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      利用MALDI-TOFMS對血流感染病原菌快速鑒定的準確性評價

      2020-04-07 03:51:42余德基周鳳英陳思穎
      中國實用醫(yī)藥 2020年7期
      關(guān)鍵詞:假絲革蘭球菌

      余德基 周鳳英 陳思穎

      【摘要】 目的 探討利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)對血流感染病原菌快速鑒定的準確性。方法 選取356例(356份)患者的血液樣本作為研究對象, 分別使用MALDI-TOF MS與 Vitek 2 Compact全自動微生物分析系統(tǒng)(Vitek 2 Compact) 對血流感染病原菌進行檢測, 并以Vitek 2 Compact鑒定結(jié)果為金標準, 觀察MALDI-TOF MS的鑒定符合率。結(jié)果 在陽性血培養(yǎng)瓶中, 革蘭陰性菌主要包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌復合菌、陰溝腸桿菌復合群、沙門菌群, 種水平鑒定符合率為94.64%(212/224);革蘭陽性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌, 種水平鑒定符合率為94.62%(88/93)。真菌主要包括白色假絲酵母、熱帶假絲酵母、近平滑假絲酵母、清酒假絲酵母、光滑假絲酵母、新型隱球菌、克柔假絲酵母、葡萄牙假絲酵母, 種水平鑒定符合率為80.00%(24/30), 另檢出馬爾尼菲青霉菌9株, 因不做生化鑒定未列入對比。結(jié)論 利用MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速鑒定具有較高準確率, 且檢測簡便、檢測時間短。

      【關(guān)鍵詞】 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜;血流感染病原菌;快速鑒定

      DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.086

      相關(guān)臨床研究顯示, 近年來隨著廣譜抗生素不合理應用與侵入性操作的不斷增加, 血流感染的發(fā)病率及病死率逐年上升, 進而對其造成較為嚴重的損傷[1], 甚至導致患者死亡等不良后果[2], 因此為有效的消除病原菌, 提升患者的健康水平, 則需要對血流感染病原菌進行有效的鑒定, 以便能夠采取針對性的措施進行治療[3]。隨著臨床檢測技術(shù)的不斷發(fā)展, 目前臨床中多使用MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速

      鑒定[4]。本研究探討MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速鑒定的準確性。現(xiàn)報告如下。

      1 資料與方法

      1. 1 一般資料 將本院2018年7月~2019年6月收集的356例(356份)患者的血液樣本作為研究對象, 其中男236例, 女132例;平均年齡(58.1±4.9)歲。對所有樣本均進行單菌株感染血培養(yǎng), 結(jié)果顯示, 細菌培養(yǎng)陽性317份(革蘭陰性224份、革蘭陽性93份), 真菌培養(yǎng)陽性39份。

      1. 2 方法

      1. 2. 1 試劑與儀器 甲酸、乙腈、Bact/ALERT? 3D 全自動血培養(yǎng)儀、VITEKMS質(zhì)譜儀、基質(zhì)液、靶板、VITEK 2 COMPACT及其配套的鑒定板條、血瓊脂平板、中國藍平板、巧克力平板、沙保氏平板、念珠菌顯色平板。

      1. 2. 2 檢測

      1. 2. 2. 1 涂片染色鏡檢 使用革蘭染色鏡對陽性報警的株菌進行檢測, 以便能夠初步對待測菌的種類進行確定, 并排除假陽性的干擾。

      1. 2. 2. 2 菌種常規(guī)鑒定 若革蘭染色鏡檢結(jié)果為細菌, 則采取接種血瓊脂平板、中國藍平板與巧克力平板;若鏡檢結(jié)果為真菌, 則采取接種血瓊脂平板、中國藍平板與念珠菌顯色平板, 并對其進行18~24 h的孵育, 之后使用 VITEK 2 COMPACT予以鑒定, 并記錄鑒定結(jié)果。

      1. 2. 2. 3 菌種快速鑒定 與上述接種操作一樣, 區(qū)別在于只對其進行4 h的孵育, 之后用培養(yǎng)的菌膜制備質(zhì)譜靶板行質(zhì)譜鑒定。

      1. 2. 2. 4 MALDI-TOF MS的鑒定流程 點樣上清液

      1 L至48孔的靶板, 在室溫下進行干燥, 之后添加配套基質(zhì)液, 同時點樣大腸埃希菌ATCC8739于質(zhì)控點, 并立即加入配套基質(zhì)液, 待全部干燥后使用MALDI-TOF MS進行檢測, 若鑒定結(jié)果位于60.0%~99.9%說明鑒定結(jié)果可靠, 其評分標準如下:綠色表示唯一的鑒定結(jié)果, 可信率為60.0%~99.9%;黃色表示低分辨率有2~4個鑒定結(jié)果, 可信率>60%, 但仍然需要進行進一步的鑒定;紅色表示無法鑒定, 可信率≤60%。

