金縷半楓荷莖枝正丁醇部位的化學(xué)成分研究

張紀(jì)越 曾令峰 靳永亮 盛天露 劉峰 劉華

摘? 要：金縷半楓荷是中國特產(chǎn)的稀有樹種，其根皮是治療骨性關(guān)節(jié)炎的傳統(tǒng)中藥。為保護(hù)稀有的半楓荷資源不被破壞，本課題對金縷半楓荷莖枝的乙醇提取物用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等溶劑進(jìn)行萃取，并采用硅膠柱色譜，反相ODS柱色譜（30%～100%甲醇），LH-20羥丙基葡聚糖凝膠柱色譜、重結(jié)晶等方法進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離，并根據(jù)理化性質(zhì)及1H-NMR，13C-NMR波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。此次報(bào)道從正丁醇部位得到的四個化合物，分別為3，3′-dimethyl ellagicacid-4'-O-β-D- glucopyranoside（1），棕櫚酸（2），齊墩果酸（3）和β-谷甾醇（4）?；衔?為首次從該植物中分離得到。

關(guān)鍵詞：金縷半楓荷;化學(xué)成分;骨性關(guān)節(jié)炎

Abstract： Altingia chingii Metc. is a rare tree species produced in China， and its root bark is a traditional Chinese medicine for the treatment of osteoarthritis. In order to protect the rare semi-maple lotus resources from being destroyed， the ethanol extract from the stem branch of Altingia chingii Metc.was extracted with petroleum ether， ethyl acetate and n-butanol， and the chemical components in it were systematically separated by silica gel column chromatography， reversed-phase ODS column chromatography （30%～100% methanol）， LH-20 hydroxypropyl dextran column chromatography， recrystallization and other methods. According to the physical and chemical properties and 1H-NMR， 13C-NMR spectrum data， the structure of the compound was identified. Four compounds isolated from n-butanol were identified as 3，3′- dimethyl ellagicacid - 4' -O-β-D- glucopyranoside （1）， palmitic acid （2）， oleanolic acid （3） and β-sitosterol （4）. Compound 1 was isolated from this plant for the first time.

骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）即風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，是一種骨關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)發(fā)生廣泛退行性改變的中老年性多發(fā)病，是全球范圍內(nèi)的常見病與多發(fā)病之一[1]，屬中醫(yī)學(xué)骨痹、膝痛范疇，發(fā)病率隨年齡增長而升高，好發(fā)于中、老年人群，在我國的發(fā)病率為9%～13%。目前臨床上用于治療OA疾病的非甾類抗炎藥（NSAIDs）和改善病情的抗風(fēng)濕藥物（DMARDs）各有不同的毒性作用，不能長期服用。所以尋找療效好、毒副作用低的抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物， 具有相當(dāng)?shù)木o迫性。

金縷半楓荷（Semiliquidambar cathayensis Chang），又名半楓荷，為金縷梅科半楓荷屬植物，系中國特產(chǎn)的稀有樹種，分布于江西、貴州、廣西、廣東及海南等地。由于自然分布區(qū)域局限性，已被列入中國瀕危植物紅皮書《中國珍惜瀕危植物》[2]。金縷半楓荷是治療骨關(guān)節(jié)病的良藥，被譽(yù)為藥用植物中的國寶。據(jù)《中藥大辭典》記載，金縷半楓荷性味甘、淡、溫，能活血通絡(luò)，祛風(fēng)除濕，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腰肌勞損，半身不遂，跌打瘀積、腫痛、產(chǎn)后風(fēng)癱，外傷常用于止血。傳統(tǒng)是根及樹皮入藥，遭剝皮挖根，過度采伐，導(dǎo)致生物種群數(shù)量面臨嚴(yán)重的危脅[3]。此項(xiàng)目目標(biāo)是研究其莖枝是否有和根、皮有同樣的祛風(fēng)除濕功效，這樣就可以使半楓荷保護(hù)資源不被破壞。因藥材珍稀不易采集，長期以來對半楓荷缺乏系統(tǒng)的研究，對這一傳統(tǒng)藥材的有效成分分析不足，無法確認(rèn)其良好的臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

目前對金縷半楓荷的化學(xué)成分的研究較少，只有周光雄等[4]（2002）從金縷半楓荷根的乙酸乙酯部位分離鑒定了9個化合物、盧海嘯等[5]（2015）從半楓荷根的石油醚部位和乙酸乙酯萃取部位分離得到的11個化合物。藥理研究也僅楊武亮等[6]（1999）發(fā)現(xiàn)金縷半楓荷根的醇提物有鎮(zhèn)痛抗炎作用;廖娜等[7]（2019）進(jìn)行了金縷半楓荷多酚提取物的抗氧化抗菌活性研究。

為明確金縷半楓荷的莖枝治療骨性關(guān)節(jié)炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，此項(xiàng)目對金縷半楓荷莖枝用95%乙醇進(jìn)行提取，并對得到的提取物浸膏用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取。采用硅膠柱色譜，反相ODS柱色譜（30%～100%甲醇），LH-20羥丙基葡聚糖凝膠柱色譜、重結(jié)晶等方法進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離，并根據(jù)理化性質(zhì)及1H-NMR，13C-NMR波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。此次報(bào)道從正丁醇部位分離得到的四個化合物：3，3′-dimethyl ellagicacid-4'-O-β-D-glucopyranoside（1），棕櫚酸（2），齊墩果酸（3）和β-谷甾醇（4），化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示。其中化合物（1）為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

