施用生物有機肥對煙草根際土壤微生物區(qū)系的影響

張明宇， 劉高峰， 李小龍， 舒勤靜， 田艷華， 石德興， 王巖

(1.鄭州大學(xué)化工與能源學(xué)院，河南 鄭州 450001；2.南平市煙草公司邵武分公司，福建 邵武 354000)

煙草青枯病是由青枯勞爾氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的一種分布廣泛、具有嚴重危害的細菌性土傳病害[1]，在中國分布也較為廣泛，河南、云南、湖南、廣西、廣東、福建等主要產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生[2]。煙草青枯病的發(fā)生、流行和危害是諸多因素綜合作用的結(jié)果。以往對煙草青枯病的研究和防控主要集中在抗性品種選育、化學(xué)藥劑防控及改善栽培管理等方面[3-5]。雖然各種防控措施均能起到一定效果，但這些防控措施也存在著選育周期長、化學(xué)藥劑造成環(huán)境污染、輪作受土地資源限制等諸多問題[6]。近年來，人們逐漸重視起通過調(diào)控土壤微生物實現(xiàn)生物防控土傳病害的方法，其主要措施是通過施用拮抗菌、有機肥或生物有機肥等調(diào)節(jié)土壤微生態(tài)、改善土壤微生物多樣性、抑制病原菌的生長或提高植物自身抗性，從而抑制土傳病害的發(fā)生[7-8]。分子生物技術(shù)快速發(fā)展和應(yīng)用也為研究微生物群落結(jié)構(gòu)特征提供了廣闊的空間[9]。第2代高通量測序技術(shù)能夠?qū)嶒炇也豢膳囵B(yǎng)的微生物通過16 S/18 S rDNA基因測序的方法檢測出來，對分析微生物群落組成結(jié)構(gòu)和多樣性展現(xiàn)出巨大的優(yōu)勢，已成為研究土壤微生物的重要工具[10-11]。本試驗將生物有機肥施用于煙田以防控?zé)煵萸嗫莶。跈z驗生物有機肥對煙草青枯病的防控效果的同時，探討煙草根際土壤微生物數(shù)量和微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)的變化與青枯病發(fā)生間的關(guān)系，為生物防控?zé)煵萸嗫莶√峁├碚撘罁?jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗地點

試驗地點位于福建省邵武市沿山鎮(zhèn)煙草基地。邵武屬于中亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，日照充足，常年平均降雨量1 800 mm，年平均氣溫18 ℃，試驗地點海拔200～250 m。試驗期間平均氣溫28.5 ℃。

1.2 試驗材料

供試烤煙品種為K 32，供試煙田前茬作物為水稻。供試煙田在移栽前以條溝方式施用牛糞1 500 kg·hm-2，鈣鎂磷肥450 kg·hm-2，移栽時施煙葉專用肥375 kg·hm-2，m(N)∶m(P2O5)∶m(K2O)= 12.5∶8∶22.5，團棵期追施硝酸鉀375 kg·hm-2，旺長期硫酸鉀270 kg·hm-2。煙田土壤類型為沙質(zhì)壤土，土壤pH值為5.2，有機質(zhì)含量為23.7 g·kg-1,堿解氮含量為127.5 mg·kg-1，速效鉀含量為198.1 mg·kg-1，有效磷含量為213.7 mg·kg-1。

1.3 試驗處理

試驗共分為2個處理，每個處理小區(qū)面積為666.7 m2。處理1(T1)為空白處理，按照當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)施肥與管理，即只施煙葉專用肥、化肥、有機肥；處理2(T2)施用生物菌劑(生物菌劑含活菌數(shù)≥109·g-1)45 kg·hm-2(在與對照相同用量的有機肥中加入拮抗菌復(fù)合菌劑，拮抗菌選用解淀粉芽孢桿菌B 1619)。

試驗中土壤樣品編號意義如2Y-1-1中，第1個數(shù)字“1”代表第1次取樣；第2個數(shù)字“1”代表處理1；第3個數(shù)字“1”代表重復(fù)1，其他土壤編號與此意義相同(移栽前樣品為平行樣，不區(qū)分處理與對照)。分別在煙株移栽前、團棵期、旺長期和采摘期采取根際土壤進行可培養(yǎng)微生物數(shù)量測定和16 S rDNA/18 S rDNA基因測序，以及其他理化性狀分析。

