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      基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探究柴胡-葛根治療肺炎支原體肺炎引起發(fā)熱的作用機(jī)制*

      2020-05-25 09:48:58李艷嬌李煥敏韓耀巍李新民
      關(guān)鍵詞:槲皮素葛根柴胡

      李艷嬌,李煥敏,孫 丹,韓耀巍,李新民△

      (1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院/國家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心,天津 300380;2.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300160)

      肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)是一種兒童常見的社區(qū)獲得性肺炎。患兒臨床表現(xiàn)輕重不一,以發(fā)熱和咳嗽為主要臨床癥狀。MPP患兒中約44.4%可出現(xiàn)發(fā)熱,重癥MPP均伴有發(fā)熱癥狀,其中88.5%出現(xiàn)高熱(體溫≥39℃)[1]。及時(shí)退熱是改善患兒舒適度的重要治療措施,是評(píng)價(jià)MPP疾病療效的重要指標(biāo)。MPP相關(guān)指南推薦以大環(huán)內(nèi)酯類抗生素為主,對(duì)乙酰氨基酚、布洛芬等退熱藥為輔助的治療措施[2],但部分患兒存在對(duì)藥物不耐受以及耐藥等情況,特別是布洛芬的胃腸道副作用,以及阿奇霉素的耐藥問題[3],從而導(dǎo)致預(yù)后不良。

      中醫(yī)的藥對(duì)是以兩味中藥為基礎(chǔ)的配伍單位,歷經(jīng)多位醫(yī)家的臨床實(shí)踐傳承,體現(xiàn)了中醫(yī)辨證思想以及組方用藥規(guī)律。中藥藥對(duì)調(diào)節(jié)發(fā)熱的優(yōu)勢(shì)不容小覷,具有多靶點(diǎn)多通路以及安全穩(wěn)固的特點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于藥學(xué)、計(jì)算機(jī)學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科理論基礎(chǔ),運(yùn)用生信分析手段探討藥物與疾病靶點(diǎn)之間的相互作用的重要方法。分子對(duì)接技術(shù)是運(yùn)用計(jì)算機(jī)不同的算法對(duì)分子間的親和力進(jìn)行幾何匹配和能量匹配的過程。分子對(duì)接和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為計(jì)算機(jī)輔助醫(yī)藥領(lǐng)域的2項(xiàng)重要技術(shù),為中醫(yī)藥在實(shí)現(xiàn)研究方法嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范、研究深度微觀具體,研究范圍醫(yī)藥精準(zhǔn)對(duì)接方面提供了有力的支持。

      本研究以天津名中醫(yī)李新民教授治療MPP發(fā)熱患兒的常用藥對(duì)柴胡-葛根為物質(zhì)基礎(chǔ),運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接的技術(shù)手段,從中醫(yī)的整體辨證角度分析藥物成分靶點(diǎn)的微觀作用機(jī)理,探討柴胡-葛根治療MPP發(fā)熱癥狀的作用機(jī)理。

      1 材料與方法

      1.1 柴胡-葛根相關(guān)靶點(diǎn)篩選 TCMTS(Https://tcmspw.com/tcmsp.php)是一個(gè)獨(dú)特的中草藥相關(guān)藥理學(xué)平臺(tái),載有藥物、靶標(biāo)和疾病之間的關(guān)系。利用TCMTS平臺(tái)查找2味中藥的活性成分,活性成分初篩標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置為口服利用度(Oral bioavailability,OB)≥30%,且類藥性(Drug-likeness,DL)≥0.18,后查找文獻(xiàn)進(jìn)行補(bǔ)充。編輯整理中藥活性成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息。

      利用Uniprot(Https://www.uniprot.org/)篩選“Homo sapiens”“Reviewed”的所有蛋白質(zhì)靶點(diǎn)。與上述獲得的中藥活性成分靶點(diǎn)匹配,再進(jìn)一步整理,即為柴胡-葛根活性成分相關(guān)靶點(diǎn)信息,導(dǎo)入Cytoscape3.7.2中構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)互作圖。

      1.2 引起疾病MPP和發(fā)熱癥狀的相關(guān)靶點(diǎn)篩選 以“Mycoplasma pneumoniae pneumonia”和“fever”為關(guān)鍵詞,挖掘 GeneCards數(shù)據(jù)庫(Https://www.genecards.org)、OMIM 數(shù)據(jù)庫(Http://www.omim.org)中引起MPP發(fā)熱的作用機(jī)理。GeneCards數(shù)據(jù)庫的選取標(biāo)準(zhǔn)為score大于中位數(shù)。合并2個(gè)數(shù)據(jù)庫疾病靶點(diǎn),刪除重復(fù)項(xiàng),即為引起疾病MPP和發(fā)熱癥狀的相關(guān)靶點(diǎn)。

