馬寧

摘 要：核酸分子檢測技術(shù)是一種新興的檢測技術(shù)，具有高效、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，雖然在我國起步較晚，但是發(fā)展迅速，現(xiàn)已運(yùn)用到食品藥品檢測領(lǐng)域，為食品藥品的檢測提供了新的技術(shù)手段。

關(guān)鍵詞：核酸檢測;食品;藥品

1 核酸分子檢測技術(shù)簡介

核酸分子檢測技術(shù)主要是利用不同物種或者同一物種不同個(gè)體以及同一個(gè)體不同狀態(tài)、不同部位基因表達(dá)的差異來對物種進(jìn)行鑒別、比較，通過基因水平的檢測，從而確定不同個(gè)體之間的親疏遠(yuǎn)近，為物種鑒別、分類起到了十分重要的作用。

相較于傳統(tǒng)的檢測手段，核酸分子檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確，而且隨著核酸高通量測序技術(shù)的發(fā)展，該方法日趨成熟，成本也日漸低廉，現(xiàn)已成為一種快捷、高效、低成本的檢測手段，因此被廣泛應(yīng)用于各領(lǐng)域，包括食品藥品檢測、醫(yī)學(xué)病毒檢測、刑偵線索比對以及醫(yī)學(xué)親緣關(guān)系鑒定等等方面。

2 常用核酸分子檢測方法

核酸分子檢測方法主要包括兩個(gè)步驟，分別為核酸分子的提取和擴(kuò)增。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對象的不同，遺傳物質(zhì)也不同，一般真核生物遺傳物質(zhì)為脫氧核糖核苷酸（DNA），而一些病毒如流感病毒、煙草花葉病毒等的遺傳物質(zhì)為核糖核苷酸（RNA），提取時(shí)應(yīng)該區(qū)別對待，而隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)如今許多生物制品公司推出了商品化的核酸提取試劑盒，提取過程簡單、高效，提取的核酸純度較高、質(zhì)量較好。

PCR，全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是最常用的核酸擴(kuò)增方法，其中又包括常規(guī)PCR法和熒光定量PCR法，二者基本原理相同，但實(shí)驗(yàn)操作不同，區(qū)別在于前者的擴(kuò)增產(chǎn)物需要通過瓊脂糖凝膠電泳觀察條帶的亮度和位置來確定，而且無法定量;后者的擴(kuò)增產(chǎn)物則與熒光染料嵌合，通過收集到的熒光染料的多少來對產(chǎn)物進(jìn)行定量，結(jié)果較前者更為準(zhǔn)確。

PCR過程主要包含3個(gè)步驟：變性、退火、延伸，目前常用的PCR鑒別技術(shù)包括RFLP（限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性）技術(shù)、RAPD（隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性）技術(shù)、AFLP（擴(kuò)增片段長度多態(tài)性）技術(shù)與ISSR（簡單重復(fù)序列間擴(kuò)增）技術(shù)等，熒光定量PCR技術(shù)包括SYBR Green染料法和Taq Man探針法，而探針法相對于染料法結(jié)果更為準(zhǔn)確。

