實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人巨細(xì)胞病毒感染的 臨床意義分析

譚天照 李學(xué)仿 黃廣榮

【摘要】 目的 分析實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)在人巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取363例疑似HCMV感染患兒及50例健康兒童， 均采集血樣進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。分析熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果， 并比較不同性別、不同年齡HCMV感染的陽性檢出情況。結(jié)果 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示， HCMV感染患兒中32例為陽性， 陽性率為8.82%;健康兒童中1例為陽性， 陽性率為2%。陽性患兒的HCMV載量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患兒陽性率高于健康兒童， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。188例男性CMV感染患兒的陽性率為9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患兒的陽性率為8.57%（15/175）， 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。152例年齡<1歲CMV感染患兒的陽性率最高， 為14.5%;其次為1～3歲患兒， 陽性率為6.9%;109例>3歲患兒的陽性率最低， 為2.8%;不同年齡段CMV感染患兒的陽性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 <1歲兒童由于機(jī)體的免疫力和抵抗力較弱， 容易出現(xiàn)HCMV感染的情況， 因此需要借助實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行篩查， 從而盡早診斷和治療， 能夠避免嚴(yán)重并發(fā)癥的出現(xiàn)。

【關(guān)鍵詞】 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng);人巨細(xì)胞病毒感染;臨床診斷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.013

Analysis of clinical significance of real-time fluorescence quantitative PCR in detection of human cytomegalovirus infection ? TAN Tian-zhao， LI Xue-fang， HUANG Guang-rong. Yangchun Peoples Hospital， Yangchun 529600， China

【Abstract】 Objective ? To analyze the value of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR） in detection of human cytomegalovirus （HCMV） infection. Methods ? A total of 363 suspected HCMV infection children and 50 healthy children， and their blood samples were collected for real-time fluorescent quantitative PCR detection. The results of fluorescent quantitative PCR detection were analyzed， and the positive rates of different genders and different ages were compared. Results ? According to real-time fluorescent quantitative PCR， there were 32 positive cases， with a positive rate of 8.82%; 1 case of healthy children was positive， with a positive rate of 2%. The HCMV load of positive children was 5.0 ×102-1.0×104 copies/ml.

The positive rate of HCMV children was higher than that of healthy children， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of 188 male children with CMV infection was 9.04% （17/188）， and the positive rate of 175 female children with CMV infection was 8.57%. There was no significant difference in the positive rate of HCMV infection between male and female （P>0.05）. The highest positive rate was 14.5% in

152 children with CMV infection< 1 year of age， followed by 6.9% in children 1-3 years of age， and the lowest was 2.8% in 109 children > 3 years of age， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ? <1 year old children are vulnerable to HCMV infection due to weak body immunity and resistance， so they need to be screened with the help of real-time quantitative PCR technology. Thus avoid serious complications by early diagnosis and treatment.

【Key words】 Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction; Human cytomegalovirus infection; Clinical diagnosis

HCMV是一種常見的致病因， 人是該病毒的唯一宿主。孕期出現(xiàn)的HCMV感染可由胎盤傳染給胎兒， 引起死胎、早產(chǎn)等問題， 對(duì)母嬰健康造成較大的威脅。同時(shí)哺乳期也可通過乳汁造成新生兒感染， 引起新生兒發(fā)育障礙[1]。嬰幼兒在感染HCMV之后， 由于免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟， 可引起嚴(yán)重的病變， 同時(shí)該病的臨床癥狀多樣化且無特異性， 存在一定的診斷困難。病毒培養(yǎng)是病毒感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)， 但是由于培育時(shí)間較長(zhǎng)， 很難在臨床普及， 而病毒抗體檢測(cè)在嬰幼兒中的敏感度與特異性不夠理想[2]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR是近些年來臨床醫(yī)學(xué)推廣的新技術(shù)， 在病毒檢測(cè)中具有快速、高效的特點(diǎn)。為了進(jìn)一步分析該技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值， 文章選取2018年2月～2019年5月363例本院收治疑為HCMV感染患兒進(jìn)行觀察， 研究如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年2月～2019年5月本院收治的363例疑似HCMV感染患兒， 其中男188例， 女175例;年齡3 d～12歲， 平均年齡（2.1±3.3）歲。另選取同期50例健康兒童作對(duì)比分析。

1. 2 方法 所有研究對(duì)象均采集血樣， 并行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)， 本次研究采用進(jìn)口實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀以及HCMV DNA測(cè)試盒。具體操作方法：采集所有研究對(duì)象的外周靜脈血2 ml， 2500 r/min離心

5 min， 之后取100 μl血清加入100 μl DNA濃縮液混勻之后以12000 r/min離心10 min， 棄上清液并加入20 μl DNA提取液， 并在100℃恒溫箱中放置10 min， 再以

12000 r/min離心5 min， 然后提取3 μl使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)， 嚴(yán)格按照儀器以及實(shí)際說明書進(jìn)行操作。