      1.3 柴胡-葛根成分與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)為探究柴胡-葛根藥物相關(guān)靶點(diǎn)與MPP發(fā)熱間的相互作用,利用Bioinformatics&Evolutionary Genomics(Http://bioinformatics.psb.ugent.be/)繪制韋恩圖。獲取的交集基因?qū)?STING(Https://string-db.org)數(shù)據(jù)庫構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖,網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置為“Homo sapiens”“Highest confidence > 0.9”,其余為默認(rèn)值。結(jié)果保存并導(dǎo)入Cytoscape3.7.2中,利用MCODE插件,設(shè)置參數(shù)為 Degree Cutoff:5,K-core:5,其余設(shè)置不變,篩選潛在蛋白質(zhì)功能模塊和相對(duì)應(yīng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)信息。

      1.4 柴胡-葛根成分與MPP發(fā)熱癥狀功能、通路富集 將上述過程得到的柴胡-葛根成分與MPP發(fā)熱癥狀關(guān)鍵靶點(diǎn)信息導(dǎo)入Metascape(Https://metascape.org/),選擇“Homo sapiens”,“P<0.01”,分析其主要的生物學(xué)過程與代謝通路并進(jìn)行富集分析。利用ImageGP(Http://www.ehbio.com/ImageGP/)進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化分析。

      1.5 柴胡-葛根成分—MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)—通絡(luò)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 把柴胡-葛根成分、交集關(guān)鍵靶點(diǎn)和KEGG通路導(dǎo)入Cytoscape3.7.2中構(gòu)建柴胡-葛根成分—MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)—通路網(wǎng)絡(luò)圖,并分析連接度(Degree)、介度(Betweenness)以及緊密度(Closenesss)等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)。導(dǎo)出網(wǎng)絡(luò)圖及表格,分析主要活性成分及主要關(guān)鍵靶點(diǎn)通路。

      1.6 分子對(duì)接驗(yàn)證 分析得到柴胡-葛根成分—MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖中度值排名前3的靶點(diǎn),登錄RCSB PDB(Https://www.rcsb.org/),設(shè)置“Homo sapiens”“Refinement resilution(A)1.5-3”結(jié)合文獻(xiàn)研究及3D構(gòu)象選取這3個(gè)靶點(diǎn)的PDB ID。利用Pub-Chem(Https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)查找柴胡-葛根活性成分的2D結(jié)構(gòu),再導(dǎo)入Chemoffice中構(gòu)建活性成分的3D結(jié)構(gòu)。然后利用autodocktools1.5.6進(jìn)行分子對(duì)接,所有對(duì)接結(jié)果用ImageGP平臺(tái)進(jìn)行可視化分析。最后利用Pymolwin繪制主要中藥活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)分子對(duì)接示意圖。

      2 結(jié)果

      2.1 獲取柴胡-葛根活性成分 初步提取柴胡化學(xué)成分349種,葛根成分18種,經(jīng)過OB、DL篩選后獲得柴胡13種,葛根4種活性成分,包括槲皮素、山奈酚等,詳見表1。柴胡作用靶點(diǎn)336個(gè),葛根136個(gè),去掉重復(fù)靶點(diǎn),一共獲得205個(gè)靶點(diǎn),詳見圖1。

      圖1 柴胡-葛根成分靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

      表1 柴胡-葛根主要活性成分及靶點(diǎn)信息

      2.2 引起疾病MPP和發(fā)熱癥狀的相關(guān)靶點(diǎn)篩選 從Genecards數(shù)據(jù)庫獲得MPP靶點(diǎn)314個(gè),發(fā)熱靶點(diǎn)7 390個(gè),根據(jù)Score大于中位數(shù)的目標(biāo)靶點(diǎn)篩選潛在靶點(diǎn),再結(jié)合OMIM進(jìn)行補(bǔ)充,刪除重復(fù)項(xiàng),最終獲得MPP發(fā)熱靶點(diǎn)1 057個(gè)。

      2.3 柴胡-葛根成分與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)將篩選的柴胡-葛根活性成分靶點(diǎn)與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)取交集,并利用Bioinformatics&Evolutionary Genomics繪制韋恩圖,見圖2,得到疾病與藥物的共同靶點(diǎn)39個(gè)。再將靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING,構(gòu)建柴胡-葛根靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò),見圖3。