1.4 測定內(nèi)容及方法

1.4.1 土樣采集 分別在煙株移栽前、團棵期(移栽后40 d)、旺長期(移栽后70 d)和采收期(移栽后100 d)，采用S型5點取樣法采取煙株根際土壤。取樣時首先去除煙株根部表層土壤，以煙株莖部為中心直徑10 cm左右、深10 cm左右處的土壤進行取樣。取樣后用密封袋低溫封存，部分送往實驗室在4 ℃下冷藏以待微生物數(shù)量測定，部分用15 mL離心管裝滿在低溫保存條件下送往上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司對微生物進行基因測序。

1.4.2 微生物數(shù)量測定 土壤微生物數(shù)量采用涂布平板法測定，細菌、真菌、放線菌數(shù)量分別采用肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、高氏1號培養(yǎng)基進行測定。為了更準(zhǔn)確地比較土壤微生物數(shù)量，在計算時去除土壤中的水分，以干土表示。

1.4.3 病情測定 為了評估生物有機肥在煙株整個生長期內(nèi)對煙草青枯病的防治效果，在煙株移栽后每隔10 d記載發(fā)病情況，統(tǒng)計病情，計算青枯病的發(fā)病率、病情指數(shù)和防控率。青枯病病情指數(shù)的分級調(diào)查按照GB/T 23222—2008煙草病蟲害分級及調(diào)查方法進行。

發(fā)病率 =(發(fā)病株數(shù)/總株數(shù))×100%；

病情指數(shù) =(∑各級病株數(shù)或葉數(shù)×該病級值)/調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)×最高級值)×100；

防治效果=[(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)]×100%

1.4.4 產(chǎn)量統(tǒng)計 煙葉采收烘烤按各處理分別進行。按照GB 2635—1992烤煙對各處理進行煙葉分級，并按照“國家發(fā)展改革委國家煙草專賣局關(guān)于2014年煙葉收購價格政策的通知”中的“2014年烤煙價區(qū)表”和“2014年烤煙收購價格表”計算各處理的中上等煙比例和均價等生產(chǎn)質(zhì)量指標(biāo)。

1.4.5 微生物基因測序 土壤微生物基因測序采用第2代高通量測序技術(shù)，對煙株不同生育時期的土壤樣本進行細菌(16 S rDNA)和真菌(18 S rDNA)序列檢測。DNA 抽提和PCR擴增、 Illumina Miseq 測序、數(shù)據(jù)處理等方法參見陳乾錦等[12]的方法。

1.4.6 微生物Alpha多樣性常用指數(shù)算法 環(huán)境中微生物的多樣性(Alpha)分析可以反映微生物群落的豐度和多樣性變化。常用的指標(biāo)有Sobs 指數(shù)、Shannon指數(shù)、Chao指數(shù)等，其計算公式參見孫慧等[13]的方法。

1.5 數(shù)據(jù)計算與統(tǒng)計分析

微生物數(shù)量采用Excel 2010進行數(shù)據(jù)處理，顯著性分析采用SPSS Statistics 20.0。測序數(shù)據(jù)在上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司提供的I-Sanger生物信息分析云平臺進行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物有機肥對土壤微生物數(shù)量的影響

如表1所示，土壤中細菌數(shù)量在移栽前和團棵期為106cfu·g-1，在旺長期數(shù)量提升一個數(shù)量級達到107cfu·g-1；放線菌數(shù)量維持在105cfu·g-1左右；真菌數(shù)量在104cfu·g-1。在煙株生長發(fā)育各個時期，微生物數(shù)量為細菌>放線菌>真菌，而且基本上相差1個數(shù)量級。

土壤中可培養(yǎng)細菌數(shù)量在移栽前、團棵期、成熟期為106cfu·g-1，而旺長期則超過了107cfu·g-1。從整體上來看，細菌數(shù)量隨著煙株生長而增長，在旺長期達到最高，到成熟期后又有所回落。在團棵期處理組顯著高于對照組，表明施用生物有機肥后細菌可以很好地在根際定殖，但進入旺長期后對照組中細菌數(shù)量反而明顯高于處理。這表明隨著煙株的生長根際微生物區(qū)系發(fā)生了改變。進入成熟期后處理組與對照組間土壤微生物在數(shù)量上的差異已不明顯。

