水質(zhì)糞大腸菌群多管發(fā)酵法樣品培養(yǎng)溫度對結(jié)果的影響

王朝霞

（遼寧省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心，遼寧沈陽 110161）

1 引言

糞大腸菌群是在44.5 ℃條件下能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌［1］，是當(dāng)前國內(nèi)外環(huán)境監(jiān)測部門評價水體污染程度的公認(rèn)指標(biāo)和主要監(jiān)測項目之一，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義［2］。樣品培養(yǎng)溫度的控制是保證糞大腸菌群檢測精確、可靠的必要條件，對于水質(zhì)糞大腸菌群的監(jiān)測具有重要意義。

2 實驗部分［3］

2.1 實驗原理

將樣品加入含乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管中，37 ℃初發(fā)酵富集培養(yǎng)，大腸菌群在培養(yǎng)基中生長繁殖分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)生的酸使溴甲酚紫指示劑由紫色變?yōu)辄S色，產(chǎn)生的氣體進(jìn)入倒管中，指示產(chǎn)氣。44.5 ℃復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)基中的膽鹽三號可抑制革蘭氏陽性菌的生長，最后產(chǎn)氣的細(xì)菌確定為糞大腸菌群。通過查MPN 表得出糞大腸菌群濃度值。

2.2 水樣采集

距水面10～15 cm 處采樣，采集樣品盛裝于滅菌的采樣瓶中。

2.3 試劑

單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液；三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液；EC 培養(yǎng)液。

2.4 實驗步驟

根據(jù)水樣污染程度，確定水樣接種量。將水樣接種到乳糖蛋白胨試管中，在37±0.5 ℃下培養(yǎng)24±2 h進(jìn)行初發(fā)酵。輕微振蕩在初發(fā)酵實驗中產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸未產(chǎn)氣的試管，用火焰灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)，將培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)接到裝有EC 培養(yǎng)基的試管中，在44.5±0.5 ℃下培養(yǎng)24±2 h。培養(yǎng)后立即觀察，倒管中產(chǎn)氣證實為糞大腸菌群陽性。最后根據(jù)陽性管數(shù)查MPN 表換算樣品中糞大腸菌群數(shù)。

3 實驗結(jié)果與討論

對培養(yǎng)箱進(jìn)行校準(zhǔn)后，分別在43.5±0.5 ℃，44.5±0.5 ℃，45.5±0.5 ℃條件下，對標(biāo)準(zhǔn)樣品、污水處理廠出口水、大伙房水庫水、渾河鳥島斷面水和沈陽市郊農(nóng)戶地下井水5 個不同來源的樣品進(jìn)行原樣、10-1、10-2、10-3濃度的接種，每個濃度接種5 根試管，每根試管接種1 mL，24 h 培養(yǎng)。

標(biāo)準(zhǔn)樣品培養(yǎng)實驗結(jié)果見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)樣品培養(yǎng)實驗結(jié)果

由圖1 可見，隨著培養(yǎng)溫度的升高，標(biāo)準(zhǔn)樣品培養(yǎng)實驗結(jié)果呈現(xiàn)先升后降的趨勢，且變化顯著。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品培養(yǎng)實驗結(jié)果

污水處理廠出口水培養(yǎng)實驗結(jié)果見表2。

表2 污水處理廠出口水培養(yǎng)實驗結(jié)果

由圖2 可見，隨著培養(yǎng)溫度的升高，污水處理廠出口水培養(yǎng)實驗結(jié)果呈現(xiàn)先升后降的趨勢，且變化顯著。

圖2 污水處理廠出口水培養(yǎng)實驗結(jié)果

大伙房水庫水培養(yǎng)實驗結(jié)果見表3。

表3 大伙房水庫水培養(yǎng)實驗結(jié)果

由圖3 可見，隨著培養(yǎng)溫度的升高，大伙房水庫水培養(yǎng)實驗結(jié)果呈現(xiàn)先升后降的趨勢，且變化顯著。

圖3 大伙房水庫水培養(yǎng)實驗結(jié)果

渾河鳥島斷面水培養(yǎng)實驗結(jié)果見表4。

表4 渾河鳥島斷面水培養(yǎng)實驗結(jié)果

由圖4 可見，隨著培養(yǎng)溫度的升高，渾河鳥島斷面水培養(yǎng)實驗結(jié)果呈現(xiàn)先升后降的趨勢，且變化顯著。

圖4 渾河鳥島斷面水培養(yǎng)實驗結(jié)果

沈陽市郊農(nóng)戶地下井水培養(yǎng)實驗結(jié)果見表5。

表5 沈陽市郊農(nóng)戶地下井水培養(yǎng)實驗結(jié)果

由圖5 可見，隨著培養(yǎng)溫度的升高，沈陽市郊農(nóng)戶地下井水培養(yǎng)實驗結(jié)果呈現(xiàn)先升后降的趨勢，且變化顯著。

圖5 沈陽市郊農(nóng)戶地下井水培養(yǎng)實驗結(jié)果

4 結(jié)論

對實驗結(jié)果進(jìn)行比對可以看出，不同來源的水質(zhì)隨著培養(yǎng)溫度的變化呈現(xiàn)相似的變化趨勢，且變化顯著。由此可見，溫度差異對MPN 結(jié)果的影響非常明顯，因此，要嚴(yán)格控制培養(yǎng)溫度，在實驗前一定要對培養(yǎng)箱進(jìn)行溫度校正，在要求的44.5±0.5 ℃進(jìn)行培養(yǎng)，使每次測得的結(jié)果具有一定的可比性。