干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷中的應(yīng)用

傅鈺 桂靜 李雄

【摘要】 目的 進(jìn)一步研究干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病診斷中的優(yōu)勢， 為未來進(jìn)一步提高結(jié)核病檢出率奠定基礎(chǔ)。方法 138例患者， 分別接受結(jié)核菌素皮膚過敏試驗與干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗。比較兩種檢查方法診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度;不同結(jié)核病患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷準(zhǔn)確率。結(jié)果 138例患者， 病理確診結(jié)核病42例， 非結(jié)核病96例。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷結(jié)核病的靈敏度為85.71%（36/42）、特異度為90.63%（87/96）， 均高于結(jié)核菌素皮膚過敏試驗的66.67%（28/42）、80.21%（77/96）， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。肺結(jié)核患者27例， 肺外結(jié)核患者15例。肺外結(jié)核患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 高于肺結(jié)核患者的77.78%， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗方法滿足結(jié)核病臨床診斷的需求， 該診斷方法具有更高的陽性檢出率， 并且還具有操作步驟簡單、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)點， 能夠減少誤診、漏診等情況發(fā)生， 為結(jié)核病的早期預(yù)防、早期治療奠定基礎(chǔ)， 因此值得在臨床上做進(jìn)一步推廣。

【關(guān)鍵詞】 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù);結(jié)核病;結(jié)核菌素皮膚過敏試驗

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.042

現(xiàn)階段， 結(jié)核病作為臨床常見病， 已經(jīng)成為全世界不容忽視的醫(yī)療衛(wèi)生問題， 該疾病具有多樣臨床表現(xiàn)， 隨著疾病發(fā)展往往會累及全身， 威脅生命， 因此為了保證預(yù)后， 需要及早診斷， 并根據(jù)結(jié)核病發(fā)展情況采取針對性治療手段[1， 2]。本中心通過長期實踐發(fā)現(xiàn)， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)是一種科學(xué)的診斷方法， 在結(jié)核病等疾病診斷中的意義重大， 因此本文為進(jìn)一步評價干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病中的應(yīng)用價值， 現(xiàn)選取本中心收治的138例患者作為研究對象， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本中心于2018年2月～2019年4月收治的138例患者作為研究對象， 其中男83例， 女45例;平均年齡（46.9±5.3）歲。

1. 2 方法 患者分別接受干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)診斷、結(jié)核菌素皮膚過敏試驗診斷。其中在結(jié)核菌素皮膚過敏試驗中， 采用Moutax方法， 取0.25 ml

吐溫80的結(jié)核菌素注入到患者前臂掌側(cè)面， 在注射后的2～3 d時間內(nèi)測量直徑， 若測量結(jié)果顯示面積>10 mm

則認(rèn)為是陽性。之后對兩組患者實施干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)診斷， 采集5 ml靜脈血后， 通過肝素抗凝管， 選擇Qiagen公司提供的試劑盒， 根據(jù)試劑盒的內(nèi)容對患者血液樣本進(jìn)行分析。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較兩種檢查方法診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度;不同結(jié)核病患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷準(zhǔn)確率。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩種檢查方法診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度比較

138例患者， 病理確診結(jié)核病42例， 非結(jié)核病96例。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷結(jié)核病的靈敏度為85.71%（36/42）、特異度為90.63%（87/96）， 均高于結(jié)核菌素皮膚過敏試驗的66.67%（28/42）、80.21%（77/96）， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 不同結(jié)核病患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷準(zhǔn)確率比較 肺結(jié)核患者27例， 肺外結(jié)核患者

15例。肺外結(jié)核患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 高于肺結(jié)核患者的77.78%， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

目前我國非結(jié)核病的發(fā)病率居高不下， 對居民生命安全構(gòu)成研究威脅， 同時我國現(xiàn)階段結(jié)核病的發(fā)現(xiàn)率較低， 導(dǎo)致結(jié)核病傳染的幾率增加， 因此在當(dāng)前臨床上， 快速診斷與治療是結(jié)核病防控的關(guān)鍵。根據(jù)當(dāng)前臨床經(jīng)驗可知， 各地區(qū)均以實驗室細(xì)菌學(xué)檢驗作為臨床診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)， 且通過各類實驗室檢查也可以發(fā)現(xiàn)結(jié)核病病菌， 而傳統(tǒng)診斷方法中的抗酸染色圖片敏感度僅為50%左右， 分枝桿菌培養(yǎng)則需要近

1個月的時間， 存在培養(yǎng)耗時長、效率低、陽性檢出率不滿意等問題[3-5]。所以為了進(jìn)一步改善結(jié)核病患者

預(yù)后， 尋找一種科學(xué)的診斷方法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的重點內(nèi)容。