土壤中可培養(yǎng)放線菌數(shù)量基本都在105cfu·g-1以內(nèi)，從整體上來看放線菌數(shù)量同樣呈現(xiàn)出隨著煙株生長而隨之增長，在旺長期達到最多，進入成熟期后略有減少的趨勢。從對照組與處理對比可以看出，進入團棵期后處理組中放線菌數(shù)量明顯低于對照組，表明施用生物有機肥后放線菌在煙株根際土壤中的定殖并不理想。進入旺長期后處理組與對照組之間差異不顯著，但進入成熟期后處理組中的放線菌數(shù)量進一步增多并顯著高于對照組。

表1 生物有機肥對土壤微生物數(shù)量的影響Table 1 Effects of bio-organic fertilizer on soil microorganism quantity

注：不同小寫字母表示同種微生物同一處理不同時期的差異顯著性(P<0.05)；不同大寫字母表示同種微生物同一時期不同處理間差異顯著性(P<0.05)。

Note:Different lowercase letters indicate significant difference between the same microorganism at different stages in the same treatment (P<0.05)；Different capital letters indicate significant difference between different treatments of the same microorganism at the same stage (P<0.05).

土壤中可培養(yǎng)真菌數(shù)量基本都在104cfu·g-1以內(nèi)，真菌數(shù)量在移栽前較低，進入團棵期明顯增加，在旺長期與成熟期達到最多。處理組與對照組相比，在各個時期處理組中真菌數(shù)目都略高于對照組。

由此可見，施用生物有機肥對土壤中細菌的影響最大，其次為放線菌，對真菌的影響最小。

2.2 生物有機肥對煙葉產(chǎn)量與品質(zhì)的影響

如表2所示，處理組無論是在產(chǎn)量、均價、中上等煙比例上均明顯高于對照組。表明施用生物有機肥在改變煙株根際微生物區(qū)系的同時也能實現(xiàn)增產(chǎn)和增值的效果。

表2 生物有機肥對煙葉產(chǎn)量與品質(zhì)的影響Table 2 Effects of bio-organic fertilizer on yield and quality of tobacco leaf

注：同列不同小寫字母表示不同處理差異顯著(P<0.05)。

Note:Different lowercase letters in the same column indicate significant difference between different treatments (P<0.05).

2.3 生物有機肥對煙草青枯病的田間防控效果

如表3所示，T1處理的發(fā)病率為76.2%，施用生物有機肥后青枯病的發(fā)病率顯著降低，在T2中發(fā)病率分別為47.6%，其防控效果為38.2%。表明施用生物有機肥能對煙草青枯病有較好的防控效果。

表3 生物有機肥對煙草青枯病的田間防控效果Table 3 Prevention and control effects of bio-logical organic fertilizer on tobacco bacterial wilt in field

注：同列不同小寫字母表示不同處理差異顯著(P<0.05)。

Note:Different lowercase letters in the same column indicate significant difference between different treatments (P<0.05).

2.4 生物有機肥對土壤微生物區(qū)系的影響

2.4.1 生物有機肥對土壤細菌群落組成的影響 如圖1所示，在門水平上共列出12種在樣本中占比大于1%的物種。如果將相對豐度大于10%的細菌劃分為優(yōu)勢類群[14]，則樣本中共有5種優(yōu)勢物種，其相對豐度占樣本總量的80%以上。在煙株各生長時期土壤優(yōu)勢類群總相對豐度均在對照組與處理組中表現(xiàn)出差別。其中，在團棵期與旺長期其相對豐度均為處理組低于對照組，而進入成熟期后處理組反而高于對照組，表明旺長期是煙株根際土壤微生物區(qū)系發(fā)生明顯改變的時期。