3 核酸檢測技術(shù)的應(yīng)用

3.1 食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

核酸分子檢測技術(shù)在食品檢測領(lǐng)域中的應(yīng)用主要包括3個(gè)方面，①食品中某種成分的鑒定，如蓮蓉制品中蕓豆成分的定性檢測，以及動物源性飼料中豬、牛、羊、馬、雞與鴨等源性成分的鑒定，這些檢驗(yàn)項(xiàng)目與日常生活息息相關(guān)，如檢測涮火鍋時(shí)買的羊肉卷究竟是否為羊肉，飯館中賣的驢肉火燒是否是真的驢肉等等，采用核酸檢測方法可以得到準(zhǔn)確的答案;②用于轉(zhuǎn)基因食品的檢測，如MON89034、Bt11等品系轉(zhuǎn)基因玉米的檢測以及轉(zhuǎn)基因大豆、油菜、棉花等不同品系的檢測。轉(zhuǎn)基因食品自誕生以來就不斷引發(fā)爭議，至今也沒有明確的證據(jù)表明它是有益還是有害，所以一味的吹捧或者打壓都是不可取的。對于轉(zhuǎn)基因食品，應(yīng)該做到信息公開，凡是轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)品，其包裝上都應(yīng)該明確標(biāo)識。③病原微生物的檢測，如貝類食品中甲型肝炎病毒、諾如病毒的檢測，豬肉制品中非洲豬瘟病毒的檢測以及奶粉中金黃色葡萄球菌的檢測等等，這些檢測為日常飲食安全起到非常重要的作用，而核酸分子檢測方法也以其準(zhǔn)確、快速的優(yōu)勢被用于更多的食品衛(wèi)生檢測當(dāng)中。

3.2 醫(yī)藥檢驗(yàn)中的應(yīng)用

核酸分子檢測技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的用途也非常廣泛，它可以用于突發(fā)性公共衛(wèi)生事件中樣本的檢驗(yàn)，如突發(fā)性的群體食物中毒事件，運(yùn)用核酸分子檢測方法，可以省去分離、培養(yǎng)致病微生物的時(shí)間，且結(jié)果更為快速。

用于流行性病學(xué)調(diào)查，如流感病毒的檢測。我國衛(wèi)計(jì)委和疾病預(yù)防控制中心在2013年將甲型流感病毒H1N1、H3N2和乙型流感病毒引發(fā)的疾病定為季節(jié)性流感，納入國家法定傳染病丙類。每到秋冬季，氣候干燥，會有大量的人患上流感，對于數(shù)量較大的樣本，醫(yī)療部門一般選擇核酸分子技術(shù)進(jìn)行檢測，反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR法，不僅靈敏度高，而且可以對樣本核酸進(jìn)行定量檢測，檢測時(shí)間較短。

用于中藥材的道地性研究與鑒定識別。中藥材是我國特有的傳統(tǒng)資源，也是我國傳統(tǒng)文化的一部分，關(guān)于中藥材的鑒別方法有很多，比如傳統(tǒng)的外觀性狀鑒別法與理化檢驗(yàn)法等，但是外觀性狀鑒別依賴于檢驗(yàn)者的主觀經(jīng)驗(yàn)判斷，根據(jù)檢驗(yàn)者知識儲備的不同往往會得到不同的結(jié)果，對藥材的完整性以及檢驗(yàn)者的專業(yè)程度要求較高;理化鑒別法對藥材的前處理過程較為繁瑣，用時(shí)長，靈敏度低，且實(shí)驗(yàn)過程常常會用到有毒有害試劑，對實(shí)驗(yàn)者身體造成潛在的危害。核酸檢測技術(shù)相較于傳統(tǒng)鑒別技術(shù)，不僅靈敏度高、特異性好，而且操作簡單、快速，對于不同劑型的藥材均可檢測，如《中國藥典》（2015版）中收錄的品種“川貝母”“烏梢蛇”和“蘄蛇”分別采用了PCR-RFLP法和PCR法用于真?zhèn)舞b別，而且在即將出版的2020版本中會有更多的品種使用核酸檢測方法，這充分說明核酸檢測是一項(xiàng)成熟的可以用于中藥材快速鑒別的技術(shù)。

4 結(jié)語

核酸分子檢測技術(shù)在國外發(fā)展較為成熟，在我國起步較晚，但是發(fā)展迅速，最近幾年已經(jīng)成為專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)，同時(shí)也是各檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)提高自身行業(yè)競爭力的著力點(diǎn)，檢驗(yàn)檢測人員應(yīng)該進(jìn)一步提升自己的專業(yè)素養(yǎng)，在分子生物學(xué)領(lǐng)域大膽創(chuàng)新，為人民群眾的飲食用藥安全保駕護(hù)航。