2695 Alliance Separations Module 型高效液相色譜儀和1525 型制備高效液相色譜儀[LichrospherC18制備液相色譜柱（30mm×250mm，10μm）]（美國Waters公司），Inova-600型超導(dǎo)核磁共振波譜儀（美國Varian公司），WFH-203（ZF-1）型三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司），AE100型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。LH-20羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，瑞典GE Healthcar公司），柱色譜及薄層色譜用硅膠（200目，青島海洋化工廠產(chǎn)品），ODS柱色譜填料（50μm，日本YMC公司），提取分離用試劑均為分析純，制備HPLC用甲醇為色譜純（西隴化工股份有限公司），水為三蒸水。

金縷半楓荷莖原藥材，采于江西中醫(yī)藥大學(xué)撫生校區(qū)植物園，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物學(xué)科組賴學(xué)文教授鑒定為金樓半楓荷Semiliquidam barcathayensis Chang，憑證標(biāo)本保存于江西中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本室。

2 提取分離

金縷半楓荷干燥的莖枝，切段陰干后粉碎，過20目篩，用十倍量的95%乙醇回流提取4次，每次3h。合并提取液，減壓回收溶劑得總浸膏?？偨嗉诱麴s水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到4個萃取部位。本次報(bào)道的正丁醇部位的分離是將正丁醇部位加水混懸后，用100～200目硅膠干法上柱，通過硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇（100∶0、100∶20、80∶20、70∶30、50∶50、10∶100、0∶100）梯度洗脫，合并得到5個餾份。再經(jīng)硅膠色譜、ODS、Sephadex LH-20、分析型高效液相色譜、制備型高效液相色譜等手段，分離純化得到化合物3，3′- dimethyl ellagicacid-4'-O-β-D- glucopyranoside （1）， 棕櫚酸（2）， 齊墩果酸（3），和 β-谷甾醇（4）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色粉末（甲醇）。m.p.300℃。EI-MSm/z：394[M]+。1H-NMR（600MHz，DMSO-d6）δ：7.71（1H，s，H-5′），7.52（1H，s，H-5），4.03（3H，s，-OCH3），4.06（3H，s，-OCH3），5.47（1H，d，J=6.5 Hz，H-1″）;C-NMR（150MHz，DMSO-d6）δ：111.6（C-1），142.1（C-2），142.2（C-3），153.3（C-4），112.1 （C-5），113.3（C-6），158.9（C-7），114.6（C-1′），141.4（C-2′），140.6（C-3′），152.0（C-4′），112.3（C-5′），112.4（C-6′），158.8（C-7′），101.8 （C-1″），73.8（C-2″），77.0（C-3″），70.0（C-4″），77.7（C-5″），62.1（C-6″），61.5（-OCH3），61.0（-OCH3）。以上EI-MS，1H-NMR和13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物1為3，3′-dimethyl ellagic acid-4'-O-β-D-gluco-pyranoside。此化合物為首次從金縷半楓荷中分離得到。

化合物2 白色粉末（氯仿）。EI-MSm/z：256[M]+，化學(xué)式為C16H32O2。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：2.27（2H，m，H-2），1.56（2H，m，H-3），1.18（24H，m，H-4～15），0.81（3H，m，H-16）。13C-NMR（150MHz，CDCl3）δ：180.5（C=O），34.1（C-1），24.7（C-2），29.1～29.7（C-3-12），31.9（C-13），22.7（C-14），14.1（C-15）。以上EI-MS，1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物2為棕櫚酸（palmitic acid）。

化合物3 白色粉末（氯仿-甲醇）。m.p.249～250℃。Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。EI-MSm/z：456[M]+?；瘜W(xué)式為C30H48O3。1H-NMR（CD3COCD3，500MHz）δ：0.76，0.78，0.90，0.92，0.97，1.18，2.04（各3H，8，7×CH3），5.27（1H，brs，H-12）。12C-NMR（CDCl3，125MHz） δ：39.3（C-1），28.1（C-2），78.6（C-3），40.2（C-4），56.2（C-5），19.1（C-6），33.7（C-7），39.5（C-8），48.5（C-9），37.8（C-10），23.8（C-11），123.0（C-12），144.9（C-13），42.2（C-14），28.1（C-15），23.9（C-16），46.9（C-17），42.5（C-18），46.8（C-19），30.3（C-20），34.4（C-21），31.3（C-22），28.4（C-23），16.3（C-24），15.8（C-25），17.6（C- 26），26.2（C-27），178.8（C-28），33.6（C2-9），24.1（C-30）。以上EI-MS，1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道對照基本一致，故確定化合物3為齊墩果酸（oleanolic acid）。

化合物4 無色針狀晶體（甲醇）。m.p.138～140℃。EI-MSm/z：414[M]+?；瘜W(xué)式為C29H50O。10%硫酸-乙醇顯紫紅色;Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。經(jīng)TLC分析與β-谷甾醇對照品一致，與對照品混合后熔點(diǎn)不下降，故鑒定化合物4為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

4 討論

金縷半楓荷是金縷梅科新發(fā)現(xiàn)的寡種屬植物，為我國特產(chǎn)。它具有楓香屬和蕈樹屬兩屬間的綜合性狀，對研究金縷梅科系統(tǒng)發(fā)育具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值。由于金縷半楓荷的根皮入藥可祛風(fēng)除濕，舒筋活血用，在民間遭剝皮、挖根導(dǎo)致半楓荷的生物數(shù)量面臨嚴(yán)重的威脅。本項(xiàng)目對金縷半楓荷莖枝開展的其它萃取部位的研究正在進(jìn)行中。我們希望利用現(xiàn)代藥學(xué)的研究手段，開展金縷半楓荷莖枝的藥用價(jià)值的研究，對其有效成分進(jìn)行合理的研究利用，既可使其金縷半楓荷得到更好地保護(hù)和合理地利用，也為其臨床治療骨性關(guān)節(jié)炎提供了重要的理論依據(jù)。

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