      圖2 柴胡-葛根與MPP發(fā)熱癥狀韋恩圖

      圖3 柴胡-葛根與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

      PPI復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中存在部分密度較高的區(qū)域稱為module,module被認(rèn)為是一種功能模塊,高度富集同一功能集團(tuán)的蛋白質(zhì)。在獲得柴胡-葛根與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)后,導(dǎo)入Cytoscape3.7.2的MCODE插件中,設(shè)置參數(shù),獲得內(nèi)在13個(gè)核心靶點(diǎn)組成的module,見圖4。進(jìn)一步利用 Network Analyzer計(jì)算分析了上述13個(gè)核心靶點(diǎn)的度值,見表2。據(jù)表所示核心靶點(diǎn)的度值相對(duì)較高,尤其是IL-6、TNF、IL-1β在網(wǎng)絡(luò)體系中有較高的作用。

      圖4 柴胡-葛根與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)中的module

      表2 柴胡-葛根與MPP發(fā)熱癥狀核心靶點(diǎn)信息

      2.4 柴胡-葛根成分與MPP發(fā)熱癥狀功能、通路富集 把柴胡-葛根成分與MPP發(fā)熱癥狀的13個(gè)核心靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape,整理結(jié)果,利用ImageGP平臺(tái)使數(shù)據(jù)可視化。根據(jù)圖5(A)所示,柴胡-葛根治療MPP發(fā)熱的主要生物過程包括細(xì)胞黏附的正向調(diào)節(jié) (Positive regulation of cell adhesion)、JAK-STAT通路(JAK-STAT cascade)、對(duì)脂多糖的調(diào)節(jié)(Re-sponse to lipopolysaccharide)、白細(xì)胞的游動(dòng)(Leukocyte migration)、上皮細(xì)胞的凋亡(Regulation of epithelial cell apoptotic process)、血管再生(Angiogenesis)、平滑肌細(xì)胞增殖(Regulation of smooth muscle cell proliferation)等。參與的通路包括細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用(Cytokine-cytokine receptor interaction)、IL-17 調(diào)節(jié)通路(IL-17 signaling pathway)等,詳見圖 5(C),表 3。

      圖5 柴胡-葛根主要成分潛在的富集靶點(diǎn)

      表3 柴胡-葛根調(diào)節(jié)MP發(fā)熱癥狀的通路信息

      相關(guān)靶點(diǎn)調(diào)節(jié)分子生物功能主要富集在細(xì)胞因子活性(Cytokine activity)、細(xì)胞因子受體結(jié)合(Cytokine receptor binding)、受體配體活性(Receptor ligand activity)、生長因子受體結(jié)合(Growth factor receptor binding)等,見圖 5(B)。

      2.5 柴胡-葛根成分—MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)—通絡(luò)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 運(yùn)用CytoScape3.7.2構(gòu)建柴胡-葛根與MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò),見圖6。利用Cytoscape的NetworkAnalyzer功能分析柴胡-葛根中藥成分的度值,發(fā)現(xiàn)主要為槲皮素,其次為山奈酚,兩者可能是干預(yù)與MPP發(fā)熱癥狀的最主要成分,詳見表4。

      表4 柴胡-葛根網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)特征參數(shù)

      圖6 柴胡-葛根成分—MPP發(fā)熱癥狀靶點(diǎn)—通絡(luò)網(wǎng)絡(luò)圖

      2.6 分子對(duì)接驗(yàn)證結(jié)果 分子對(duì)接結(jié)果顯示Docking Score絕對(duì)值大于等于7的有7個(gè),大于等于5小于7的有30個(gè),小于5且大于等于4.25的有8個(gè),小于4.25的有6個(gè),詳見圖7。Docking Score絕對(duì)值大于4.25表示活性成分與靶點(diǎn)間存在結(jié)合能力,大于5.0時(shí)表示結(jié)合活性較強(qiáng),大于7時(shí)表示結(jié)合活性極強(qiáng),結(jié)果表示Docking Score絕對(duì)值大于4.25者占總數(shù)88.24%,大于5的占72.55%,大部分靶點(diǎn)與成分的結(jié)合活性較好。中藥活性成分槲皮素、山奈酚、刺芒柄花素和β-谷甾醇與3個(gè)靶點(diǎn)的結(jié)合活性均較強(qiáng)。

      圖7 分子對(duì)接結(jié)果熱圖

      利用Pymolwin繪制槲皮素、山奈酚與IL-6、TNF、IL-1β的分子對(duì)接示意圖,如圖8。中藥主要活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的結(jié)合氫鍵距離均小于3.5A,符合要求。且大部分結(jié)合氫鍵距離小于3A,屬于較強(qiáng)氫鍵。

