血清微小RNA-206、微小RNA-590-3p水平與室性心律失?；颊哳A(yù)后的關(guān)系

宮婷 盧長林

100149 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院心臟中心(宮婷)；100020 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院心臟中心(盧長林)；065201 廊坊，河北燕達(dá)醫(yī)院心內(nèi)科(盧長林)

微小RNA(microRNA，miR)參與調(diào)節(jié)多種病理生理過程，如細(xì)胞增殖分化、凋亡、腫瘤發(fā)生等，且在心力衰竭及心肌重構(gòu)中發(fā)揮重要作用[1]。miR-206是一種具有高度保守性和心肌及骨骼肌特異性的miRNA，其靶基因可以舒張血管、保護(hù)缺血心肌，此外還能增強(qiáng)心肌收縮力、促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大，但目前尚無關(guān)于miR-206是否能直接參與室性心律失常及心肌作用調(diào)節(jié)的相關(guān)研究[2]。miR-590-3p有抗纖維化的功能，與膠原生成及心房纖維化有關(guān)[3]。miR-206和miR-590-3p均與心房及心肌作用密切相關(guān)，但關(guān)于二者在室性心律失?；颊哳A(yù)后中作用的研究較少。因此，本研究通過檢測室性心律失常患者血清中miR-206、miR-590-3p水平，探討二者在預(yù)測不良預(yù)后中的應(yīng)用價值，以期為開發(fā)預(yù)測指標(biāo)開辟新思路，同時對降低不良預(yù)后發(fā)生率及患者死亡率有重要意義。

1 對象和方法

1.1 研究對象

本研究為回顧性研究。選取2016年7月至2019年2月于河北燕達(dá)醫(yī)院住院治療的117例室性心律失常患者為研究對象(室性心律失常組)，其中男性69例，女性48例；年齡32～83歲，平均(60.8±12.6)歲；病程1～12年，平均(4.1±0.9)年；室性心律失常類型：血流動力學(xué)穩(wěn)定型62例，血流動力學(xué)不穩(wěn)定型55例；基礎(chǔ)疾病：冠心病46例，肺源性心臟病30例，高血壓性心臟病18例，風(fēng)濕性心臟病12例，擴(kuò)張型心肌病7例，心肌炎4例。同期選取性別、年齡匹配的104例健康體檢者作為對照(對照組)，其中男性59例，女性45例，年齡32～83歲，平均(61.6±12.7)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合室性心律失常診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)資料完整；(3)無心力衰竭、血液系統(tǒng)疾病；(4)對胺碘酮不過敏。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴甲狀腺功能障礙；(2)伴凝血功能異常、器質(zhì)性病變；(3)伴嚴(yán)重肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病；(4)伴惡性腫瘤。所有患者均由兩名及以上主治醫(yī)師明確診斷。本研究資料使用已獲得河北燕達(dá)醫(yī)院許可，并經(jīng)醫(yī)院臨床研究倫理委員會批準(zhǔn)(倫理批號：20160518)。所有研究對象及家屬均由專業(yè)人員詳細(xì)告知研究內(nèi)容并自愿參加，同時簽署知情同意書。

1.2 一般資料收集

查閱門診及住院病歷，收集并記錄所有研究對象的一般資料，包括性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)(body mass index，BMI)、高血壓、高脂血癥和吸煙史、收縮壓和舒張壓水平等。采用全自動生化分析儀檢測受試者血清中低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、三酰甘油(triacylglycerol，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)水平。

1.3 主要試劑與儀器

組織RNA提取試劑盒(貨號：R6688-01)，購自北京鴻躍創(chuàng)新科技有限公司；miScript SYBR?Green qPCR Kit(貨號：218076)，購自德國QIAGEN公司；AceQ qPCR SYBR?Green Mix(貨號：Q111-02)，購自南京諾唯贊生物科技有限公司。ABI 7500實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)儀，購自廣州市百菱生物科技有限公司；TMS-1024型全自動生化分析儀，購自北京邁潤醫(yī)療器械有限公司。

