余純 莊玉磊 楊萍 李紅

（1 廣州普華優(yōu)康健康管理咨詢有限公司 廣東 廣州 510530）

（2 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院生殖中心 廣東 廣州 510010）

單基因遺傳病是指受一對等位基因控制的遺傳病，且臨床上已經(jīng)確診的等位基因約有6600 多種，且每年以10 ～15 種速度遞增，已經(jīng)對人類健康構成較大的威脅[1]。目前，臨床上常見的單基因遺傳病包括：紅綠色盲、白化病與血友病等[2]。國內學者研究表明[3]：單基因遺傳病病因相對復雜，主要是由于基因在細胞復制時發(fā)生差錯，亦可由于外界因素引起的突變。臨床研究表明：遺傳因素作用包括主要基因、特異性基因、染色體畸變等，再加上環(huán)境污染、生態(tài)環(huán)境破壞等，導致基因頻率增高，影響患者健康、生活[4-5]。近年來，基因診斷技術在臨床上得到應用，已經(jīng)為早期診斷單基因病、多基因病及腫瘤遺傳病、線粒體遺傳病等帶來曙光，且經(jīng)歷了間接診斷到直接最難端，從簡單到復雜再回歸單一，具有廉價、高通量、自動化等優(yōu)勢[6-7]。因此，本文采用隨機病例發(fā)放進行研究，探討探討單基因遺傳病基因診斷技術的臨床應用效果和意義，效果如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1—2018 年4 月治療的單基因遺傳病患者100例作為對象，孕周36～42周，平均（38.31±4.56）歲。納入標準：（1）入組者均符合單基因遺傳病診斷標準，均經(jīng)臨床隨訪最終確診；（2）符合單基因遺傳病基因診斷技術適應證，患者均能耐受；（3）能遵醫(yī)完成有關檢查、診斷；排除標準：（1）合并妊娠期糖尿病、高血壓或自身免疫免疫系統(tǒng)疾病者；（2）精神異常、凝血功能異常或伴有自身免疫系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

所有患者均經(jīng)臨床隨訪最終確診（金標準）[8]；

確診前所有患者均給予單基因遺傳病基因診斷技術進行診斷鑒別。（1）目標序列捕獲與測序。所有患者入院后次日空腹狀態(tài)下取靜脈血5ml，放置在EDTA 中，根據(jù)標準流程下提取基因組DNA，構建DNA 文庫，利用高通量測序儀連續(xù)雙向測序90個循環(huán)，并利用Illumina Pipeline software 完成原始序列數(shù)據(jù)的讀取；（2）目標序列的分析。獲得相應的數(shù)據(jù)后下機完成信息部分分析。對獲得的原始數(shù)據(jù)進行測序質量評估，剔除低質量及被接頭污染的reads，然后利用BWA 軟件對HG19 序列進行對比。同時，目標序列分析時對序列捕獲效果進行評價，并利用SOAP snp 軟件與Samtools 軟件完成目標序列查詢，從而獲得目標區(qū)域堿基多態(tài)性結果；然后將獲得的結果與數(shù)據(jù)庫進行對比，對可疑突變進行注釋、篩選[9]。（3）基因突變序列的驗證。對于發(fā)現(xiàn)的致病突變，對其所在的片段完成上、下游引物的設計，并完成PCR 擴增，完成產(chǎn)物Sanger 測序，并將獲得的結果與相應基因標準序列進行對比，從而驗證單基因遺傳病基因診斷技術診斷結果，并將單基因遺傳病基因診斷技術診斷結果與“金標準”結果進行比較[10]。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0 軟件處理，計數(shù)資料行χ2檢驗，采用n（%）表示，計量資料行t 檢驗，采用（±s）表示，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

入組的100 例單基因遺傳病患者均經(jīng)隨訪最終確診，所有患者確診前均行單基因遺傳病基因診斷技術，患者均得到確診，與“金標準”診斷符合率為100.00%。單基因遺傳代謝病中排在前三位的分別為遺傳代謝、神經(jīng)系統(tǒng)及皮膚系統(tǒng)疾病，分別占：34.00%、19.00%、9.00%，見表。

表 入組患者單基因遺傳病類型及構成比

3.討論

單基因遺傳病是一類疾病的統(tǒng)稱，對人類健康損傷相對嚴重，且臨床上尚缺乏有效的治療手段，成為人類出生缺陷的主要原因。國內學者研究表明：由于單基因病變常涉及一個或幾個基因突變，加強單基因遺傳病早期診斷、治療對改善患者預后具有重要的意義。國外學者研究表明：單基因遺傳病診斷前應找找到致病的基因，對先證患者進行病因分析，有助指導臨床治療。本研究中，入組的100 例單基因遺傳病患者均經(jīng)隨訪最終確診，所有患者確診前均行單基因遺傳病基因診斷技術，患者均得到確診，與“金標準”診斷符合率為100.00%。單基因遺傳代謝病中排在前三位的分別為遺傳代謝、神經(jīng)系統(tǒng)及皮膚系統(tǒng)疾病，分別占：34.00%、19.00%、9.00%，說明將單基因遺傳病基因診斷技術用于單基因遺傳病中能獲得較高的診斷符合率，能為臨床診療提供依據(jù)和參考。國內學者研究表明：理論是所有的單基因病最終均應檢測致病基因，而經(jīng)典的連鎖分析與定位克隆技術最為有效、最為準確。但是，該方法對于表型不外顯或外顯不全，或自身產(chǎn)生的基因突變者難以獲得較高的準確率。國外學者發(fā)明了MLPA 技術，屬于是一種高通量、針對待測核酸中靶序列完成定量、定性測定，屬于是一種新型的單基因檢測技術，僅需要少許DNA 即可，經(jīng)過變性、雜交、連接與PCR 擴增等步驟即可實現(xiàn)不同靶基因的檢測與定量分析。同時，該方法與傳統(tǒng)測序方法相比能對缺失、重復的外顯子進行全面檢測，能提高檢測精度與敏感度。因此，臨床上對于疑似單基因遺傳病患者應加強單基因遺傳病基因診斷技術測定，對于測定結果異?；颊邞皶r制定有效的措施進行干預，必要時指導患者終止妊娠。

綜上所述，單基因遺傳病基因診斷技術用于單基因遺傳病中能獲得較高的診斷符合率，具有創(chuàng)傷小、風險低等特點，能為臨床診療提供依據(jù)和參考。