陳韻潔 張晨 譚娟

[摘要] 目的 對(duì)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦胎盤(pán)中的表達(dá)進(jìn)行研究。方法 選取該院2018年1—12月收治的40例孕婦，根據(jù)其是否合并妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥分成兩組，每組各20例。其中，觀察組為合并妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積孕婦，對(duì)照組為正常妊娠孕婦，對(duì)兩組孕婦的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1在胎盤(pán)上的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比。結(jié)果 觀察組孕婦胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1的表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果分別為（20.7±2.1）（30.2±0.3）（29.3±0.4），與對(duì)照組相比（25.6±1.4）（16.8±0.2）（20.7±0.3），F(xiàn)ATP4表達(dá)水平明顯降低，而CD36以及FABP1的表達(dá)水平則明顯增加（t=2.876，7.954，4.673， P<0.05）。結(jié)論 妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積孕婦的胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1表達(dá)水平均存在明顯變化，與其妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積導(dǎo)致胎盤(pán)組織脂肪酸運(yùn)輸能力降低以及脂肪酸氧化代償性增高有一定的關(guān)系。

[關(guān)鍵詞] 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白; 妊娠期; 肝內(nèi)膽汁淤積; 胎盤(pán);表達(dá)水平

[Abstract] Objective To study the expression of fatty acid transporter proteins FATP4， CD36 and FABP1 in the placenta of pregnant women with intrahepatic cholestasis of pregnancy. Methods 40 pregnant women who were admitted to our hospital from January to December 2018 were selected. They were divided into two groups according to whether they were complicated with intrahepatic cholestasis during pregnancy， with 20 cases in each group. Among them， the observation group was pregnant women with intrahepatic cholestasis during pregnancy， and the control group was pregnant women with normal pregnancy. The expression levels of fatty acid transporter proteins FATP4， CD36 and FABP1 on the placenta were compared between the two groups of pregnant women. Results The detection results of the expression levels of fatty acid transporter proteins FATP4， CD36 and FABP1 in the placental tissues of pregnant women in the observation group were （20.7±2.1） （30.2±0.3） （29.3±0.4）， compared with the control group （25.6±1.4） （16.8±0.2） （20.7±0.3），the expression level of FATP4 decreased significantly， while the expression level of CD36 and FABP1 increased significantly（t=2.876，7.954， 4.673， P<0.05）. Conclusion There are significant changes in the expression levels of fatty acid transporter proteins FATP4， CD36 and FABP1 in the placental tissue of pregnant women with intrahepatic cholestasis during pregnancy， which is associated with reduced placental tissue fatty acid transport capacity and increased fatty acid oxidative substitutability due to intrahepatic bile siltation during pregnancy.

[Key words] Fatty acid transporter protein; Pregnancy; Intrahepatic cholestasis; Placenta; Expression level

臨床中，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥是一種較為常見(jiàn)的妊娠期并發(fā)癥，可能導(dǎo)致胎兒早產(chǎn)或者是宮內(nèi)窘迫、死胎等多種嚴(yán)重的不良妊娠結(jié)局發(fā)生。有研究顯示[1]，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥引起的圍產(chǎn)兒死亡發(fā)生率約為11%～13%之間，其中，國(guó)外有研究報(bào)道顯示因不明原因?qū)е碌娜焉锲谠挟a(chǎn)婦死胎以及死產(chǎn)情況中，由妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥造成的情況比率約在50%左右。以該院2018年1—12月收治的20例孕婦為例，對(duì)其胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)分析。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取該院收治的40例孕婦作為研究對(duì)象，根據(jù)其是否合并妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥分成兩組，每組各20例。其中，觀察組為合并妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦，其年齡在23～39歲之間，平均為（28.4±3.2）歲，孕產(chǎn)次在1～3次不等，平均為（2.4±1.2）次，生產(chǎn)孕周為36～41周，平均為（39.2±1.1）周，新生兒出生體重為2 680～3 850 g，平均為（3 260±250）g;對(duì)照組為正常妊娠孕婦，其年齡在22～39歲之間，平均為（28.2±3.5）歲，孕產(chǎn)次在1～3次不等，平均為（2.3±1.1）次，生產(chǎn)孕周為36～41周，平均為（39.1±1.2）周，新生兒出生體重為2 680～3 850 g，平均為（3 250±260）g。兩組孕婦在年齡、生產(chǎn)孕周以及孕產(chǎn)次等一般資料上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有比較意義。