1.4 研究方法

1.4.1 室性心律失常治療及預(yù)后評定 室性心律失?；颊呷朐汉筮M(jìn)行胺碘酮治療。首先10～15 min完成胺碘酮靜注(3～5 mg/kg)，之后以1～1.5 mg/min速率滴注6 h。預(yù)后不良：出現(xiàn)心臟驟?；蛐脑遭溃活A(yù)后良好：癥狀消失或好轉(zhuǎn)，或心電圖顯示轉(zhuǎn)為竇性心律。

1.4.2 樣品采集及保存 所有受試者于清晨空腹采集靜脈血樣，3 000 r/min離心15 min后收集血清，置于-80℃保存待測。

1.4.3 qRT-PCR法檢測血清中miR-206和miR-590-3p 水平 采用RNA提取試劑盒提取血清總RNA，反轉(zhuǎn)錄得cDNA。采用qRT-PCR儀對miR-206、miR-590-3p進(jìn)行擴(kuò)增。qRT-PCR反應(yīng)體系共10 μl：cDNA(50 ng/μl)1 μl，miScript SYBR?Green Mix 5 μl，上下游引物(10 μm)各0.5 μl，ddH2O 3.0 μl，引物由上海生工生物公司合成。miR-206反應(yīng)條件：95℃、5 min，95℃、15 s，60℃、1 min，40個循環(huán)；72℃、10 min。miR-590-3p反應(yīng)條件：95℃、5 min；95℃、15 s；58℃、20 s，40個循環(huán)；72℃、10 min。miR-206、miR-590-3p及內(nèi)參U6的引物序列見表1。采用2-ΔΔCT法對血清miR-206、miR-590-3p表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。

表1 qRT-PCR引物序列

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

室性心律失常組與對照組的性別、年齡、BMI、肌酐、高血壓、高脂血癥和吸煙比例比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)，見表2。

表2 室性心律失常組與對照組一般資料比較

注：BMI：體質(zhì)指數(shù)

2.2 兩組血清miR-206、miR-590-3p水平比較

室性心律失常組患者的血清中miR-206和miR-590-3p水平均顯著高于對照組(3.62±1.43比1.00±0.31，t=18.302，P=0.000；2.54±1.09比1.00±0.27，t=14.028，P=0.000)。

2.3 兩組血壓、血脂水平比較

室性心律失常組患者的收縮壓、舒張壓、TC、TG和LDL-C水平均顯著高于對照組，而HDL-C顯著低于對照組(均為P<0.05)，見表3。

2.4 室性心律失?；颊哐逯衜iR-206、miR-590-3p水平的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，室性心律失?；颊哐逯衜iR-206與miR-590-3p水平呈正相關(guān)(r=0.694，P=0.000)。

表3 室性心律失常組與對照組的血壓、血脂水平比較

注：TC：總膽固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇

2.5 室性心律失?；颊哐逯衜iR-206、miR-590-3p與血壓、血脂水平的相關(guān)性

室性心律失?；颊哐逯衜iR-206、miR-590-3p水平與收縮壓、舒張壓、TC、TG和LDL-C水平均呈正相關(guān)，而與HDL-C水平呈負(fù)相關(guān)(均為P<0.05)，見表4。

表4 室性心律失?；颊哐逯衜iR-206、miR-590-3p

注：TC：總膽固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇

2.6 室性心律失常患者不同預(yù)后組血清中miR-206、miR-590-3p水平比較

根據(jù)預(yù)后情況將室性心律失常患者分為預(yù)后良好組105例和預(yù)后不良組12例。分析顯示，預(yù)后不良組患者血清中miR-206、miR-590-3p水平均顯著高于預(yù)后良好組(3.74±1.27比2.45±0.93，t=4.375，P=0.000；2.65±1.12比1.78±0.46，t=5.117，P=0.000)。

2.7 影響室性心律失?；颊哳A(yù)后不良的多因素分析

將室性心律失常患者是否發(fā)生不良預(yù)后作為因變量，以miR-206、miR-590-3p、收縮壓、舒張壓、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示miR-206、miR- 590-3p和TC是室性心律失常患者預(yù)后不良的危險因素，HDL-C是室性心律失?；颊哳A(yù)后不良的保護(hù)因素，見表5。

