□ 胡 月 王志富 公安縣公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉是食品中較為常見(jiàn)的食品添加劑，也是食品檢驗(yàn)中的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。按照GB5009.28—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》[1]國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法的條件進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)效率并不能達(dá)到最優(yōu)，需根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。通過(guò)添加不同的緩沖鹽[2]或者梯度洗脫[3，4]的方式對(duì)這3種添加劑以及更多組分進(jìn)行同時(shí)測(cè)定的文獻(xiàn)有很多。本實(shí)驗(yàn)在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.28—2016的基礎(chǔ)上，探討流動(dòng)相組分及比例對(duì)這3種添加劑保留時(shí)間的影響，以提高日常檢測(cè)效率，為相關(guān)檢測(cè)提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

苯甲酸、山梨酸、二水糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1 mg/mL：壇墨質(zhì)檢；甲醇（色譜純）：J.T.Baker；乙酸銨（色譜純）：C.N.W；甲酸（色譜純）：J.T.Baker；超純水。

高效液相色譜儀：Waters e2695，配2489紫外檢測(cè)器；超聲波清洗機(jī)：寧波新芝 SB25—12DTD。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters symmetry C18色譜柱，（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；流動(dòng)相1：不同體積比的甲醇和0.02 mol/L乙酸銨溶液；流動(dòng)相2：不同體積比的甲醇和甲酸—乙酸銨溶液（2 mmol/L甲酸+0.02 mol/L乙酸銨）；流速：1 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確移取1 mL上述3種標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，超純水定容，配制成100 μg/mL的3種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，臨用前用超純水稀釋成10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相為不同體積比的甲醇和乙酸銨溶液

按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.28—2016中甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液比例為5∶95時(shí)，按1.2中的色譜條件進(jìn)行分析，3種物質(zhì)分離效果比較好，但出峰時(shí)間較長(zhǎng)，分別為苯甲酸9.018 min、山梨酸11.225 min、糖精鈉 15.246 min（圖 1）。

當(dāng)樣品量較大時(shí)，在該流動(dòng)相比例條件下檢測(cè)效率較低，故分析了不同體積比的甲醇和乙酸銨溶液對(duì)3種物質(zhì)的保留時(shí)間影響。結(jié)果顯示，隨著甲醇比例的提高，3種物質(zhì)的保留時(shí)間不斷前移。甲醇比例在7%～10%時(shí)，山梨酸和糖精鈉的保留時(shí)間比較接近甚至無(wú)法分離；甲醇比例提高到10%以上時(shí)，3種物質(zhì)的出峰順序有所改變，其中糖精鈉的出峰順序移至山梨酸之前；甲醇比例在12%和13%時(shí)分離效果比較好，其中甲醇與乙酸銨溶液比例為12∶88時(shí)，保留時(shí)間分別為苯甲酸6.292 min、糖精鈉7.394 min、山梨酸8.520 min（圖2）。當(dāng)甲醇比例提高到15%時(shí)，苯甲酸和糖精鈉的保留時(shí)間比較接近，分離效果不理想（圖3）。

2.2 流動(dòng)相為不同體積比的甲醇和甲酸-乙酸銨溶液

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.28—2016中提到，當(dāng)樣品中基質(zhì)較為復(fù)雜，存在干擾峰時(shí)，可以采用加入甲酸的流動(dòng)相來(lái)測(cè)定，故本實(shí)驗(yàn)也研究了流動(dòng)相中加入甲酸后對(duì)3種物質(zhì)保留時(shí)間的影響。

圖1 甲醇與0.02 mol/L乙酸銨比例為5∶95時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 甲醇與乙酸銨比例為12∶88時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖3 甲醇與乙酸銨比例為15∶85的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甲醇比例為5%時(shí)，3種物質(zhì)的分離效果較好，其中山梨酸出峰最慢，保留時(shí)間較長(zhǎng)，分別為苯甲酸12.516 min、糖精鈉15.151 min、山梨酸 23.124 min（圖 4）。

圖4 甲醇與甲酸-乙酸銨比例為5∶95的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

當(dāng)甲醇比例提高至10%以上時(shí)，糖精鈉最先出峰，甲醇比例接近10%為15∶85時(shí)，分離效果較好，保留時(shí)間分別為糖精鈉5.317 min、苯時(shí)，糖精鈉和苯甲酸分離效果不好，甚至出峰時(shí)間重疊（圖5）。

圖5 甲醇與甲酸-乙酸銨比例為10∶90時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

當(dāng)甲醇與甲酸—乙酸銨溶液比例甲酸6.418 min、山梨酸10.122 min（圖 6）。

圖6 甲醇與甲酸-乙酸銨比例為15∶85的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

3 結(jié)論

流動(dòng)相中未加甲酸時(shí)，隨著甲醇比例的提高，3種組分的出峰順序會(huì)由苯甲酸、山梨酸、糖精鈉變化為苯甲酸、糖精鈉、山梨酸，且甲醇與乙酸銨溶液體積比為12%～13%時(shí)，分離效果良好；流動(dòng)相中加入甲酸時(shí)，甲醇比例提高后，出峰順序由苯甲酸、糖精鈉、山梨酸變化成糖精鈉、苯甲酸、山梨酸，且甲醇與甲酸—乙酸銨溶液體積比為15∶85時(shí)，分離效果較好。