本研究結(jié)果顯示：干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷結(jié)核病的靈敏度為85.71%（36/42）、特異度為90.63%（87/96）， 均高于結(jié)核菌素皮膚過敏試驗的66.67%（28/42）、80.21%（77/96）， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)是在酶聯(lián)免疫檢測法基礎(chǔ)上逐漸發(fā)展而來的新方法， 通過對抗原或抗體進(jìn)行檢測， 在獲得患者血清后， 對酶復(fù)合物做常規(guī)稀釋， 并結(jié)合說明書內(nèi)容識別診斷檢驗中的陰性或陽性結(jié)果對患者疾病情況進(jìn)行判斷。而干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)則在原有技術(shù)體系上進(jìn)行了優(yōu)化， 通過試劑盒避免了傳統(tǒng)實驗室檢驗中復(fù)雜的步驟， 醫(yī)師可以按照說明書的步驟合理安排各個試驗步驟， 能夠在短時間內(nèi)對血清中的部分物質(zhì)進(jìn)行判斷， 因此與傳統(tǒng)診斷檢測技術(shù)相比， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)無論是在效率還是在準(zhǔn)確性方面都有明顯的提高[6-8]?，F(xiàn)代研究認(rèn)為， 結(jié)核病感染T細(xì)胞檢測的主要刺激源為特異性抗原， 因此在臨床診斷期間， 通過酶聯(lián)免疫的方法確診結(jié)核病感染具有可行性[2]。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)作為一種新的診斷技術(shù)， 最初在被英國學(xué)者建立后， 目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用在歐美等西方發(fā)達(dá)資本主義國家中， 成為結(jié)核感染診斷的常見方法。在本次研究中， 本文通過γ-干擾素檢測試劑盒即干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)能夠精準(zhǔn)檢測結(jié)核分歧桿菌感染情況， 其整體特異度與靈敏度較高， 因此具有廣闊的應(yīng)用前景。而相比之下， 結(jié)核菌素皮膚過敏試驗雖然已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用在臨床診斷結(jié)核病中， 但是受卡介苗影響， 導(dǎo)致在結(jié)核菌素皮膚過敏試驗中會出現(xiàn)較高的假陽性率， 整個診斷技術(shù)對于免疫抑制患者缺乏足夠的靈敏度， 造成檢出準(zhǔn)確率下降[9]， 例如本次研究結(jié)果證明， 結(jié)核病患者接受結(jié)核菌素皮膚過敏試驗診斷存在不足。

相比之下， 近幾年以干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)為代表的新型免疫學(xué)方法已經(jīng)在臨床上得到廣泛的應(yīng)用， 現(xiàn)代研究均證明， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)對于結(jié)核桿菌具有較高的特異性， 在獲得疑似結(jié)核病患者血液樣本之后， 能夠?qū)κ軝z者進(jìn)行全血檢測， 通過識別γ干擾素水平變化， 進(jìn)而對患者身體狀況作出詳細(xì)判斷， 判斷是否發(fā)生結(jié)核桿菌感染等情況。在本次研究中， 本文在干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)診斷期間， 通過Qiagen公司的試劑盒進(jìn)行檢測， 該試劑盒的主要通過利用CFP-10、ESAT-6， 并將其作為診斷結(jié)核桿菌的抗原， 通過對患者血液樣本中的抗原特異性T細(xì)胞進(jìn)行刺激， 避免患者發(fā)生免疫應(yīng)答， 最終為疾病臨床診斷提供一種科學(xué)有有效方法。在結(jié)核病診斷期間， 上述整個診斷過程的抗原編碼主要來源于RD-1， 該物質(zhì)作為結(jié)核分歧桿菌基因中所包含的一種基因片段， 可以反映患者身體情況， 包含了卡介苗在內(nèi)的所有分歧桿菌， 而相對應(yīng)的肺結(jié)核分歧桿菌是不存在的， 這就決定了在結(jié)核病診斷中可以保持較高的靈敏度， 因此在臨床上可以通過干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)有效區(qū)分卡介苗與結(jié)核分歧桿菌， 保證了診斷質(zhì)量[10]。所以在疾病臨床診斷期間， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)可以幫助醫(yī)師快速確診結(jié)核病， 尤其是在肺外結(jié)核病診斷中的效果更顯著， 具有極高的靈敏度， 本研究結(jié)果顯示：肺外結(jié)核患者干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗診斷準(zhǔn)確率為100.00%， 高于肺結(jié)核患者的77.78%， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）對于肺外結(jié)核病患者， 診斷期間可以根據(jù)肺部以外臟器中發(fā)生結(jié)核病病變之后判斷疾病發(fā)展情況。而臨床上針對這種情況， 多數(shù)學(xué)者針對肺外結(jié)核病的臨床診斷問題進(jìn)行了研究， 結(jié)果顯示影像學(xué)檢查技術(shù)（如X線胸片）難以正確評估患者疾病發(fā)展， 大部分檢查結(jié)果提示胸部正常;而相比之下， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)能夠快速識別患者體內(nèi)γ干擾素反應(yīng)水平， 通過對T細(xì)胞介導(dǎo)情況作出判斷， 并以其中關(guān)鍵生化指標(biāo)變化來判斷患者疾病發(fā)展， 保證具有較高的靈敏度[3]。從本次研究結(jié)果來看， 通過干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗方法可以取得滿意的診斷結(jié)果， 與傳統(tǒng)方法相比， 該技術(shù)在臨床診斷結(jié)核病期間的檢出率更高， 對相關(guān)病原體的敏感度更強， 因此檢出率滿意， 符合臨床干預(yù)的需求。