1.2? 病例選取標(biāo)準(zhǔn)

所選取孕婦均為單胎妊娠，且無(wú)其他妊娠期合并癥與并發(fā)癥情況，其中，對(duì)所選取妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦疾病均符合有關(guān)疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。排除存在妊娠期病毒性肝炎以及脂肪肝、腎炎、膽管炎等肝、膽、腎部疾病孕婦;排除存在巨細(xì)胞病毒感染及免疫性疾病的孕婦;排除不同意該次研究的情況。該次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)， 征得受試對(duì)象知情同意。

1.3? 方法

臨床中，在兩組孕婦分娩生產(chǎn)時(shí)，在胎盤(pán)娩出30 min內(nèi)，收集胎盤(pán)靠近母體面的中央絨毛區(qū)組織約10 g進(jìn)行檢測(cè)分析，進(jìn)行胎盤(pán)組織收集過(guò)程中注意避開(kāi)鈣化與梗死部分。對(duì)收集胎盤(pán)組織放置在4℃溫度環(huán)境下，使用生理鹽水進(jìn)行沖洗3次后防置在液氮下置于溫度為-80℃的冰箱中保存，以待檢測(cè)分析。同時(shí)注意提取同樣部位與體積大小的新鮮組織，放置在含有4%的多聚甲醛溶液中進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)分析使用。檢測(cè)使用儀器和試劑為：免疫組化實(shí)驗(yàn)分析采用abcam 廠家提供的FATP4抗體，Leica novocastra NovoLink聚合物檢測(cè)系統(tǒng)，RE7280-K檢測(cè)試劑盒等;定量PCR檢測(cè)采用Invitrogen公司的SYBR Green qPCR SuperMix，定量PCR儀為ABI PRISM 7500 Sequence Detection System。此外，應(yīng)用免疫組化方法對(duì)兩組胎盤(pán)組織的長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白定性和定量檢測(cè);運(yùn)用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）Western印跡法檢測(cè)胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)位酶/白細(xì)胞分化抗原36（FAT/CD36）和跨膜脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP1）的表達(dá)水平，并對(duì)兩組孕婦胎盤(pán)組織中的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FATP4、CD36以及FABP1表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察對(duì)比。

1.4? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)上述數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

病例組胎盤(pán)組織中FATP4表達(dá)水平與對(duì)照組FATP4水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖1。

觀察組孕婦胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1的表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），如表1所示。

3? 討論

妊娠期母體對(duì)胎兒的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)傳遞和支持是通過(guò)胎盤(pán)實(shí)現(xiàn)的[3]。有研究顯示，母體通過(guò)胎盤(pán)為胎兒提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)時(shí)，除單純的擴(kuò)散作用外，還能夠通過(guò)胎盤(pán)組織的細(xì)胞膜中載體蛋白進(jìn)行胎兒生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)[4]。其中，協(xié)助長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族（FATPs）、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)酶（FAT/CD36）、跨膜脂肪酸結(jié)合蛋白（FABPpm），都是實(shí)現(xiàn)妊娠期通過(guò)胎盤(pán)從母體向胎兒提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝過(guò)程中具有協(xié)助作用的載體蛋白類(lèi)型。其中，有研究顯示[5]，通過(guò)建立高脂飼料喂養(yǎng)肥胖孕鼠模型，并對(duì)其胎盤(pán)組織中的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)分析顯示，其胎盤(pán)組織中的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP1參與脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)，而FATP4和CD36則與脂肪酸氧化有關(guān)。并且對(duì)該表達(dá)變化分析得出可能與孕鼠模型合并肝內(nèi)膽汁淤積的發(fā)生有關(guān)。該研究中還指出，孕鼠模型的胎盤(pán)組織中脂肪酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)不僅具有單純擴(kuò)散作用，而且還能夠利用長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合進(jìn)行脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)，其中，脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)水平能夠反映出不同的脂肪酸運(yùn)輸與代謝能力[6]。