1. 3 觀察指標(biāo) 分析熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果， 并比較不同性別、不同年齡HCMV感染的陽性檢出情況。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)以及秩和檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果分析 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示， HCMV感染患兒中32例為陽性， 陽性率為8.82%;健康兒童中1例為陽性， 陽性率為2%。陽性患兒的HCMV載量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患兒陽性率高于健康兒童， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 2 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較 188例男性CMV感染患兒的陽性率為9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患兒的陽性率為8.57%（15/175）， 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2. 3 不同年齡CMV感染患兒陽性率比較 152例年齡<1歲CMV感染患兒的陽性率最高， 為14.5%;其次為1～3歲患兒， 陽性率為6.9%;109例>3歲患兒的陽性率最低， 為2.8%;不同年齡段CMV感染患兒的陽性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

HCMV感染是一種常見的疾病， 尤其是兒童， 感染率>80%。HCMV在感染之后經(jīng)過系統(tǒng)治療雖然臨床癥狀完全消失， 但是病毒并不會(huì)完全被清除， 而是潛伏在人體形成終生感染。該病屬于條件致病菌， 當(dāng)宿主由于各種因素造成的免疫力下降時(shí)， 潛伏在人體中的病毒可能增殖明顯而引起感染癥狀[3]。孕婦在感染HCMV之后， 能夠通過多種途徑引起胎兒HCMV感染， 如胎盤垂直傳染、產(chǎn)道感染以及乳汁傳播等， 可引起多種不良預(yù)后， 對(duì)母嬰健康安全造成了較大的影響。因此需要盡早發(fā)現(xiàn)和治療， 避免影響胎兒的正常發(fā)育。而HCMV感染可引起多組織器官受累， 包括肝臟、肺臟、腎臟、心臟以及淋巴系統(tǒng)等， 約有90%的HCMV感染嬰幼兒雖然為無癥狀感染， 但是仍有一部分患兒存在語言障礙、聽力障礙以及學(xué)習(xí)困難等后遺癥， 有一部分宮內(nèi)HCMV感染的患兒在出生后發(fā)現(xiàn)存在黃疸、肝脾腫大以及發(fā)育畸形等問題， 由于患兒的臨床癥狀存在多樣化的特點(diǎn)， 無法通過觀察患兒的臨床癥狀來早期診斷， 因此需要利用先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行篩查， 從而降低這些問題的出現(xiàn)， 能夠確保嬰幼兒的健康成長(zhǎng)。

ELISA法檢測(cè)HCMV免疫球蛋白M（IgM）抗體一直被認(rèn)為是HCMV感染臨床診斷的重要方法， 這主要是由于HCMV感染后3～5 d人體即可產(chǎn)生相應(yīng)的IgM抗體， 且抗體的持續(xù)時(shí)間>3個(gè)月[4]。但是臨床研究指出， 部分IgM陰性的患兒可能由于免疫機(jī)制發(fā)育不完善， 因此在HCMV感染之后未出現(xiàn)IgM抗體或是抗體消失， 同時(shí)IgM陽性并不能作為HCMV感染的唯一指標(biāo)， 這主要是由于風(fēng)濕因子以及過往皰疹病毒感染殘留的病毒交叉反應(yīng)也可造成假陽性現(xiàn)象， 從而影響了該檢查技術(shù)在HCMV感染臨床篩查中的應(yīng)用[5]。此外， 該方法無法評(píng)價(jià)藥物治療效果以及患兒的預(yù)后情況。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是近些年來臨床醫(yī)學(xué)新推出的一種檢測(cè)技術(shù)， 其主要是將基因擴(kuò)增、分子雜交以及熒光化學(xué)等技術(shù)相結(jié)合， 利用PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析， 且該過程是在封閉環(huán)境中實(shí)現(xiàn)的， 因此能夠避免污染和無法定量的問題。該技術(shù)能夠快速檢測(cè)HCMV的DNA水平， 從而反映患兒病毒感染的嚴(yán)重程度與HCMV DNA復(fù)制水平， 從而指導(dǎo)臨床診斷、用藥和療效評(píng)價(jià)。因此， 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在HCMV感染的臨床診斷中具有較好的應(yīng)用效果。

本次研究結(jié)果顯示， 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示， HCMV感染患兒中32例為陽性， 陽性率為8.82%;健康兒童中1例為陽性， 陽性率為2%。陽性患兒的HCMV載量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患兒陽性率高于健康兒童， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。188例男性CMV感染患兒的陽性率為9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患兒的陽性率為8.57%（15/175）， 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。152例年齡<1歲CMV感染患兒的陽性率最高， 為14.5%;其次為1～3歲患兒， 陽性率為6.9%;109例>3歲患兒的陽性率最低， 為2.8%;不同年齡段CMV感染患兒的陽性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這可能是由于嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟， 容易受到病毒的感染， 而隨著年齡的增長(zhǎng)， 身體的免疫力和抵抗力增強(qiáng)， 因此HCMV感染與兒童的年齡密切相關(guān)。對(duì)于出現(xiàn)黃疸、肝損傷以及肺炎等癥狀的患兒， 若未發(fā)現(xiàn)明顯誘因， 需要盡早進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定， 篩查有無HCMV感染， 同時(shí)對(duì)于肝功能損傷的患兒需要積極進(jìn)行保肝治療， 避免肝損傷的進(jìn)一步加重[6-8]。

綜上所述， <1歲兒童由于機(jī)體的免疫力和抵抗力較弱， 容易出現(xiàn)HCMV感染的情況， 因此需要借助實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行篩查， 從而盡早診斷和治療， 能夠避免嚴(yán)重并發(fā)癥的出現(xiàn)。

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[收稿日期：2019-12-05]