劉熾鑒　趙博

摘要 目的：探索更合理模擬心腎不交型不寐的動物模型。方法：整理現有失眠、心腎不交證候和心腎不交型失眠模型，闡釋病證結合模型造模思路。結果：失眠模型有化學因素、物理因素、心理因素、物理化學因素和心理化學因素造模法;心腎不交證模型有化學因素、生物因素、心理因素造模法;心腎不交型失眠模型有單因素和復合因素造模法。結論：提出在中醫(yī)理論指導下，運用心理和化學的復合因素在動物身上模擬心腎不交型不寐的病因，再使用酸棗仁湯和交泰丸借助相關指標改變來驗證模型可靠性的思路。

關鍵詞 心腎不交證;不寐;動物模型

Thinking of Optimizing the Insomnia Animal Model of the Pattern of Disharmony between the Heart and Kidney

LIU Chijian，ZHAO Bo

（Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China）

Abstract Objective：To exploration of a more reasonable insomnia animal model of the pattern of disharmony between the heart and kidney.Methods：To sort the animal model of insomnia、the pattern of disharmony between the heart and kidney、insomnia of the pattern of disharmony between the heart and kidney.Results：The animal models of insomnia include chemical factors，physical factors，psychological factors，physicochemical factors and psychochemical factors.The animal models of the pattern of disharmony between the heart and kidney include chemical factors，biological factors and psychological factors.The insomnia animal models of the pattern of disharmony between the heart and kidney include single factor and compound factor.Conclusion：To put forward the thinking of the insomnia animal model of the pattern of disharmony between the heart and kidney：Under the guidance of TCM theory，using of psychological and chemical factors to simulate the cause of insomnia of the pattern of disharmony between the heart and kidney in animals.The reliability of the animal model was verified by using the Suanzaoren decoction and Jiaotai Pill with the help of the change of related indexes.

Keywords The pattern of disharmony between the heart and kidney;Insomnia;Animal model

中圖分類號：R338.63;R256.23文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.2095-7130.2020.04.016

失眠（Insomnia）指的是盡管有充足的睡眠時間和環(huán)境，仍持續(xù)出現睡眠起始困難、睡眠時間減少、睡眠完整性破壞或睡眠質量下降，并引起相關的日間功能損害[1]。流行病學調查表明，在過去的1個月內中國45.4%的被調查者經歷過各種程度的失眠[2]。中醫(yī)學稱之為“不寐”，其中“心腎不交型”最常見，正如清·葉天士《臨證指南醫(yī)案·不寐》：“不寐之故，雖非一種，總是陽不交陰所致”。

1 心腎不交型不寐模型現狀

1.1 心腎不交型不寐理論淵源

心腎交感的描述追溯至《周易》?！吨芤住ぬ罚骸疤斓亟?，泰”。泰，乾下坤上。天下濟，地上承，天地交感?！吨芤住ぜ葷罚骸凹葷汉?，小利貞”。既濟，離下坎上，火向下溫煦，水向上涼潤，水火既濟。對心腎不交的表述首見于宋·嚴用和《重訂嚴氏濟生方·白濁赤濁遺精論治》：“心火上炎而不息，腎水散漫而無歸，上下不得交養(yǎng)……此皆心腎不交”。即因為心火上炎無法下溫腎水，腎水散漫無法上涼心火，所以出現心腎不交的證候?！安幻隆币辉~首見于《難經·四十六難》，對其癥狀的描述首見于《十一脈灸經》，稱為“不臥、不能臥、不得臥”。

清·陳士鐸《辨證錄·不寐》首次提出心腎不交型不寐的概念和病因病機：“人有晝夜不能寐，心甚躁煩，此心腎不交也?！脑瓕倩?，過于熱則火炎于上而不能下交于腎;腎原屬水，過于寒則水下沉于下而不能上交于心矣”。明確了晝夜不寐的病因是心腎不交，病機為心過于熱腎過于寒使心腎水火不相濟。

1.2 失眠模型

化學模型：PCPA法[3]運用PCPA選擇性耗竭鼠腦內5-羥色胺（5-HT）[4]，而5-HT在睡眠-覺醒周期中起到重要調節(jié)作用[5]的原理，向鼠腹腔注射PCPA耗竭腦內5-HT導致失眠;咖啡因法[6]運用咖啡因可使中樞興奮的原理，向鼠腹腔注射咖啡因使其興奮導致失眠;WAY 100635法[7]運用WAY 100635為5-HT1A受體阻滯劑的原理，向鼠中縫背核注射WAY 100635與5-HT1A受體競爭性結合阻礙其抑制功能導致失眠。