上文中，對(duì)該院收治的40例合并肝內(nèi)膽汁淤積與未合并肝內(nèi)膽汁淤積孕婦的胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比顯示，觀察組孕婦FATP4表達(dá)水平與對(duì)照組相比明顯降低，而CD36以及FABP1的表達(dá)水平與對(duì)照組相比則明顯增加，由此可見(jiàn)，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積導(dǎo)致胎盤(pán)組織脂肪酸運(yùn)輸能力降低以及脂肪酸氧化代償性增高，從而引起孕婦胎盤(pán)組織中的有關(guān)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)水平變化。這是由于脂肪酸作為機(jī)體內(nèi)的最大能量?jī)?chǔ)存，能夠通過(guò)β一氧化途徑在應(yīng)激反應(yīng)時(shí)對(duì)能量生成及其提供產(chǎn)生作用影響，而脂肪酸的分解代謝完全是氧化的，胎兒大量的能量需求使母體代謝轉(zhuǎn)向酮體生成，胎兒利用母體酮體生成脂肪并作為能量產(chǎn)物[7-8]。因此，對(duì)母體胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)的檢測(cè)，與對(duì)其脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力判斷，從而對(duì)其妊娠結(jié)局進(jìn)行合理預(yù)測(cè)并加強(qiáng)干預(yù)，以確保母嬰安全，具有十分積極的作用和意義[9]。

綜上所述，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積孕婦的胎盤(pán)組織中脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白FATP4、CD36以及FABP1表達(dá)水平均存在明顯變化，與其妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積導(dǎo)致胎盤(pán)組織脂肪酸運(yùn)輸能力降低以及脂肪酸氧化代償性增高有一定的關(guān)系。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 徐珊，宋麗華，張小菜，等.護(hù)肝利膽湯加減聯(lián)合熊去氧膽酸治療妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥療效觀察[J].海南醫(yī)學(xué)，2019，30（15）：1924-1927.

[2]? 徐鋒，陳鈺，孟西娜，等.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者胎盤(pán)ERp29、PRDX6表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼保健，2019，34（4）：916-918.

[3]? 陳芳，趙愛(ài)民，肖海望，等.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥與母體免疫失衡的相關(guān)性[J].山西醫(yī)藥雜志，2017，46（13）：1621-1623.

[4]? 葉云飛，蒙文霞，陳瀅，等.STAT3在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦胎盤(pán)中的表達(dá)及意義[J].重慶醫(yī)學(xué)，2019，48（11）：1866-1869.

[5]? 李曉林.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦胎盤(pán)組織NF-κB、IL-17和TLR4表達(dá)與妊娠結(jié)局的關(guān)系研究[J].中國(guó)婦幼保健，2018，33（22）：5092-5096.

[6]? 倪惠華，曉霄，李娟，等.S-腺苷蛋氨酸聯(lián)合利膽藥對(duì)妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的療效分析[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2018，28（26）：100-103.

[7]? 楊麗娟，葛靜，潘華，等.HLA-F在ICP患者胎盤(pán)組織中的表達(dá)及意義[J].河北醫(yī)藥，2017，39（23）：3539-3541.

[8]? 闞延婷，楊永峰.膽汁淤積性肝病相關(guān)基因及其在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥中的作用[J].臨床肝膽病雜志，2019，35（7）：1439-1443.

[9]? 劉莉娜，武偉琦.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦臨床特點(diǎn)及妊娠結(jié)局分析[J].中國(guó)臨床新醫(yī)學(xué)，2017，10（7）：668-671.

（收稿日期：2020-02-20）