表5 影響室性心律失?；颊哳A(yù)后不良的多因素分析

注：TC：總膽固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇

3 討論

心律失常主要包括陣發(fā)性或持續(xù)性室性心動過速、心房顫動、心室顫動、陣發(fā)性室上性心動過速等，較嚴(yán)重的心律失常為室上性或室性心律失常，影響患者生活質(zhì)量[5-6]。隨著醫(yī)療科技進(jìn)步，早期診斷及治療室性心律失常的方法已相對成熟可靠，但心臟驟停、心原性猝死等不良預(yù)后仍常發(fā)生[7]。但目前對室性心律失?；颊卟涣碱A(yù)后的預(yù)測尚屬難題，因此尋找合理有效的預(yù)測指標(biāo)，對降低患者不良預(yù)后發(fā)生率及死亡率有重要指導(dǎo)意義，也是目前許多研究者努力探索的方向。

miRNA除在細(xì)胞增殖、分化和凋亡中發(fā)揮作用外，在心臟發(fā)育及各種生理病理過程中也有重要意義[8]。miR-206及其靶基因——胰島素樣生長因子1與血管舒張、心肌缺血有密切聯(lián)系，且參與部分心肌損傷發(fā)病機(jī)制[9-10]。miR-590-3p與心房纖維化有關(guān)，且參與膠原生成[6]。本研究顯示，室性心律失?；颊哐逯衜iR-206、miR-590-3p水平顯著高于健康對照者，且兩者呈正相關(guān)，預(yù)后不良組患者血清中miR-206、miR-590-3p水平又高于預(yù)后良好組。提示室性心律失常患者血清中miR-206、miR-590-3p呈高水平，二者與室性心律失常病情發(fā)生、發(fā)展有密切聯(lián)系，可能通過影響患者體內(nèi)血管舒張功能，進(jìn)而造成心肌損傷，最終影響病情發(fā)展。并且miR-206、miR-590-3p能在一定程度上反映預(yù)后不良，對于預(yù)測室性心律失常預(yù)后有重要意義。

本研究中室性心律失常組和對照組的性別、年齡等一般資料均無顯著差異，且室性心律失常組的收縮壓、舒張壓、TC、TG和LDL-C顯著高于對照組，HDL-C顯著低于對照組；除HDL-C指標(biāo)外均與miR-206、miR-590-3p水平呈正相關(guān)。提示室性心律失?；颊叩难獕?、血脂水平高于健康人，且與miR-206、miR-590-3p水平呈正相關(guān)，證實(shí)miR-206、miR-590-3p水平與血壓、血脂存在密切聯(lián)系。Logistic回歸分析顯示，miR-206、miR-590-3p和TC是室性心律失?；颊哳A(yù)后不良的危險因素，而HDL-C是保護(hù)因素。臨床上密切監(jiān)測miR-206、miR-590-3p及血壓、血脂水平變化，若存在異常，及時給予室性心律失常患者降壓降脂及改善miR-206、miR-590-3p水平等對癥治療，可有效降低患者不良預(yù)后發(fā)生率及死亡率。

綜上所述，miR-206、miR-590-3p水平變化與室性心律失常發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且能預(yù)測室性心律失?；颊卟涣碱A(yù)后，可作為預(yù)防室性心律失?；颊卟涣碱A(yù)后的監(jiān)測指標(biāo)，對改善患者不良預(yù)后、降低其發(fā)生率及死亡率有重要意義。但作為回顧性試驗(yàn)，本研究只能通過查閱門診及患者病例資料，資料完整性及數(shù)據(jù)質(zhì)量均會對研究結(jié)果造成一定影響，且關(guān)于miR-206、miR-590-3p水平與不同分型、病因室性心律失常是否存在聯(lián)系也有待于后期在多樣本基礎(chǔ)上深入探究，以期為臨床治療提供更充分的科學(xué)依據(jù)。

利益沖突：無