袁 振，廖榮君，邢 剛，劉衛(wèi)東，劉汝成，馮殿齊*

（1.山東鈣康生物工程有限公司，山東 泰安271000；2.泰安市徂徠山林場(chǎng)，山東 泰安271000）

歐李是我國特有的樹種，是薔薇科櫻桃屬一種矮小的灌木果樹。含有豐富的原花青素、鈣、硒等成分，營養(yǎng)價(jià)值很高，開發(fā)利用的市場(chǎng)前景廣闊[1]。因此，市場(chǎng)對(duì)歐李苗的需求也日益增加。為此，山東鈣康生物工程有限公司于2016年組織精干力量赴甘肅、承德、山西農(nóng)大、濟(jì)南市中區(qū)等單位學(xué)習(xí)考察，引進(jìn)和應(yīng)用良種種子育苗及野生選擇等方法，選擇了部分優(yōu)系，在肥城市安駕莊鎮(zhèn)中國植物鈣產(chǎn)業(yè)園內(nèi)進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)。通過初選與復(fù)選，初步篩選出4 個(gè)優(yōu)系，暫定名為TSO4 號(hào)、TSO5 號(hào)、TSO7 號(hào)、TSO11號(hào)。然后，在泰山區(qū)花樣年華植物鈣研究院組培中心進(jìn)行了組培進(jìn)行試驗(yàn)。常規(guī)組培問題多，生根難，污染率高，容易產(chǎn)生畸形苗，生產(chǎn)成本高等[2]，因此，急需研究出高效又能夠節(jié)約成本的方法。

植物的無糖組織培養(yǎng)技術(shù)也叫光自養(yǎng)組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)由日本千葉大學(xué)的古在豐樹教授發(fā)明，是利用二氧化碳代替培養(yǎng)基中的糖作為組培苗生長(zhǎng)的碳源進(jìn)行組織培養(yǎng)的技術(shù)。該技術(shù)具有培養(yǎng)成本低、苗子健壯、生長(zhǎng)快速、移栽成活率高等優(yōu)點(diǎn)[3]。目前該技術(shù)在草本植物中研究較多，在木本植物中鮮有報(bào)道[4]。

本研究以歐李繼代苗為研究對(duì)象，創(chuàng)新地利用無糖培養(yǎng)技術(shù)，快速促進(jìn)根系的形成，旨在探索一種降低成本的歐李組培快繁辦法。

1 材料與方法

1.1 材料

花樣年華景區(qū)云農(nóng)集團(tuán)實(shí)驗(yàn)室中的TSO4 號(hào)、TSO5 號(hào)、TSO7 號(hào)以及TSO11 號(hào)繼代苗，高度3.0 ±0.5 cm，在無糖條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)，用有糖培養(yǎng)進(jìn)行對(duì)照。

1.2 方法

1.2.1 無糖培養(yǎng)方法

采用MS 培養(yǎng)基和WPM 培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中除去了有機(jī)物，以營養(yǎng)液的形式加入，以蛭石作為培養(yǎng)基質(zhì)。所用培養(yǎng)容器的體積是6.5 L，強(qiáng)制換氣。在轉(zhuǎn)苗之前，首先對(duì)培養(yǎng)基質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，然后將培養(yǎng)基質(zhì)和培養(yǎng)液在培養(yǎng)容器內(nèi)混合（混合比例是1:1），在超凈臺(tái)進(jìn)行1h 的紫外線殺菌之后，進(jìn)行轉(zhuǎn)苗。轉(zhuǎn)苗的時(shí)候，切除底部的愈傷組織，單株接入，每株保留4 片完好的葉。每個(gè)培養(yǎng)容器接入鈣果苗100 棵。0-7d，光照度3000～6000lx，光照時(shí)間每天12 h；7 d后光照時(shí)間增加為每天14 h，二氧化碳濃度為800～1400ppm，補(bǔ)充二氧化碳的時(shí)間和光照同步進(jìn)行。

設(shè)置有糖生根培養(yǎng)對(duì)照：1/2MS 培養(yǎng)基，激素同無糖營養(yǎng)液，糖20 g/L，瓊脂7 g/L，小容器（體積280 mL），光照度3000～6000lx，光照時(shí)間為每天14 h。