物理模型：電刺激法[8]運用間歇性電刺激使無法入睡的原理，用間歇性的電刺激，造成鼠失眠。強迫運動法[9]運用“勞倦傷氣”導致失眠[10]的理論，通過水平轉盤、旋轉圓筒、間斷跑臺強迫鼠不斷地處于運動狀態(tài)之中，使其心身勞倦無法睡眠，制作失眠“氣虛”證候模型。

心理模型：水平臺法[11]及改良水平臺法[12]運用進入快速眼動（REM）睡眠會使肌肉放松的原理，利用水平臺讓鼠剛進入REM睡眠肌肉放松而沾到水或落入水中反復驚醒而失眠。喚醒法[13]運用不斷喚醒使無法穩(wěn)定睡眠狀態(tài)、破壞睡眠節(jié)律的原理，通過間隔時間拍打或換鼠籠的方法導致鼠失眠。限制性制動法[14]運用長時間的束縛產生應激使精神消耗的原理，通過長時間束縛鼠，使產生焦慮恐懼等心理，長期精神消耗而失眠。

物理化學模型：獨氏等[15]先運用“怒傷肝”導致“肝郁”的理論，用止血鉗夾持鼠尾致不斷互相打斗，再運用PCPA耗竭腦內5-HT的理論腹腔注射小劑量PCPA制作失眠“肝郁”證候模型;成氏等[16]先運用“怒傷肝”導致“肝郁”進而“肝郁乘脾”導致“脾氣虛”的理論長期間歇使用止血鉗夾持鼠尾致互相打斗，再運用PCPA耗竭腦內5-HT的理論腹腔注射PCPA制作失眠“肝郁脾虛”證候模型。

心理化學模型：游氏等[17]先運用D-半乳糖衰老模型發(fā)現與人類自然衰老相似的生化改變的原理向鼠腹腔注射D-半乳糖制備亞急性衰老動物模型，再運用“怒傷肝”導致“肝陰虛”的理論用止血鉗夾持鼠尾致不斷與其他鼠打斗，最后運用進入REM睡眠會使肌肉放松的原理將鼠放入自制睡眠剝奪箱中進行REM睡眠剝奪制作老年失眠“肝郁”證候模型。

1.3 心腎不交模型

化學模型：許氏等[18]運用鏈脲佐菌素對胰島β細胞具有毒性的原理，向鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素，并在注射后給予高脂飼料喂養(yǎng)以制作2型糖尿?。ㄐ哪I不交型）模型;于氏等[19]運用大劑量利血平可能導致精神抑郁的原理，向鼠腹腔注射利血平溶液作為抑郁癥（心腎不交型）模型。

生物模型：胡氏等[20]運用db/db鼠會產生嚴重2型糖尿病癥狀的原理，采用db/db鼠作為2型糖尿?。ㄐ哪I不交型）模型;辛氏等[21]采用15個月齡雌鼠作為絕經綜合征（心腎不交型）模型。

心理模型：雒氏等[22]運用長期大量的應激可能導致精神抑郁的原理，采用慢性溫和不可預知性應激刺激抑郁鼠作為抑郁癥（心腎不交型）模型;趙氏等[23]運用老鼠長期處于高處和迷宮內會導致焦慮的原理，利用高架十字迷宮模型鼠作為焦慮癥（心腎不交型）模型。

1.4 心腎不交型失眠模型

單因素模型：全氏等[24]運用PCPA耗竭腦內5-HT的理論，向鼠腹腔注射PCPA致失眠制作失眠（心腎不交型）模型。用交泰丸治療后抑制失眠大鼠HPA軸、明顯增加下丘腦5-HT的含量、降低去甲腎上腺素（NE）的含量、改善失眠癥狀，證明模型為失眠（心腎不交型）模型。

復合因素模型：這里是指先使用心理因素后使用化學因素造模的方法，郜氏等[25]運用應激是導致失眠的重要原因，其病理生理基礎是HPA軸過于興奮和亢進的理論，先采用母乳鼠分離、多種焦慮刺激的方法使鼠產生心理應激，再運用PCPA耗竭腦內5-HT的理論腹腔注射小劑量PCPA制作失眠（心腎不交型）模型。

