超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞肉中金剛烷胺藥物殘留研究

曹騫 王磊 代立勤

摘要? ? 本文建立了雞肉中金剛烷胺藥物殘留檢測方法。樣品經(jīng)過1%乙酸乙腈提取，C18柱凈化，以及經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測分析，優(yōu)化了質(zhì)譜的分離參數(shù)。結(jié)果表明，金剛烷胺在1～100 μg/mL范圍內(nèi)線性滿足要求，相關(guān)系數(shù)r為0.998，定量限為1.0 μg/kg。該方法簡單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足雞肉中金剛烷胺藥物殘留檢測要求，為雞肉中金剛烷胺藥物檢測提供一定技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞? ? 金剛烷胺;雞肉;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;藥物殘留

金剛烷胺可用于亞洲甲-Ⅱ型流感的預(yù)防和治療，畜牧養(yǎng)殖業(yè)中金剛烷胺主要用于雞禽流感的預(yù)防和早期治療，但其具有致精神異常的副作用。流感耐藥性日益增強，長時間超量食用這些藥物則會導(dǎo)致動物中毒、免疫抑制以及藥物殘留，重則可能會使病毒發(fā)生變異，為預(yù)防和控制帶來很大難題，對動物源性食品的消費者存在較大安全隱患[1-3]。2005年，我國農(nóng)業(yè)部也曾經(jīng)發(fā)出《關(guān)于清查金剛院胺等抗病毒藥物的緊急通知》，禁止金剛烷胺等抗病毒獸藥的生產(chǎn)和使用。由于金剛烷胺在禽類養(yǎng)殖中仍有非法使用，因而對于禽類食品中金剛烷胺殘留含量的檢測方法研究具有重要的現(xiàn)實意義。本文旨在建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，同時探討雞肉中金剛烷胺的殘留檢測方法，為開展雞肉中金剛烷胺藥物的殘留檢測提供一定的參考。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 儀器與試劑

試驗儀器：Waters ACQUITY UPLC H-Class Xevo TQD 超高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Waters公司;高速冷凍離心機，湖南湘儀公司;渦旋混合器，德國IKA公司;氮吹儀，上海安譜公司;百分之一電子天平，德國賽多利斯公司。

試劑：乙腈、甲醇、正己烷、甲酸（HPLC級，上海安譜公司）;試驗用水為屈臣氏蒸餾水;C18固相萃取柱（60 mg/3 mL）購自上海安譜公司;金剛烷胺、金剛烷胺-D15購自德國Dr公司。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 標準溶液配置。將金剛烷胺、金剛烷胺-D15各10 mg用甲醇溶解并定容于10 mL棕色容量瓶，配置成1 mg/mL的標準儲備液，置于0～5 ℃冰箱中保存。準確移取適量金剛烷胺標準品儲備液用0.1%甲酸乙腈/水（體積比為3∶7）溶液配置成目標藥物濃度為1、2、5、10、20、50、100 μg/L，其中同位素內(nèi)標濃度為20 μg/L的標準系列溶液。

1.2.2? ? 試劑配置。5.0 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取10 g氫氧化鈉，溶解于50 mL水中。1%乙酸乙腈溶液：取5 mL乙酸，用乙腈稀釋至500 mL。0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液：稱取6.8 g磷酸二氫鉀，用水溶解，定容至500 mL，用5.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.00±0.05。0.1%甲酸乙腈/水溶液：取0.5 mL甲酸，用乙腈/水（體積比為3∶7）溶液稀釋至500 mL。

1.2.3? ? 樣品處理。提取：準確稱取2.00 g（精確至0.01 g）均質(zhì)雞肉樣品于50 mL離心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈，渦旋提取2 min，10 000 r/min離心5 min（建議溫度設(shè)為4 ℃），上清液轉(zhuǎn)入另一支50 mL離心管中。重復(fù)提取1次，離心后合并上清液，加入10 mL正己烷，渦旋混合1 min，10 000 r/min離心1 min（建議溫度設(shè)為4 ℃），移去正己烷，將乙腈層轉(zhuǎn)入于氮吹管中，40 ℃水浴氮吹至近干，用3 mL磷酸鹽緩沖液溶解殘渣，待凈化[4]。

凈化：C18固相萃取柱（100 mg/3 mL），分別用2 mL乙腈、2 mL磷酸鹽緩沖液活化和平衡，將待凈化的溶液以自然滴液速度過柱，用2 mL水淋洗，真空抽干。用1 mL 0.1%甲酸乙腈/水（體積比為3∶7）溶液洗脫，真空抽干，收集洗脫液，過0.22 μm濾膜后上機測定[5-6]。

1.2.4? ? 色譜條件。色譜柱為Waters ACQURRY UPLC BEHC18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱溫40 ℃，樣品室溫度20 ℃，進樣量5 μL，流速0.4 mL/min，流動相A為0.1%甲酸水溶液、B為乙腈溶液。梯度洗脫條件：0～0.5 min，維持95% A，5% B;0.5～4 min，95%A線性變化至5%，5%B線性變化至95%;4.1 min線性變化至95%A，5%B;4.1～6 min維持95%A，5%B。

1.2.5? ? 質(zhì)譜條件。電噴霧電壓為3.00 kV;離子源溫度為120 ℃;色譜柱溫度為40 ℃;洗脫溶劑溫度為450 ℃;氣體流量（N2）為1 000 L/h;錐孔氣流量（N2）為50 L/h。

2? ? 結(jié)果與討論

2.1? ? 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別將金剛烷胺和金剛烷胺-D15標準品儲備液配置成0.5 μg/mL濃度的標準溶液，以5 μL/min的流速注入質(zhì)譜儀，在正離子模式下進行掃描，確定目標化合物的分子離子、定性及定量離子，并且優(yōu)化質(zhì)譜的各項參數(shù)，質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化結(jié)果見表1。

2.2? ? 線性范圍和檢出限

將金剛烷胺分別配置成1、2、5、10、20、50、100 μg/L的標準溶液進行測定。雞肉中金剛烷胺檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg。金剛烷胺在1～100 μg/L范圍內(nèi)，線性方程為Y=0.011 991 5x+0.065 052，相關(guān)系數(shù)為0.998 407。

2.3? ? 加標回收率

在空白雞肉樣品中添加20 ng/mL金剛烷胺進行回收試驗可知，回收量為19.3 ng/mL，金剛烷胺回收率為96.5%。

3? ? 結(jié)論

本文建立了雞肉中金剛烷胺檢測分析的LC-MS/MS分析方法。該方法簡單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，能滿足雞肉中金剛烷胺殘留檢測要求，可以為相關(guān)檢測提供技術(shù)參考。

4? ? 參考文獻

[1] 張璐，付曉燕，何強，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測動物源性食品中的金剛烷胺[J].環(huán)境化學，2018，37（3）：614-616.

[2] 程忠剛，傅偉化，劉樹中.動物抗病毒藥物的應(yīng)用研究進展[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2010（8）：42-45.

[3] 張強，趙巧杰，熊瑞生.抗流感病毒藥物研究進展[J].藥學學報，2010，45（3）：289-299.

[4] 王亞會，李祥波，陸君.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肉中的金剛烷胺[J].食品工業(yè)，2019，40（9）：277-280.

[5] 張昕怡.高效液相色譜技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2016，36（4）：235.

[6] 陽艷娟.高效液相色譜技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2015（20）：74-75.