馬文俊 劉有菊

【摘要】目的：研究紅珍珠牌雪之健膠囊的急性毒性和遺傳毒性實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)其食用安全性。方法：依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)、遺傳毒性實(shí)驗(yàn)（Ames實(shí)驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和精子畸形實(shí)驗(yàn)）。結(jié)果：小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)經(jīng)口最大耐受劑量（MTD）>30 g/kg·bw，屬無毒級(jí)。Ames實(shí)驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性，表明受試物無致突變作用。結(jié)論：紅珍珠牌雪之健膠囊急性毒理分級(jí)屬無毒級(jí)，無遺傳毒性，在本實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，紅珍珠牌膠囊屬于安全性保健食品。

【關(guān)鍵詞】紅珍珠牌雪之健膠囊;急性毒性;遺傳毒性

[中圖分類號(hào)]R114 ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A ? [文章編號(hào)]2096-5249（2020）15-000-03

紅珍珠牌雪之健膠囊根據(jù)青藏高原民間驗(yàn)方“三果養(yǎng)生膏”配方，應(yīng)用傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)的結(jié)合，古法炮制與現(xiàn)代工藝的結(jié)合，精選海拔3000米左右青藏高原特色草本植物白刺果、沙棘果、柴達(dá)木枸杞果等為主要原料制成的保健食品。這些生物資源在醫(yī)藥、保健食品、保健飲料和保健化妝品等方面具有廣泛的用途。高血脂、高血壓、動(dòng)脈硬化、冠心病及免疫功能低下是國(guó)內(nèi)外常見的心血管疾病。紅珍珠牌雪之健膠囊是以白刺果、沙棘果、枸杞果等為基礎(chǔ)原料外，配方中的決明子、紅花、葡萄籽等均屬藥食兩用的天然物質(zhì)，在中醫(yī)臨床和民間藥食治療高脂血癥方面有廣泛的應(yīng)用，這些配料均有調(diào)節(jié)血脂保健功效研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，利用中藏藥、營(yíng)養(yǎng)保健食品研究的新方法、新技術(shù)和現(xiàn)代分析測(cè)試，證明了降血脂保健功能，同時(shí)明確了降血脂的功能因子（即有效成分），為廣大心血管疾病患者提供安全無副作用，純天然的綠色藥物和保健食品。研究通過紅珍珠牌雪之健膠囊對(duì)小鼠經(jīng)口急性毒性和遺傳毒性試驗(yàn)，為進(jìn)一步開發(fā)紅珍珠牌雪之健膠囊保健食品應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)及參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 受試樣品紅珍珠牌“雪之健”膠囊，由金訶藏藥股份有限公司提供。樣品內(nèi)容物呈棕褐色，樣品用蒸餾水配制成所需濃度液體。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境昆明種小鼠，清潔級(jí)，體重18-22g，動(dòng)物合格證號(hào)：青醫(yī)動(dòng)字第001號(hào)，由青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)進(jìn)后首先于恒溫恒濕的動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)3天，單籠飼養(yǎng);實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB1429-2010。

1.1.3 菌株鼠傷寒沙門氏菌TA 97a、TA 98、TA 100、TA 102。由上海市疾病預(yù)防控制中心提供。

1.1.4 主要儀器超凈工作臺(tái)、電子天平、壓力蒸汽滅菌器、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）、培養(yǎng)箱、恒溫電熱鼓風(fēng)干燥箱。

1.2方法

1.2.1急性毒性實(shí)驗(yàn)[1] 按最大耐受量試驗(yàn)方法進(jìn)行，取健康昆明種小鼠50只，體重18-22g，雌雄各半。于正式試驗(yàn)前晚禁食，次日，用經(jīng)過三次預(yù)試后確定的30g/kg劑量，經(jīng)口灌胃給藥后，觀察兩周，記錄小鼠中毒表現(xiàn)、死亡情況。

1.2.2 Ames實(shí)驗(yàn)[2] 按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）第一部分毒理學(xué)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)、鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體酶（Ames實(shí)驗(yàn)）方法進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.3小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)[3] 健康KM種小鼠50只，體重25-30g，隨機(jī)分為5組，雌雄各半，10只/組。根據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)LD50值，設(shè)3個(gè)受試物組（1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50）即15.00、7.50、3.75g/（kg·BW）3個(gè)樣品劑量組，分別稱取紅珍珠牌雪之健膠囊15.00、7.50、3.75g，加蒸餾水20mL溶解待用，另設(shè)40 mg/（kg·BW）環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照組、離子水陰性對(duì)照組;給藥后各組均間隔24h灌胃0.20mL/10g體重，于末次灌胃給藥后6h脫頸椎處死，取雙側(cè)股骨，滴加1滴小牛血清，制成細(xì)胞懸液，涂片制片，油鏡下選擇細(xì)胞分散好、形態(tài)完整、染色良好部位，按一定順序進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)嗜多染紅細(xì)胞（PCE）及帶微核的細(xì)胞（MNPCE）共1000個(gè)，每只小鼠計(jì)數(shù)微核的千分率。