對優(yōu)勢類群在各個時期進行分析的結(jié)果表明，移栽前3個樣本均未施用處理，各平行樣本菌落結(jié)構(gòu)無明顯差異；在團棵期變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)在對照組中的相對豐度分別為30.14%,21.82%，在處理組中的相對豐度分別為23.47%,17.84%(其差異均達到1%的顯著水平)；綠彎菌門(Chloroflexi)、酸桿菌門(Acidobacteria)在對照組中的相對豐度分別為13.69%，5.33%，在處理組中的相對豐度分別為20.11%，6.96%(其差異均達到1%的顯著水平)。進入旺長期后變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)的相對豐度在對照組中分別為38.68%,19.80%，處理組中分別為26.25%，10.16%(其差異達到1%的顯著水平)；處理組中綠彎菌門(Chloroflexi)、酸桿菌門(Acidobacteria)的相對豐度在對照組中分別為8.62%,3.85%，處理組中分別為19.29%,8.48%(其差異達到1%的顯著水平)。進入成熟期，其菌落結(jié)構(gòu)的規(guī)律與團棵期、旺長期相比普遍發(fā)生反轉(zhuǎn)。其中處理組中變形菌門(Proteobacteria)的相對豐度反而多于對照組，其在對照組、處理組中相對豐度分別為22.73%,24.60%(其差異達到1%的顯著水平)。酸桿菌門(Acidobacteria)的相對豐度相比對照組反而顯著減少，其在對照組、處理組中的相對豐度分別為8.24%,5.56%(其差異達到1%的顯著水平)。

對于非優(yōu)勢菌種來說，擬桿菌門(Bacteroidetes)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)在團棵期與旺長期均表現(xiàn)為處理組顯著低于對照組，進入成熟期后表現(xiàn)為處理組顯著高于對照組。浮霉菌門(Planctomycetes)、藍藻門(Cyanobacteria)、疣微菌門(Verrucomicrobia)在團棵期與旺長期表現(xiàn)為處理組顯著高于對照組，進入旺長期之后表現(xiàn)為處理組顯著低于對照組(其差異均達到5%的顯著水平)。

圖1 煙田土壤中細菌在門水平上的群落組成

2.4.2 生物有機肥對真菌群落組成的影響 如圖2所示，在真菌門水平上共列出7種在樣本中占比大于1%的物種。其中，子囊菌門 (Ascomycota)、擔(dān)子菌門 (Basidiomycota)、Norank_k_Fungi為優(yōu)勢物種，占樣本總量的95%以上。這3類都是成熟期在處理組與對照組中表現(xiàn)出差異，其中子囊菌門 (Ascomycota)表現(xiàn)為處理組顯著低于對照組(其差異達到1%的顯著水平)；擔(dān)子菌門 (Basidiomycota)在煙草生長期內(nèi)表現(xiàn)為先減少后增加，成熟期處理組明顯高于對照組；norank_k_Fungi在煙草生長期內(nèi)表現(xiàn)為持續(xù)增長趨勢，在成熟期處理組中的相對豐度顯著低于對照組(其差異達到1%的顯著水平)。其他非優(yōu)勢物種均在成熟期表現(xiàn)出處理組相對豐度高于對照組的情況，旺長期與成熟期褐藻門 (Ochrophyta)在處理組中相對豐度顯著高于對照組(其差異均達到1%的顯著水平)。

圖2 煙草土壤中門水平下真菌的群落組成

2.4.3 生物有機肥對煙株根際土壤微生物Alpha多樣性的影響 細菌Alpha多樣性如表4所示，Coverage指數(shù)是指各樣本文庫的覆蓋率，其數(shù)值越高則樣本中序列被測出的概率越高。本試驗中各樣本細菌的Coverage值都在94%以上，表明本次測序結(jié)果能夠代表樣本中微生物的真實情況。Sobs(the observed richness)值表示豐富度實際觀測值，即OTU數(shù)目，其在移栽前與團棵期各處理之間差別不明顯，在旺長期表現(xiàn)出差異，在對照組、處理組中分別為2 394，2 813(其差異達到5%的顯著水平)，表明在處理組中的物種數(shù)目明顯多于對照組。Shannon指數(shù)能反映群落多樣性，其指數(shù)值越大說明群落多樣性越高，其在對照組、處理組中分別為6.37，6.80(其差異達到1%的顯著水平)，表明處理組中的生物多樣性更高。Chao指數(shù)反映群落豐富度(Community richness)，指數(shù)越大群落豐富度越高，其在旺長期表現(xiàn)為處理組高于對照組，表明處理組的菌群豐度更高。

