杜丹超 蒲占湑 胡秀榮 呂 佳 劉順民 張利平 黃振東

（浙江省柑橘研究所 臺(tái)州 318026）

柑橘栽種過程中，樹體及柑橘果實(shí)在生長(zhǎng)發(fā)育和采后貯存期易遭受多種病害的侵染，其中真菌性病害最為嚴(yán)重。主要的真菌性病害有生產(chǎn)期的柑橘黑點(diǎn)病、柑橘褐斑病、柑橘炭疽病等，儲(chǔ)藏期真菌性病害有柑橘蒂腐病、柑橘青綠霉病、柑橘黑斑病等。真菌性病害不僅影響樹勢(shì)生長(zhǎng)，對(duì)柑橘品質(zhì)、外觀也有較大影響，對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)造成巨大的損害。

目前，化學(xué)防治仍是柑橘真菌性病害最經(jīng)濟(jì)、有效的防治手段。代森錳鋅、咪鮮胺等常規(guī)化學(xué)藥劑的大量使用，在多個(gè)柑橘種植區(qū)已出現(xiàn)防效降低的現(xiàn)象，這可能與病原真菌抗藥性增強(qiáng)有關(guān)[1，2]。因此篩選無交互抗性的新型高效藥劑勢(shì)在必行。氟啶胺是較為安全的保護(hù)型殺菌劑，屬2，6-二硝基苯胺類化合物，是一種氧化磷酸化作用的解偶聯(lián)劑，殺菌機(jī)制獨(dú)特、殺菌譜廣[3]，對(duì)草莓灰霉病、梨輪紋病、小麥赤霉病等真菌病害防治效果顯著[4～6]。目前國(guó)內(nèi)還未有氟啶胺防治柑橘真菌性病害的報(bào)道，本研究測(cè)定氟啶胺、咪鮮胺對(duì)柑橘炭疽病菌、柑橘黑點(diǎn)病菌、柑橘黑腐病菌等多種病原真菌的毒力作用，以期為柑橘真菌性病害低毒高效無抗性防治藥劑的選擇提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試藥劑和菌株

500g/L氟啶胺懸浮劑（先正達(dá)集團(tuán)提供）；450g/L咪鮮胺（安道麥馬克西姆有限公司提供）；柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、柑橘褐斑病菌（Alternaria alternate）、柑橘綠霉病菌（Penicillium digitatum）、柑橘褐色蒂腐病菌（phomopsis cytosporella）等 7種病原真菌，為2015～2019年分離并保存于浙江省柑橘研究所。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，無菌水1000ml。

1.3 帶藥培養(yǎng)基制備

將氟啶胺和咪鮮胺溶于無菌水，配成母液。采用倍半稀釋法制備含藥培養(yǎng)基平板，氟啶胺含藥培養(yǎng)基平板中的最終質(zhì)量濃度為0.0031， 0.0062， 0.0125， 0.025， 0.05mg/L。咪鮮胺的最終質(zhì)量濃度為 0.0125， 0.025，0.05， 0.1， 0.2mg/L。以加無菌水制成的PDA平板作空白對(duì)照。

1.4 殺菌劑對(duì)柑橘病原真菌抑制率測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法，將柑橘蒂腐病菌、柑橘青霉病菌等 7株病原真菌接種于PDA培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 5 d后，于菌落邊緣打取 5mm直徑的菌餅，分別接種于帶藥PDA培養(yǎng)基平板上，以不含殺菌劑處理為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)三次。

將接菌后的平板于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)，當(dāng)對(duì)照菌落直徑長(zhǎng)至培養(yǎng)皿 2/ 3時(shí)，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，根據(jù)公式計(jì)算殺菌劑對(duì)柑橘病原真菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率[7]。菌絲生長(zhǎng)抑制率=[1-（處理菌落直徑-菌餅直徑）/（對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）]×100%。以抑制率概率值為縱坐標(biāo)繪制毒力回歸曲線，根據(jù)毒力回歸方程求出殺菌劑的有效抑制中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

由表 1、表 2可知，在測(cè)試范圍濃度內(nèi)，氟啶胺、咪鮮胺對(duì) 7種柑橘病原真菌的菌絲生長(zhǎng)均有較好的抑制作用。氟啶胺對(duì)柑橘黑腐病原菌、柑橘褐斑病原菌、柑橘蒂腐病原菌和柑橘黑點(diǎn)病原菌的抑制效果要高于咪鮮胺，其中對(duì)柑橘黑點(diǎn)病原菌、柑橘蒂腐病原菌的抑制效果最好，EC50分別為 0.004mg/L和 0.008mg/L，其次為柑橘黑腐病原菌和柑橘褐斑病菌。而咪鮮胺對(duì)柑橘黑斑病原菌和柑橘綠霉病原菌的菌絲生長(zhǎng)抑制效果要高于氟啶胺。

表1 氟啶胺對(duì)多種柑橘病原真菌菌絲生長(zhǎng)的毒力作用

表2 咪鮮胺對(duì)多種柑橘病真原菌菌絲生長(zhǎng)的毒力作用

3 討論

抑制植物組織內(nèi)的菌絲生長(zhǎng)是病害防治的一種重要方法，本文測(cè)定的 2種殺菌劑氟啶胺和咪鮮胺對(duì) 7種柑橘病原真菌菌絲生長(zhǎng)抑制效果明顯。從毒力數(shù)據(jù)來看，相較于咪鮮胺，氟啶胺對(duì)柑橘黑點(diǎn)病菌(Diaporthe citri)（采后柑橘褐色蒂腐病菌)室內(nèi)毒力效果最為顯著，對(duì)柑橘褐斑病菌(Alternaria alternate)(采后柑橘黑腐病菌)抑制效果較好。多年研究數(shù)據(jù)表明二硫代氨基甲酸鹽酯類和銅制劑類保護(hù)性殺菌劑對(duì)柑橘黑點(diǎn)病菌室內(nèi)菌絲生長(zhǎng)抑制效果低于咪鮮胺、嘧菌酯等內(nèi)吸性殺菌劑，但田間防效確卻高于咪鮮胺等內(nèi)吸性殺菌劑[8～-10]。氟啶胺是一種吡啶胺類保護(hù)性殺菌劑，作為線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，通過作用于ATP合成酶，在呼吸鏈的尾端解除氧化與磷酸化的關(guān)聯(lián)，能最大程度消耗電子傳遞積累的電化學(xué)勢(shì)能，較低濃度就能達(dá)到理想見效[11]，已有研究表明其具有持效期長(zhǎng)、耐雨水沖刷、低抗藥性風(fēng)險(xiǎn)、低環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)且與多類殺菌劑無交互抗性等特性[12～14]?；蚩煽紤]將氟啶胺作為柑橘真菌性病害防治殺菌劑的候選藥劑，特別是用于柑橘黑點(diǎn)病和柑橘褐斑病的防治，因此下一步可有選擇的開展田間實(shí)際防效實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行防治效果、藥劑使用劑量、間隔期、農(nóng)藥殘留等研究。