2 模型評價

2.1 造模思路

失眠非中醫(yī)證候模型造模思路是運用化學、物理、生物或心理因素導致動物失去正常進入或穩(wěn)定睡眠過程的條件;失眠中醫(yī)證候模型造模思路是在中醫(yī)理論基礎上利用物理、化學因素在動物上模擬導致人失眠特定證型的病因。心腎不交證候模型造模思路是利用近似心腎不交的部分表現的模型，用具有“交通心腎”治法的交泰丸或黃連阿膠湯的療效反證模型的可靠性。

心腎不交型失眠模型指導思想是：心腎相交的理論指大腦皮質通過下丘腦對垂體、腎上腺皮質等的控制[26]，說明心腎不交可能會導致HPA軸紊亂;而通過調節(jié)HPA軸可以改善睡眠的狀態(tài)，維持各睡眠成分的正常比例[27]，說明調節(jié)HPA軸對失眠治療有益，進而得出心腎不交型失眠可能會有HPA軸紊亂的結論;且研究[28]發(fā)現經典PCPA失眠模型在5-HT含量降低的同時，伴有HPA的功能發(fā)生紊亂，故使動物產生失眠與HPA軸紊亂是其造模思路?？梢钥闯觯F有的心腎不交型不寐模型缺少中醫(yī)理論指導。

2.2 造模方法

失眠模型中，化學模型的方法是利用化學藥劑，選擇性的損耗維持正常睡眠的物質或導致中樞興奮無法入眠;物理模型的方法是利用物理刺激，導致鼠失去正常睡眠所需的環(huán)境條件而失眠;生物模型的方法是利用進入睡眠狀態(tài)后會受高音喚醒而覺醒的原理導致鼠失眠;心理模型的方法是以應激造成鼠產生恐懼而失眠;“勞倦傷氣”失眠模型的方法是長期劇烈運動會傷津耗氣而傷及心脾，傷心則陰血暗耗，傷脾則氣血生化乏源，導致血虛無以養(yǎng)心而失眠;“肝郁”類失眠模型的方法是利用導致鼠之間互相打斗導致“怒傷肝”進而肝郁。心腎不交型模型的方法是利用化學、生物或心理因素，模擬鼠的狀態(tài)至體現近似心腎不交的部分表現，再用交泰丸或黃連阿膠湯的療效來反證。

心腎不交型失眠模型單因素模型的方法是使用能使鼠腦5-HT耗竭與HPA軸功能紊亂的PCPA造模，能調節(jié)HPA軸達到交通心腎治療失眠目的的交泰丸反證模型可靠性，復合因素法通過多種心理焦慮應激聯(lián)合PCPA的方法造模。可以看出，現有的心腎不交型不寐模型造模因素中缺少中醫(yī)病因。

2.3 模型驗證

研究證明，與失眠相關性較強的物質為γ-氨基丁酸（GABA）、5-HT、Orexin和褪黑激素（MT）。失眠模型中，驗證模型是否有效主要是用相關物質含量或表達變化（5-HT、DA、NE、GABA、Orexin、MT、谷維素）、HPA軸相關激素變化、皮層腦電圖波形變化、閾上和閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠實驗[29]、宏觀體征觀察、行為學評價、血液流變學分析來評價。驗證模型成功的陽性藥為地西泮、艾司唑侖，原理是通過與GABAA受體上的BZ位點結合誘導受體發(fā)生構象變化，促進GABA與GABAA受體結合進而增加Cl-內流，產生中樞抑制效應進而有助于入睡?？梢钥闯?，現有失眠模型用于驗證模型可靠的藥物作用對象只是和失眠相關物質中的一種，用此藥物治療失眠存在一定的偶然性，進而對模型的可靠性存疑。

心腎不交型失眠模型驗證模型是否有效主要是用相關物質含量變化（5-HT、NE、Orexin）、HPA軸相關激素變化。驗證模型成功的陽性藥為交泰丸，交泰丸可以抑制HPA軸，達到“交通心腎”的目的，改善失眠癥狀。雖然可以認為心腎不交型失眠可能會有HPA軸紊亂，但是HPA軸紊亂不能作為評價模型是心腎不交型模型的指標。可以看出，現有心腎不交型不寐模型選擇觀測的指標存在缺陷。