      1. 3 觀察指標及判定標準 分析單菌株血流細菌感染鑒定結(jié)果、單菌株血流真菌感染鑒定結(jié)果。種水平鑒定符合率=種水平鑒定正確率+種水平鑒定錯誤率。

      2 結(jié)果

      2. 1 單菌株血流細菌感染鑒定結(jié)果 在陽性血培養(yǎng)瓶中, 革蘭陰性菌主要包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌復合菌、陰溝腸桿菌復合群、沙門菌群, 種水平鑒定符合率為94.64%(212/224);革蘭陽性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌, 種水平鑒定符合率為94.62%(88/93)。見表1。

      2. 2 單菌株血流真菌感染鑒定結(jié)果 真菌主要包括白色假絲酵母、熱帶假絲酵母、近平滑假絲酵母、清酒假絲酵母、光滑假絲酵母、新型隱球菌、克柔假絲酵母、葡萄牙假絲酵母, 種水平鑒定符合率為80.00%(24/30), 另檢出馬爾尼菲青霉菌9株, 因不做生化鑒定未列入對比。見表2。

      3 討論

      血流感染將會對機體健康造成嚴重的不良影響, 只有明確感染病原菌的類型才可予以及時有效的針對性治療[5, 6]。

      隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展提升, 目前臨床中多使用MALDI-TOF MS進行檢測, 該檢測技術(shù)的主要原理在于通過對比已知菌種建立數(shù)據(jù)庫, 將檢測獲得微生物的蛋白質(zhì)圖譜與數(shù)據(jù)庫中的微生物圖譜進行比較, 以便能夠獲得良好的鑒定結(jié)果[7]。通過臨床實踐可知, 該種檢測方式具有如下優(yōu)勢:①具有簡便的操作方式, 并且無需花費過多的檢測費用;②具有較為快速的檢測能力, 因而無需等待較長時間。

      本研究結(jié)果顯示, 通過使用短期培養(yǎng)法聯(lián)合質(zhì)譜的檢測結(jié)果顯示, 在陽性血培養(yǎng)瓶中, 革蘭陰性菌主要包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌復合菌、陰溝腸桿菌復合群、沙門菌群, 種水平鑒定符合率為94.64%(212/224);革蘭陽性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌, 種水平鑒定符合率為94.62%(88/93)。真菌主要包括白色假絲酵母、熱帶假絲酵母、近平滑假絲酵母、清酒假絲酵母、光滑假絲酵母、新型隱球菌、克柔假絲酵母、葡萄牙假絲酵母, 種水平鑒定符合率為80.00%(24/30)。與Vitek 2 Compact常規(guī)培養(yǎng)標本檢測結(jié)果相比具有較高的準確率, 因而能夠在較大程度上滿足臨床檢測需求。

      綜上所述, MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速鑒定具有較高準確率, 并且具有檢測簡便、時間短等優(yōu)勢, 可作為臨床中首選的檢測方式。但臨床檢測人員仍然需要加強對該種檢測方式的研究, 以便能夠獲得更加準確的檢測結(jié)果, 從而為患者提供更好的服務。

      參考文獻

      [1] 張航烽, 黃文芳. 利用MALDI-TOFMS對血流感染病原菌快速鑒定的研究進展. 中國微生態(tài)學雜志, 2013, 25(2):242-246.

      [2] 方毅, 張景皓, 趙虎. MALDI-TOFMS直接鑒定血培養(yǎng)陽性標本中的病原菌. 老年醫(yī)學與保健, 2017, 23(6):523-527.

      [3] 周道紅, 黎敏, 魯衛(wèi)平. 利用MALDI-TOFMS快速鑒定經(jīng)固體培養(yǎng)基短時培養(yǎng)的陽性血培養(yǎng)物中的病原菌. 國際檢驗醫(yī)學雜志, 2018, 39(22):2746-2749.

      [4] 盛微翔, 吳亮, 史偉峰, 等. 分離膠促凝管聯(lián)合MALDI-TOFMS快速檢測血培養(yǎng)陽性瓶中細菌的探討. 現(xiàn)代診斷與治療, 2017, 28(22):4117-4119.

      [5] 陳峰, 李媛睿, 皇甫昱嬋, 等. 分離膠促凝管聯(lián)合MALDI-TOFMS直接檢測血培養(yǎng)陽性細菌. 檢驗醫(yī)學, 2015, 30(2):113-121.

      [6] 張蓓, 趙麗娜, 韓清珍, 等. 皂素處理聯(lián)合MALDI-TOFMS直接鑒定血培養(yǎng)陽性病原菌. 檢驗醫(yī)學與臨床, 2018, 15(17):

      2525-2528.

      [7] 周志美, 張磊, 吳尚為. 對血流感染實驗室診斷的最新認識. 中華醫(yī)院感染學雜志, 2013, 23(7):1735-1737.

      [收稿日期:2019-07-25]

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