真菌Alpha多樣性如表5所示，Sobs指數(shù)在移栽前與團棵期的處理和對照組之間未表現(xiàn)出差別，進入旺長期后在對照組、處理組中分別為192，222(其差異達到1%的顯著水平)，而在成熟期其差異表現(xiàn)得更為顯著，表明施用生物有機肥能顯著增加根際土壤中的物種數(shù)目。Shannon指數(shù)在旺長期表現(xiàn)出差別，在對照組、處理組中分別為2.54，2.99(其差異達到1%的顯著水平)，進入成熟期差別更加顯著，表明處理組中的物種多樣性更高。Chao指數(shù)同樣是在旺長期與成熟期表現(xiàn)出差別，其規(guī)律與Shannon指數(shù)相似，表明處理組中的菌群豐度更高。

表4 煙田土壤中細菌微生物的Alpha多樣性

表5 煙田土壤中真菌微生物的Alpha多樣性Table 5 Alpha diversity of fungi in tobacco fields

2.4.4 生物有機肥對煙株根際土壤微生物Beta多樣性的影響 為準(zhǔn)確表述不同樣本的相似性和差異關(guān)系，對樣本距離矩陣進行聚類分析，構(gòu)建樣本層級聚類樹。分別將煙田土壤樣本中的細菌和真菌進行層級聚類分析，通過樣本的層級聚類分析可以看出，細菌(圖3-a)隨著煙株的生長根際微生物區(qū)系不斷發(fā)生變化，移栽前與成熟期的樣本可以完全聚類在一起，且相隔較遠，表明根際微生物區(qū)系在朝著一定的方向發(fā)生變化。團棵期對照組樣本相隔較近并開始與處理組分開，進入旺長期后對照組與處理組的差異更加顯著，表明添加生物有機肥顯著改變了煙株根際微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)。真菌(圖3-b)移栽前樣本間差距較小，進入團棵期，處理與對照組之間距離較近，未表現(xiàn)出明顯差別，在旺長期與成熟期處理與對照組之間差異較大，2個時期的對照樣本之間差異較小。

2.4.5 生物有機肥對煙株根際土壤微生物區(qū)系及物種差異的影響 為了找出處理組與對照組之間的差異物種，將對照組與處理組在4個時期微生物的群落相對豐度數(shù)據(jù)分別整合成T1組、T2組，運用統(tǒng)計學(xué)方法檢測不同組(樣本)微生物群落中表現(xiàn)出的豐富度差異的物種，進行假設(shè)性檢驗，評估觀察到差異的顯著性，從而得到具有顯著差異的物種。如圖4所示。細菌在屬水平上共列出相對豐度排名前10的物種，分析發(fā)現(xiàn)微球菌科(Micrococcaceae)下的屬差異性較為明顯，該菌在土壤中的相對豐度如圖4-a所示。鏈霉菌屬(Streptomyces)、芽孢桿菌屬(Bacillus)雖然在總豐度上為處理組略高對照組，但通過物種組成分析發(fā)現(xiàn)其在成熟期表現(xiàn)為處理組明顯高于對照組。除此之外，等球菌屬(Isosphaera)、羅河桿菌屬(Rhodanobacter)也表現(xiàn)為處理組高于對照組。

注：樹枝長度代表樣本間的距離，土壤樣本后邊的數(shù)字代表平行樣。a.細菌物種;b.真菌物種。Note: The length of branches represents the distance between samples, and the number behind soil samples represents parallel samples.

a.Species of bacterial； b.Species of fungi.

圖3 煙田土壤微生物在OTU水平上的層級聚類分析

Fig.3 Hierarchical cluster analysis of soil microorganism on OTU level in tobacco fields

注：橫坐標(biāo)表示屬分類水平下的物種名，縱坐標(biāo)表示該樣本的某一物種豐度的百分數(shù)數(shù)值，不同顏色表示不同分組。最右邊為P值，*表示0.01

Note: The abscissa represents the species names at the genus classification level, the ordinate represents the percentage of a species abundance value in the sample, and different colors represent different groups.Pvalue is at the right most, *denotes 0.01

圖4 煙田土壤微生物在屬水平上的物種差異分析

Fig.4 Species difference analysis of soil microorganism on the genus level in tobacco fields

