對非缺失型α地貧的檢測足夠重視，以免漏診。

同時本研究顯示，清遠(yuǎn)地區(qū)3種常見的非缺失型α地貧等位基因構(gòu)成比由高到低依次為αWSα、αCSα、αQSα。與陳詠珊等[9]報道的中山地區(qū)、姜碧等[10]報道的東莞地區(qū)以及屈艷霞等[4]報道的廣州地區(qū)非缺失型α地貧等位基因構(gòu)成比由高到低依次為αQSα、αWSα、αCSα有差異；與張滿娥等[11]報道的福建龍巖地區(qū)非缺失型α地貧等位基因構(gòu)成比由高到低依次為αCSα、αQSα、αWSα也有差異。說明αWSα、αCSα、αQSα 3種常見的非缺失型α地貧等位基因的分布在不同的地區(qū)和人群中存在差異，其分布具有一定的地域性或群體特異性。本研究所得結(jié)果與廣西地區(qū)[12]及佛山地區(qū)[13]的調(diào)查結(jié)果較為接近。主要考慮有兩方面原因：(1)清遠(yuǎn)市與廣西接壤，與佛山地域接近，與兩地人口交流較多；(2)清遠(yuǎn)市與廣西均有瑤族、壯族等少數(shù)民族聚居，地貧基因遺傳背景較為相近，因而非缺失型α地貧等位基因人群分布特征較為相似。因此，在制訂地貧防控策略時除了要充分了解本地區(qū)人群的地貧基因分布特征外，還應(yīng)注意地理位置、人口流動、經(jīng)濟水平等多方面因素的影響。

非缺失型α地貧是由于α珠蛋白基因或其調(diào)節(jié)序列發(fā)生點突變造成的，其中大多數(shù)的突變位于功能較強的α2基因內(nèi)，當(dāng)α2基因發(fā)生點突變時，α珠蛋白鏈產(chǎn)量的減少比α2基因發(fā)生缺失更明顯。因此，與缺失型Hb H病患者相比，非缺失型Hb H病患者的臨床表現(xiàn)和血液學(xué)改變較重[3]，對脾切除和鐵螯合治療的要求也較高[14]，部分非缺失型Hb H病甚至?xí)鹚[胎[5]。本研究共檢出非缺失型Hb H病39例，檢出率為0.43%，遠(yuǎn)高于廣西橫縣的0.09%[6]。

清遠(yuǎn)地區(qū)人群α地貧基因總攜帶率(11.47%)[8]、非缺失型α地貧基因攜帶率(2.83%)及非缺失型Hb H病檢出率(0.43%)均較高，說明本地的α地貧防控形勢仍十分嚴(yán)峻，在制訂α地貧產(chǎn)前預(yù)防及控制方案時應(yīng)提高對非缺失型α地貧及非缺失型Hb H病的重視程度。建議在婚前檢查及產(chǎn)前診斷工作中普及非缺失型α地貧基因檢測，推行當(dāng)夫婦一方確診攜帶有--SEA或--THAI缺失型α地貧基因或者確診攜帶非缺失型α地貧基因時，另一方需同時做缺失型和非缺失型α地貧基因檢測。準(zhǔn)確診斷出非缺失型α地貧，特別是重型非缺失型Hb H病(--SEA/αCSα、--SEA/αQSα)，及時進行產(chǎn)前干預(yù)，對減少重癥地貧患兒的出生，提高出生人口質(zhì)量有重大意義。