HPLC-MS/MS法測(cè)定32%肟菌·咪鮮胺水乳劑 有效成分含量

肟菌酯(trifloxystrobin)是由瑞士諾華公司研制、 拜耳公司開(kāi)發(fā)的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，其殺菌譜廣、殺菌活性高[1]。咪鮮胺(prochloraz)是由Boots公司合成的廣譜高效的咪唑類殺菌劑，具有向頂傳導(dǎo)活性，通過(guò)抑制麥角甾醇的生物合成達(dá)到破壞菌體細(xì)胞膜而發(fā)揮作用[2]。32%肟菌·咪鮮胺水乳劑是肟菌酯與咪鮮胺的混配制劑，主要登記用于棗樹(shù)炭疽病的防治，不僅可有效提高防治炭疽菌的效果，同時(shí)還可降低病害對(duì)單一有效成分肟菌酯和咪鮮胺的抗性風(fēng)險(xiǎn)。

目前關(guān)于肟菌酯的檢測(cè)方法有高效液相色譜法[3-4]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5-6]，咪鮮胺的檢測(cè)方法有液相色譜法[7-8]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9]，均為肟菌酯或咪鮮胺單一組分或與其他農(nóng)藥同時(shí)檢測(cè)的方法。然而，有關(guān)對(duì)肟菌酯和咪鮮胺同時(shí)進(jìn)行分析檢測(cè)的方法暫未見(jiàn)報(bào)道?；诖?，本研究以32%肟菌·咪鮮胺水乳劑為研究對(duì)象，采用HPLC-MS/MS法開(kāi)展了同時(shí)檢測(cè)制劑產(chǎn)品中肟菌酯和咪鮮胺的方法研究。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑

肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心)；咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%，上海市農(nóng)藥研究所有限公司)；32%肟菌·咪鮮胺水乳劑(湖南澤豐農(nóng)化有限公司)；甲醇(色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；甲酸(UPLC/LC-MS級(jí)，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；超純水(電阻率18.2 MΩ·cm)。

1.2 儀器

1290-6470A型液質(zhì)聯(lián)用儀配Masshunter色譜數(shù)據(jù)處理工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；XSE205DU型電子天平(梅特勒公司)；明澈超純水制備系統(tǒng)(Merck Millipore)。

1.3 色譜操作條件

1.3.1 液相色譜操作條件

色譜柱為Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×50 mm，2.7 μm)；進(jìn)樣體積：5.0 μL；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：A-甲醇；B-0.1%甲酸水；洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 MS操作條件

電噴霧離子源(ESI+)，干燥氣N2，干燥氣溫度300 ℃，干燥氣流速5 L/min，鞘氣N2，鞘氣溫度250 ℃，鞘氣流速11 L/min，霧化器壓力(Nebulizer) 45 psi，噴嘴電壓500 V，毛細(xì)管電壓(Capillary) 3 500 V；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)，離子采集參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 MRM離子采集參數(shù)

上述操作條件是典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。肟菌酯和咪鮮胺標(biāo)樣定性定量離子圖譜見(jiàn)圖1~2，32%肟菌·咪鮮胺水乳劑樣品中肟菌酯和咪鮮胺典型圖譜見(jiàn)圖3。

圖1 肟菌酯標(biāo)樣定性定量離子流色譜圖

圖3 32%肟菌·咪鮮胺水乳劑樣品中肟菌酯和咪鮮胺典型圖譜

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取0.010 01 g肟菌酯標(biāo)樣、0.010 03 g咪鮮胺標(biāo)樣于2個(gè)不同的100 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得到肟菌酯、咪鮮胺質(zhì)量濃度分別為99.00、99.40 mg/L的標(biāo)樣溶液。分別取肟菌酯標(biāo)樣溶液1.0 mL、咪鮮胺標(biāo)樣溶液3.0 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋定容至刻度，得到肟菌酯、咪鮮胺質(zhì)量濃度分別為990、2 982 μg/L的混合標(biāo)樣溶液。取該混合標(biāo)樣溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到肟菌酯、咪鮮胺質(zhì)量濃度分別為9.90、29.82 μg/L的混合標(biāo)樣液，用甲醇-水(體積比50/50)溶液將上述混合標(biāo)樣液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

圖2 咪鮮胺標(biāo)樣定性定量離子流色譜圖

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取約含0.125 3 g的32%肟菌·咪鮮胺水乳劑試樣于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得到試樣母液；用甲醇-水(體積比50/50)稀釋試樣母液至適當(dāng)?shù)臐舛取?/p>

1.4.3 測(cè)定

在1.3節(jié)儀器操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針肟菌酯(咪鮮胺)峰面積響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中目標(biāo)物(肟菌酯、咪鮮胺)峰面積進(jìn)行平均，試樣中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中目標(biāo)物峰面積的平均值；A2為試樣溶液中目標(biāo)物峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；ω1為標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 分析方法的線性相關(guān)性

按1.3節(jié)儀器操作條件對(duì)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行分析測(cè)定。以肟菌酯(咪鮮胺)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，肟菌酯(咪鮮胺)峰面積為縱坐標(biāo)，得其線性方程及相關(guān)系數(shù)，肟菌酯：y=8 784.04x+25.63，R2=0.999 1；咪鮮胺：y=22 118.87x-76.77，R2=0.999 6，說(shuō)明肟菌酯和咪鮮胺在對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2 分析方法的精密度

從同一水乳劑產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，于上述1.3節(jié)儀器操作條件下分析測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。肟菌酯和咪鮮胺的變異系數(shù)分別為0.66%和0.57%。

表3 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3 分析方法的準(zhǔn)確度

稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的32%肟菌·咪鮮胺水乳劑試樣5個(gè)，分別定量加入肟菌酯和咪鮮胺標(biāo)樣，于上述1.3節(jié)儀器操作條件下分析測(cè)定，肟菌酯平均回收率為101.01%，咪鮮胺平均回收率為100.50%，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文采用HPLC-MS/MS建立了一種同時(shí)檢測(cè)32%肟菌·咪鮮胺水乳劑中2種有效成分的定性定量分析方法。該方法線性關(guān)系好、精密度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，且操作簡(jiǎn)單快速，可以滿足32%肟菌·咪鮮胺水乳劑農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的要求。