也有學(xué)者通過詳細(xì)研究發(fā)現(xiàn)， 臨床上針對結(jié)核潛伏感染或者合并免疫系統(tǒng)疾病患者， 通過干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)依然可以保持較高的陽性檢出率， 并且從相關(guān)地區(qū)的應(yīng)用情況可知， 該技術(shù)已經(jīng)有替代傳統(tǒng)結(jié)核菌素皮膚過敏試驗診斷的趨勢， 進(jìn)一步論證該技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景[4]。

從相關(guān)人員的研究情況來看， 也有學(xué)者針對干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)的臨床應(yīng)用先進(jìn)性展開分析， 并取得了一定成果。文獻(xiàn)[5]在相關(guān)問題研究中， 以100例患者為研究對象， 在根據(jù)患者疾病類型進(jìn)行分組之后， 分別對患者采取了干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)檢驗與結(jié)核抗體試驗， 研究結(jié)果證明， 肺外結(jié)核病組的20例患者， 在經(jīng)過干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)檢測后， 其陽性率為85.0%;而在經(jīng)過結(jié)核抗體試驗后， 其檢出率僅為55.0%， 因此認(rèn)為干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)具有理想的應(yīng)用價值， 這與本文的研究結(jié)果是相同的。

綜上所述， 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗方法滿足結(jié)核病臨床診斷的需求， 該診斷方法具有更高的陽性檢出率， 并且還具有操作步驟簡單、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)點， 能夠減少誤診、漏診等情況發(fā)生， 為結(jié)核病的早期預(yù)防、早期治療奠定基礎(chǔ)， 因此值得在臨床上做進(jìn)一步推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 李洪， 徐明芝， 陳汝滿， 等. 結(jié)核γ干擾素釋放試驗酶聯(lián)免疫試管法和結(jié)核菌素皮試試驗對行維持性血液透析合并結(jié)核患者的診斷和預(yù)后判斷價值研究. 中國全科醫(yī)學(xué)， 2018， 21（36）：57-63.

[2] 孫超， 李磊， 王穎， 等. ELISPOT（酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)）對肺結(jié)核診斷價值的Meta分析. 口岸衛(wèi)生控制， 2018， 23（5）：37-44.

[3] 劉濤， 馮曉梅. γ-干擾素體外釋放試驗在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價值. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生， 2018， 34（3）：32-34.

[4] 段月庭， 畢科研， 解金磊， 等. 酶聯(lián)免疫斑點法聯(lián)合肺泡灌洗液結(jié)核菌Xpert檢測在涂陰肺結(jié)核的診斷價值. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2018， 39（12）：58-60， 64.

[5] 呂永強. 體外釋放酶免疫技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌的臨床應(yīng)用分析. 中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理， 2016， 7（23）：162-163.

[6] 李娜， 邱珊， 李惠玲， 等. 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷中的應(yīng)用. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2017， 27（12）：108-110.

[7] 張艷， 夏強， 岳永寧， 等. 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫法在結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2014， 24（9）：91-93.

[8] 彭春仙， 劉小香， 盧偉力， 等. 不同干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫試劑在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價值比較. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2016， 26（12）：1699-1701.

[9] 陳芳， 魏毅， 陳彬， 等. 干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫法在痰涂片和痰培養(yǎng)均陰性肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2014， 24（7）：949-950， 953.

[10] 朱丹梅， 王欣. 結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素體外釋放試驗（酶聯(lián)免疫法）與其他兩種方法的比較. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘：電子版， 2014， 14（21）：117.

[收稿日期：2019-10-16]