      圖8 槲皮素、山奈酚與關(guān)鍵靶點(diǎn)對(duì)接結(jié)果示意圖

      3 討論

      發(fā)熱是呼吸道感染常見的癥狀,持續(xù)發(fā)熱,熱退復(fù)現(xiàn)是公認(rèn)的兒童難治性肺炎支原體肺炎的臨床表現(xiàn)[4]。蔣星華等[5]對(duì)920例MPP感染患兒的臨床資料進(jìn)行回顧性分析,結(jié)果顯示肺炎支原體感染出現(xiàn)發(fā)熱的患兒達(dá)70.98%,高熱的患兒占發(fā)熱病人總數(shù)70.90%。中藥復(fù)方治療MPP患兒的發(fā)熱癥狀具有優(yōu)越的療效。課題組對(duì)266例風(fēng)熱閉肺型MPP患兒進(jìn)行回顧性研究,發(fā)現(xiàn)中藥組的退熱時(shí)間與西藥組的退熱時(shí)間有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,中藥組優(yōu)于西藥組[6]。李天力等[7]在對(duì)中成藥小兒消積止咳口服液聯(lián)合阿奇霉素治療兒童MPP的Meta分析中發(fā)現(xiàn),聯(lián)合口服中成藥能提高治療兒童MPP的臨床總體療效,包括退熱時(shí)間、咳嗽消失時(shí)間以及啰音消失時(shí)間,且具有較好的安全性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,中醫(yī)藥可能通過調(diào)節(jié)NF-κB通路、IL-17通路干預(yù)MPP小鼠模型,改善MPP小鼠的發(fā)熱、咳嗽癥狀[8-9]。

      對(duì)MPP的臨床研究中發(fā)現(xiàn)中,閆慧敏教授[10]收集81例難治性MPP患兒臨床資料,認(rèn)為急性高熱期及低熱起伏恢復(fù)期病位在肺脾,血瘀是貫穿難治性MPP的重要病理因素。宮文浩[11]對(duì)493例兒童MPP進(jìn)行臨床數(shù)據(jù)挖掘,發(fā)現(xiàn)小兒MPP臨床辨證可采用溫病學(xué)郁熱辨證方法,分為衛(wèi)分無形郁熱證、積滯熱結(jié)證、痰熱郁結(jié)證等6種郁熱類型。基于中醫(yī)臨床的辨證總結(jié),課題組認(rèn)為MPP的主要病機(jī)為肺氣閉郁、瘀血阻絡(luò),治療MPP患兒急性發(fā)熱期,多采用宣肺清熱、化瘀通絡(luò),在主方麻杏石甘湯的基礎(chǔ)上加減用藥,其中柴胡-葛根為常用退熱藥對(duì)。柴胡為傘形科植物,根據(jù)形態(tài)分為北柴胡、南柴胡?!侗窘?jīng)》言其可醫(yī)“寒熱邪氣”;《別錄》言其可“除傷寒心下煩熱”;《藥性論》言其可散“熱氣”;《醫(yī)學(xué)啟源》言其可“除虛勞煩熱,解散肌熱,去早晨潮熱”。葛根為豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根莖,《本經(jīng)》言其主“身太熱”;《別錄》言其可“出汗”,療“壯熱”;《藥性論》言其“治時(shí)疾解熱”;《本草拾遺》言其可醫(yī)“身熱赤”。綜上可見,柴胡、葛根自古以來就被各位醫(yī)家作為治療發(fā)熱的常用藥?,F(xiàn)代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明大劑量的柴胡煎劑(5g生藥/kg)或醇浸膏(2.5g生藥/kg)對(duì)人工發(fā)熱的家兔有解熱作用。對(duì)用傷寒混合疫苗引起發(fā)熱之家兔,口服煎劑或浸劑(2g/kg),也有輕度的降溫作用[12]。日本產(chǎn)葛根浸劑對(duì)人工發(fā)熱家兔有明顯解熱作用,維持4~5h 之久[13]。