在整個(gè)培養(yǎng)期間，培養(yǎng)室的溫度是25±3℃，相對(duì)濕度60%左右，培養(yǎng)30 d 后出苗。試驗(yàn)共設(shè)計(jì)5種培養(yǎng)液（對(duì)照組是相同激素濃度的培養(yǎng)基），種類如表所示，25 d 后觀測(cè)記錄生根率。

無糖培養(yǎng)之后去溫室移栽，移栽到不同基質(zhì)的營養(yǎng)缽里馴化。馴化30 d 后，對(duì)移栽成活率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。溫室的環(huán)境條件是：溫度為20℃～30℃，濕度為40%～80%，光照度為5000～8000lx，有遮陽網(wǎng)、降溫水簾、水電暖氣、霧化噴頭。

日常護(hù)理情況：移栽時(shí)，為了避免病菌引起病害，歐李幼苗取出后用0.1%的高錳酸鉀溶液浸泡1～2 分鐘后取出。根據(jù)氣溫和濕度對(duì)大棚進(jìn)行換氣管理，揭開拱棚的薄膜進(jìn)行通風(fēng)透氣。根據(jù)大棚空氣濕度和土壤濕度進(jìn)行水分管理。根據(jù)幼苗的生長(zhǎng)狀況進(jìn)行施肥管理。對(duì)幼苗每周噴施一次植物營養(yǎng)液。對(duì)病蟲害的防治，以防為主，噴施藥劑托布津，一旦出現(xiàn)病蟲害，噴施殺蟲藥。

表1 無糖培養(yǎng)營養(yǎng)液設(shè)計(jì)方案

表2 有糖培養(yǎng)對(duì)照設(shè)計(jì)方案

1.2.2 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)過整理，采用Excel 2007 進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 傳統(tǒng)生根培養(yǎng)基（有糖的）對(duì)照試驗(yàn)

有糖對(duì)照的試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示：

圖1 有糖培養(yǎng)的生根率

有糖培養(yǎng)的根系生長(zhǎng)情況是根白，無次生根。從生根率上看，TSO4 號(hào)苗最優(yōu)配方是處理2，生根率是71.0%；TSO5 號(hào)苗最優(yōu)配方是處理4，生根率是70.2%；TSO7 號(hào)苗最優(yōu)配方是處理1，生根率是69.1%；TSO11 號(hào)最優(yōu)配方是處理4，生根率是72.1%。此外，配方中使用NAA 的小苗，生出的根粗短，狀如鳥爪。

2.2 無糖生根配方試驗(yàn)

歐李TSO4 號(hào)使用不同培養(yǎng)基和激素濃度對(duì)生根的影響，結(jié)果如表3所示。

表3 4 號(hào)苗無糖生根培養(yǎng)效果

由表3可知，TSO4 號(hào)苗無糖培養(yǎng)的生根率在55%以上，最高可以達(dá)到92.5%，且根系粗壯，生長(zhǎng)狀況良好（圖2）。適合TSO4 號(hào)苗生長(zhǎng)的最佳營養(yǎng)液是配方1：1/2MS 大量+ 0.1 mg/L NAA+ 0.1 mg/L IAA。

圖2 無糖培養(yǎng)對(duì)歐李苗生根的影響

歐李TSO5 號(hào)使用不同培養(yǎng)基和激素濃度對(duì)生根的影響，結(jié)果如表4所示。

表4 TSO5 號(hào)苗無糖生根培養(yǎng)效果

由表4可知，TSO5 號(hào)苗無糖培養(yǎng)的生根率在50%以上，最高可以達(dá)93.8%，且根系粗壯，生長(zhǎng)狀況良好。適合TSO5 號(hào)苗生長(zhǎng)的最佳營養(yǎng)液是配方2：1/4MS+ 0.5 mg/L IBA。

歐李TSO7 號(hào)使用不同培養(yǎng)基和激素濃度對(duì)生根的影響，結(jié)果如表5所示。

表5 TSO7 號(hào)苗無糖生根培養(yǎng)效果

由表5可知，TSO7 號(hào)苗無糖培養(yǎng)的生根率在70%以上，最高可以達(dá)到90.9%，且根系粗壯，生長(zhǎng)狀況良好。適合TSO7 號(hào)苗生長(zhǎng)的最佳營養(yǎng)液是配方4：1/2WPM 大量+ 0.2mg/L NAA。