真菌(圖4-b)在屬水平上列出豐度排名前10的物種，其中子囊菌門下的屬(Norank_p_Ascomycota)、假霉樣真菌屬(Pseudallesch)表現(xiàn)為處理組低于對照組，而油脂酵母菌屬(Lipomyce)、真菌域下的屬(Norank_k_Fungi)表現(xiàn)為處理組高于對照組。除此之外差異達到顯著的物種均為處理組高于對照組。

3 結(jié)論與討論

將有機肥與拮抗微生物相結(jié)合制成生物有機肥的優(yōu)點在于有機肥可為拮抗微生物提供足夠的營養(yǎng)物質(zhì)，使其容易在土壤中定殖，從而有效地抑制病原菌的生長，實現(xiàn)防控作物土傳病害和提高作物產(chǎn)量的目的[1]。本試驗中，隨著煙株生長土壤中細菌數(shù)目呈現(xiàn)出先減少后增多的趨勢，且在旺長期對土壤微生物的數(shù)量和群落結(jié)構(gòu)影響最大，細菌和放線菌在旺長期數(shù)量最多。處理組中細菌數(shù)量顯著高于對照組，表明生物有機肥中的微生物能很好地在土壤中定殖。

施用生物有機肥不但可以影響煙株根際土壤微生物的區(qū)系結(jié)構(gòu)，還可以調(diào)節(jié)微生物的群落多樣性。通過細菌群落的Alpha多樣性分析可以看出，在處理組中各微生物多樣性指數(shù)均為處理組高于對照組，表明施用生物有機肥可以明顯增加土壤微生物的物種數(shù)目、生物多樣性及群落豐度。研究表明，健康水平與微生物的多樣性相關(guān)，高水平的微生物多樣性能夠抑制土傳病害的發(fā)生，提高土壤質(zhì)量[15-17]。本研究結(jié)果與其一致。這說明生物有機肥提高了土壤微生物整體代謝活性，增加了土壤微生物的群落多樣性和功能多樣性，進而提高土壤的生態(tài)功能，對防控病害有著積極的作用[18]。

通過對物種組成及物種差異的分析表明，旺長期煙株根際土壤微生物區(qū)系變化最為顯著，變形菌門(Proteoacteria)等優(yōu)勢菌種在旺長期所表現(xiàn)出的差異最為明顯。大量有益菌如微球菌科(Microco-ccaceae)下的屬、鏈霉菌屬(Streptomyces)、芽孢桿菌屬(Bacillus)的豐度在旺長期由處理組略低于對照組，變?yōu)樘幚斫M高于對照組。研究結(jié)果表明，微球菌科的相對豐度在健康土壤中明顯高于感染青枯病的土壤，推測微球菌在健康土壤中對阻止青枯菌的入侵起到了一定的作用[19],而鏈霉菌屬(Streptomyces)、芽孢桿菌屬(Bacillus)被認為對控制煙草青枯病具有很好的效果[20]。推測旺長期是有益菌發(fā)生變化的關(guān)鍵時期，其原因可能是旺長期煙株根系大量可溶性的分泌物為細菌提供了足夠的有效性碳源[21]，從而對根際微生物產(chǎn)生顯著影響，使得根際微生物的區(qū)系結(jié)構(gòu)朝一定的方向轉(zhuǎn)變，這一點也能在本研究樣本層級聚類圖中得到驗證。施用生物有機肥會增加煙株根際微生物區(qū)系中有益菌的豐度，而這些有益菌如鏈霉菌屬(Streptomyces)可產(chǎn)生抗生素、殺蟲劑、除草劑、植物生長促進劑等多種活性物質(zhì)。另外，許多芽孢桿菌屬(Bacillales)能分泌大量的酶和抗生素，可以抑制青枯雷爾氏菌的生長[22]，這些有益菌可能影響了青枯病的發(fā)生。在煙田中施用生物有機肥可以有效降低煙草青枯病的發(fā)生，防控率為38.2%，起到了較好的防病效果，而連續(xù)施用生物有機肥，逐漸改善煙株根際土壤微生物區(qū)系，才能使其達到更好的田間防效[23]。在煙株根際土壤微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)變化最關(guān)鍵的旺長期繼續(xù)施用生物有機肥或其他措施，評價其對煙株根際微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)的影響及能否達到更好的防控效果，為本試驗下一階段的研究方向。