      本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步篩選出柴胡-葛根治療MPP發(fā)熱癥狀的活性成分山奈酚、β-谷甾醇、槲皮素、刺芒柄花素等。肺部炎癥是引起MPP發(fā)熱的最主要原因。槲皮素是一種不含碳水化合物的黃酮類化合物,具有抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)痛的作用。對(duì)槲皮素的基礎(chǔ)研究表明,槲皮素對(duì)肺的氧化應(yīng)激損傷有一定的保護(hù)作用[14],對(duì)大鼠氣道炎癥和粘液生成有一定的抑制作用[15]。槲皮素還可以通過下調(diào)肺成纖維細(xì)胞的miR-221、抑制NF-κB和JNK途徑改善病原體來源的脂多糖引起的肺損傷[16]。槲皮素具體的抗肺部炎癥的機(jī)制,一方面可能是通是過阻斷NF-κB和AP-1信號(hào)通路抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)[17],另一方面則可能是通過調(diào)節(jié)機(jī)體相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),改變病原菌的局部環(huán)境,進(jìn)而抑制病原體的生長[18]。另外柴胡-葛根其他活性成分,如山奈酚亦可以通過MAPK和NF-κB途徑抑制病原菌引起的炎癥反應(yīng)[19]。分子對(duì)接結(jié)果顯示槲皮素、山奈酚與主要靶點(diǎn)(IL-6、TNF、IL-1β)的結(jié)合活性較強(qiáng),說明柴胡-葛根可能主要通過槲皮素、山奈酚調(diào)節(jié)MPP引起的發(fā)熱癥狀。

      本研究表明,柴胡-葛根調(diào)節(jié)MPP發(fā)熱癥狀的靶點(diǎn)在IL-6、TNF。IL-6是一種在炎癥和B細(xì)胞成熟過程中起重要作用的細(xì)胞因子,其編碼的蛋白質(zhì)是一種內(nèi)源性致熱源,在免疫性疾病及感染性疾病中可以引起發(fā)熱。IL-6在急慢性炎癥部位產(chǎn)生,通過血液分布到全身,通過與IL-6受體α的作用,誘導(dǎo)炎癥相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄。臨床數(shù)據(jù)顯現(xiàn),IL-6明顯升高可能是MPP患兒的主要臨床特征[20-21]。通過對(duì)MPP患者中IL-6的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)IL-6 rs1800795與MPP的風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)[22]。進(jìn)一步研究表明MPP的發(fā)病機(jī)制可能與觸發(fā)miR-1323/IL-6軸,爆發(fā)炎癥反應(yīng)有關(guān)[23]。TNF是也一種內(nèi)源性致熱源,是難治性肺炎支原體肺炎的預(yù)警指標(biāo)[24],其亞組分TNF-α是參與NF-κB信號(hào)通路參與MPP的炎癥過程的關(guān)鍵分子[25]。柴胡-葛根調(diào)節(jié)MPP發(fā)熱癥狀的通路主要涉及IL-17調(diào)節(jié)通絡(luò)(hsa04657)以及NF-κB信號(hào)通路(hsa04657)、Th17細(xì)胞分化(hsa04659)等。Th17細(xì)胞主要分泌的細(xì)胞因子為IL-17,Treg/Th17兩種細(xì)胞的失衡,是包括MPP在內(nèi)的多種炎性及免疫性疾病的重要表現(xiàn)[26-27]。IL-17與MPP患兒的病情嚴(yán)重程度以及哮喘發(fā)作相關(guān)[28-29]。臨床資料顯示,兒童MPP患者外周血單核細(xì)胞中TLRs的表達(dá)存在異常改變且與NF-κB信號(hào)通路激活有關(guān)[30]。NF-κB通路的效應(yīng)分子涉及IL-6、IL-1β,是本研究中分析得到的關(guān)鍵靶標(biāo)。故推測柴胡-葛根調(diào)節(jié)MPP發(fā)熱癥狀的關(guān)鍵信號(hào)通路為IL-17信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路。

      本研究表明,柴胡-葛根的單一活性成分可以從不同的靶點(diǎn)調(diào)節(jié)MPP的發(fā)熱癥狀,而同一靶點(diǎn)又可以影響不同的生物細(xì)胞過程,體現(xiàn)了中醫(yī)中藥發(fā)揮作用的多層次,多靶點(diǎn),多聯(lián)合性。單一靶點(diǎn)“牽一發(fā)而動(dòng)全身”的調(diào)節(jié)方式,為中醫(yī)藥整體觀的辨證思想研究提供了科學(xué)依據(jù),為后續(xù)進(jìn)一步挖掘柴胡-葛根等中藥藥材開發(fā)擴(kuò)寬了道路。但網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于數(shù)據(jù)挖掘的一種研究手段,其本身就具有一定的局限性,再加上中藥材炮制方法、采集時(shí)間、采集品種等的差異性,給分析結(jié)果帶來了一定的不確定性。我們后期可以基于分析得到的關(guān)鍵靶點(diǎn)及通路,做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,挖掘中藥治療MPP的深層機(jī)制。

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