表6 TSO 11 號(hào)苗無糖生根培養(yǎng)效果

由表6可知，TSO11 號(hào)苗無糖培養(yǎng)的生根率在70%以上，最高可以達(dá)到86.1%，且根系粗壯，生長(zhǎng)狀況良好。適合TSO11 號(hào)苗生長(zhǎng)的最佳營養(yǎng)液是配方4：1/2WPM 大量+ 0.2mg/L NAA。

由以上諸表可知，無糖培養(yǎng)的生根率，TSO4 號(hào)苗可以達(dá)到92.5%，根系發(fā)達(dá)，有大量的次生根形成，植株健壯；TSO5 號(hào)苗可以達(dá)到93.8%，根系發(fā)達(dá)，有大量的次生根形成，植株健壯；TSO7 號(hào)苗可以達(dá)到90.9%，根系發(fā)達(dá)，有大量的次生根形成，植株健壯；TSO11 號(hào)苗可以達(dá)到86.1%，根系發(fā)達(dá)，有次生根，植株健壯；對(duì)照有糖培養(yǎng)，無糖培養(yǎng)的生根率要高，植株健壯，根系比較發(fā)達(dá)，整體效果要好。

2.3 移栽成活率的比較試驗(yàn)

無糖與有糖培養(yǎng)比較歐李移栽成活率的差異如圖3。

圖3 移栽成活率

由圖3可知，無糖培養(yǎng)的移栽成活率能達(dá)到80%以上，有糖培養(yǎng)的移栽成活率在60%以上，其中TSO7 號(hào)無糖苗的移栽成活率最高，達(dá)到85.7%，TSO4 號(hào)有糖苗的移栽成活率最低，為62.5%，對(duì)TSO4 號(hào)苗來說，與對(duì)照組比較，無糖移栽成活率高出19%；TSO11 號(hào)苗的無糖移栽成活率也能達(dá)到13.6%。不過，對(duì)于TSO5 號(hào)苗和TSO7 號(hào)苗，移栽成活率的差距并不明顯。

3 討論

進(jìn)行組培快繁工廠化育苗能否起到良好的經(jīng)濟(jì)效益，與組培工廠的經(jīng)營管理有很大的關(guān)系，降低生產(chǎn)成本是增強(qiáng)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，提高組培苗經(jīng)濟(jì)效益的可行措施。降低生產(chǎn)成本的主要途徑有：降低污染率，提高增殖系數(shù)、生根率和移栽成活率，提高操作的熟練程度，節(jié)約水電開支等辦法。跟有糖培養(yǎng)比較，無糖培養(yǎng)省去了有機(jī)物質(zhì)，用蛭石代替了價(jià)格高的瓊脂粉，節(jié)約了原材料成本。同時(shí)在無糖培養(yǎng)中，很少有污染的情況，可以生產(chǎn)出更多高品質(zhì)的歐李組培苗。不需要進(jìn)行煉苗，移栽成活率較高。

本次研究在無糖容器里還可以偶爾見到一兩株小苗長(zhǎng)毛的現(xiàn)象，污染率極低。與常規(guī)組培相比，成本大大降低。由于培養(yǎng)液，培養(yǎng)基質(zhì)等條件較為合適，歐李組培苗達(dá)到生根率93.8%，移栽成活率85.7%的效果，至于改變配方等因素能否進(jìn)一步提高生根率，還需要深入研究。

4 結(jié)論

歐李TSO4 號(hào)組培苗生根的最優(yōu)培養(yǎng)液：1/2MS大量+ 0.1 mg/L NAA+ 0.1 mg/L IAA。

歐李TSO5 號(hào)組培苗生根的最優(yōu)培養(yǎng)液：1/4MS+ 0.5 mg/L IBA。

歐李TSO7 號(hào)組培苗生根的最優(yōu)培養(yǎng)液：1/2WPM 大量+ 0.2 mg/L NAA。

歐李TSO11 號(hào)組培苗生根的最優(yōu)培養(yǎng)液：1/2WPM 大量+ 0.2 mg/L NAA。

無糖生根的移栽成活率TSO4 號(hào)苗達(dá)到81.8%，TSO5 號(hào)苗達(dá)到83.3%，TSO7 號(hào)苗達(dá)到85.7%，TSO11 號(hào)苗達(dá)到84.3%。