3 模型優(yōu)化方案

3.1 造模思路

近年來，廣泛用于中醫(yī)藥研究的動物模型為病證結合模型，它用陰陽、五行、藏象等理論為指導，輔以疾病模型的造模方法和評價方式，建立出的模型更符合在動物上模擬近似病證發(fā)病狀態(tài)的要求，也可更準確的評價中醫(yī)藥治療對疾病的改善程度。這類建模方法使中醫(yī)臨床與基礎研究緊密結合起來，使病理、藥理等研究為中醫(yī)藥現代化提供更明確的依據[30]。病證結合模型大體分為2種：第1種是單因素模型，選擇使用化學、物理、生物或心理等致病因素的其中一種讓動物模擬出近似此病證的狀態(tài);第2種是復合因素模型，選擇使用化學、物理、生物或心理致病因素的2種或多種讓動物模擬出近似此病證的狀態(tài)。

現有心腎不交不寐模型缺少中醫(yī)理論的指導，造模因素中也沒有體現心腎不交型不寐的病因，這和“病證結合”造模法思想不符。

3.2 造模方法

目前“腎陽虛”模型[31]僅有腎上腺素法;“腎陰虛”模型[32]有甲狀腺素法、甲狀腺素聯(lián)用利血平法、條件反射結扎腎動脈法、（促）腎上腺皮質激素法、熱性中藥法、高位小腸造瘺法、S180肉瘤法、左旋谷氨酸單鈉法和使用高血壓腎陰虛證模型;“腎精不足”模型[33]有藥物干預法、手術切除法、骨制動法、根據中醫(yī)病因“恐傷腎”和“房勞傷腎”的單因素與復合因素組合法。從心腎不交型不寐病因角度看，久病不適合在動物上模擬，“房勞”和“情志過極”可以模擬;從病機的角度看，腎陽虛、腎陰虛和腎精不足均可模擬。現有的方法中熱性中藥法、“恐傷腎”法和“房勞傷腎”法在造模過程中體現了中醫(yī)理論的指導，但熱性中藥法和“房勞傷腎”法不僅耗竭腎陰，還有氣血津液等其他復雜的改變，所以不適宜建立相對可靠的失眠模型。

從“腎精不足”的角度考慮，理論為“腎藏精，主骨生髓通于腦”。曾祥國等[34]采用貓嚇孕鼠法造模，從大腦皮質總厚度、分子層厚度、神經元個數的變化，證明“腎通于腦、充于腦”的理論。王米渠等[35]利用“貓嚇老鼠”創(chuàng)立了“恐傷腎”小鼠模型，并由“腎主生殖”理論為指導，通過對經過驚恐刺激的老鼠子代的各種理化指標的測定，初步證實了“恐傷腎”基因心理學的理論依據[36]。

恐懼[37]是個體企圖擺脫、逃避某種事件或面臨、預感危險而又缺乏應付能力時產生的情緒體驗。引起恐懼的關鍵因素是缺乏處理、擺脫可怕的情境或事物的能力，而老鼠害怕天敵貓的特點能夠合理的模擬人的恐懼心理。失眠的產生也離不開心理應激，而“貓嚇老鼠”正是應用了心理應激，也可以體現心腎不交型不寐病因中的“情志過極”，用來制作失眠模型是相對可靠的。馮氏等[38]綜述了“恐傷腎”以下幾種造模方法：情志造模法、理化造模法、復合情志造模法。其中杜氏等[39]在“貓嚇老鼠”基礎之上增加了投喂活鼠、冰水游泳等刺激，起到強化恐懼的作用。

3.3 優(yōu)化方案

心腎不交型不寐模型優(yōu)化的造模思路是在中醫(yī)理論指導下，運用復合因素在動物身上模擬心腎不交型不寐的病因，先施加心理因素“恐懼”刺激導致“恐傷腎”進而“腎精不足”導致“心腎不交”，再使用化學因素PCPA耗竭腦內5-HT導致失眠，使鼠發(fā)生近似人的病理生理改變;選用心腎不交證首選藥交泰丸和不寐治療首選藥酸棗仁湯作為陽性對照藥，觀測相關物質（GABA、5-HT、Orexin和MT）含量的改變，用來驗證模型的可靠性，同時也為找出心腎不交證型的評價指標提供新思路。

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