1.2.4小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)[4] 選25-30g健康KM種雄性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，給藥組按1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50，40mg/kg·bw環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組（離子水），各組雄性小鼠按照相應(yīng)的劑量，分別連續(xù)灌胃5d后，喂養(yǎng)觀察30d。于第35d處死小鼠，取兩側(cè)副睪的精子涂片精子，按規(guī)定涂片制成。觀察計(jì)數(shù)各組小鼠完整精子1000個(gè)，計(jì)算精畸率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用spss17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（_x±s）形式表示。

2 結(jié)果

2.1紅珍珠牌雪之健膠囊對(duì)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果 經(jīng)觀察兩周，雌雄兩組動(dòng)物均未發(fā)現(xiàn)中毒癥狀、異常反應(yīng)，生長(zhǎng)良好，觀察期未見死亡。于實(shí)驗(yàn)?zāi)幩缹?shí)驗(yàn)小鼠，解剖經(jīng)肉眼觀察心、肝、脾、肺腎等主要臟器，未發(fā)現(xiàn)臟器異常。紅珍珠牌雪之健膠囊對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)LD50>30g/kg·bw。根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬無毒級(jí)，見表1。

2.2紅珍珠牌雪之健膠囊Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表2、表3可見，經(jīng)兩次Ames實(shí)驗(yàn)，5個(gè)劑量組回變菌落數(shù)與自發(fā)回變菌落數(shù)相比較，四種菌株再加與不加S-9的條件下，均無顯著性差異;而陽(yáng)性對(duì)照回變菌落數(shù)高于陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)的2倍以上。表明紅珍珠牌“雪之健”膠囊無致突變作用。

2.3小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn) 由表4可見，紅珍珠牌雪之健膠囊高、中、低劑量組與空白對(duì)照組比較，微核千分率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而環(huán)磷酰胺組微核率則顯著高于空白對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。表明紅珍珠牌雪之健膠囊對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率未見明顯影響，檢測(cè)結(jié)果為陰性。

2.4小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn) 由表5可見，紅珍珠牌雪之健各劑量組小鼠精子畸形率與空白組比較，小鼠精子畸形率無顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺組與空白組比較，小鼠精子畸形率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

3 討論

高脂血癥是各種原因?qū)е碌难逯心懝檀蓟蚋视腿ニ缴叩囊活惣膊?。?0年來研究表明，血脂異常是我國(guó)人群心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素之一，人群血脂水平和血脂異常患病率在快速增高，人群血脂水平和血脂異?；疾÷试诳焖僭龈?，經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)人群、中老年人群患病相對(duì)較高。攝入太多食物的脂肪，這些因素直接導(dǎo)致人體新陳代謝速度減慢，血液流速會(huì)減慢，血黏度迅速升高，造成心腦供血不足，如果不及時(shí)防范、調(diào)理、將會(huì)引發(fā)冠心病、高血壓、腦血栓等心腦血管疾病。甘油三脂、膽固醇、低密度脂蛋白的升高，均能導(dǎo)致血液黏稠度過高。目前降脂的西藥雖然較多，但有一定的不良反應(yīng)，服藥期間還應(yīng)檢測(cè)其副作用。

紅珍珠牌雪之健膠囊配方原料，唐古特白刺果實(shí)和種子富含生物堿、黃酮類、氨基酸等生物活性成分，其中總黃酮的含量為1.46%～1.65%[5]?！恫蒯t(yī)精髓與醫(yī)學(xué)寶典》記載：“白刺果可入藥，健脾胃、滋補(bǔ)強(qiáng)身、舒筋活血，主治肺病和胃病，果核可榨油”。其果實(shí)富含的有益成分，能有效降低大鼠的血脂含量[6]。藥理研究及臨床發(fā)現(xiàn)，配方中的枸杞子有效成分-枸杞多糖、紅花提取物、沙棘中的黃酮類、決明子蒽醌類對(duì)高脂血癥模型動(dòng)有降脂作用，其中有效成分可有效降低血脂膽固醇和甘油三脂水平，對(duì)心腦血管疾病起到一定的預(yù)防作用[7-8]。葡萄籽含有多酚類物質(zhì)（GPS）：兒茶素類和原花青素類，不飽和脂肪酸，粗蛋白、氨基酸和維生素A、E、D、K、P及多種微量元素;其葡萄籽提取物原花青素可降低血脂水平、預(yù)防心腦血管疾病[9]。研究提示，實(shí)驗(yàn)條件下，紅珍珠牌雪之健膠囊對(duì)小鼠經(jīng)口急性毒性最大耐受量（MTD），雌、雄小鼠經(jīng)灌胃給予金訶牌雪益康膠囊30g/kg，均未出現(xiàn)死亡、異常情況，解剖肉眼觀察各個(gè)臟器未發(fā)現(xiàn)明顯異常，按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定，金訶牌雪益康膠囊屬無毒級(jí);且遺傳毒性試驗(yàn)均未見致突變作用。

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基金項(xiàng)目：藏藥新藥開發(fā)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（NO.2015DQ870717）;青海省藏藥新藥開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（NO.2017-ZJ-Y15）

作者簡(jiǎn)介：馬文?。?984-），男，在讀碩士，助理研究員，主要從事藏藥新藥及保健食品的研究開發(fā)。